缬沙坦对自发性高血压大鼠肾脏核因子-κB 蛋白表达的影响

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR) 肾组织NF-κB 原位表达变化以及AT₁ 受体阻断剂缬沙坦对其的影响。方法:16 只SHR 随机分成SHR组和SHR 加缬沙坦药物干预组(1 mg°kg^-1°d^-1),另8 只WKY 大鼠为正常对照组。分别在实验第2、4、6、8 周末测定大鼠尾动脉收缩压(SBP);实验结束取各组大鼠血浆测定血浆中肾素、血管紧张素II(AngII) 水平;取出各组大鼠两侧肾脏组织, 分别运用免疫组化原位测定肾组织中NF-κB 蛋白表达, 并进行半定量分析。结果:SHR 组SBP 和血浆中肾素活性以及AngII 水平与WKY 大鼠相比显著增高, 缬沙坦治疗组SBP 显著降低, 但血浆中肾素活性以及AngII 水平明显高于SHR 组和WKY 组。在蛋白水平,WKY 组大鼠肾组织中NF-κB 表达较低, SHR 组肾小球和肾小管中NF-κB 高度表达;使用缬沙坦干预后, NF-κB 表达显著降低。结论:在蛋白水平对NF-κB 表达的调控可能参与缬沙坦的降血压效应和肾保护作用。     

胎盘组织核因子-κB与妊娠并发症关系研究进展

核因子-κB（NF-κB）是一种细胞内重要的转录因子,调控包括炎症、凋亡在内多种基因的表达,在胎盘中分布广泛。本文对胎盘组织中NF-κB与先兆子痫、HELLP综合征和胎膜早破等妊娠并发症的关系研究进行综述,概括了胎盘NF-κB在这些妊娠并发症发生过程中的作用以及依赖NF-κB途径治疗相关疾病的研究进展,为胎盘相关疾病的深入研究奠定基础,为妊娠并发症疾病的诊治提供新思路。     

褪黑素对大鼠应激性溃疡的保护及胃粘膜核因子-κB 活性的影响

目的:探讨褪黑素(melatonin,MT) 对大鼠应激性溃疡的保护作用及对胃粘膜核因子-κB(NF-κB) 活化的影响, 阐明MT 的作用机制。方法:采用浸水-束缚(WIR) 应激实验复制大鼠应激性溃疡模型。应激前30 min, MT 5、20 mg°kg^-1组和应激组大鼠分别腹腔注射MT 5、20 mg°kg^-1 和等体积生理盐水。应激6 h 后, 观察各组大鼠胃粘膜病变清况, 对溃疡指数(UI) 进行评分, 同时检测各组大鼠胃粘膜内丙二醛(MDA) 含量和NF-κB 活化清况。结果:WIR 应激6 h 后, 与应激组比较, MT 5、20 mg°kg^-1 组大鼠胃粘膜病变明显减轻, UI 显著降低(P<0.01), 胃粘膜MDA 水平和NF-κB 活性也显著下降(P<0.01) 。MT 20 mg°kg^-1组大鼠UI(P<0.05) 和胃粘膜MDA水平(P<0.01) 均显著低于MT 5 mg°kg^-1 组, 但两组间胃粘膜NF-κB 活性无显著性差异(P>0.05) 。结论:MT 可有效预防应激性溃疡的发生, 其机制可能与MT 抑制氧化应激诱导的NF-κB 过度活化有关。     

班布特罗对哮喘豚鼠淋巴细胞核因子-κB 表达的影响

目的:探讨β2-受体激动剂班布特罗(bambuterol)对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF) 淋巴细胞核因子-κB (NF-κB) 表达的影响。方法:用卵白蛋白(ovalbumin, OA) 建立豚鼠哮喘模型, BALF 分离淋巴细胞, 采用免疫组化染色方法观察淋巴细胞NF-κB 表达, 酶联免疫吸附(ELISA) 法测定淋巴细胞胞浆IκB 含量及BALF 中白细胞介素-10(IL-10) 水平。结果:与模型组相比, 班布特罗可显著增加BALF 中IL-10 水平及淋巴细胞胞浆IκB 含量(P <0.05), 降低NF-κB 胞核阳性细胞百分比(P <0.05), 而且这一作用可被β2-受体阻断剂普奈洛尔拮抗;但IκB 含量及IL-10 水平仍低于正常对照组(P <0.05), NF-κB 胞核阳性细胞百分比仍高于正常对照组(P <0.05) 。Pearson 相关分析显示NF-κB 与IL-10 之间呈明显负相关关系(r =-0.570, P <0.01) 。结论:班布特罗通过抑制IκB 降解和增加IL-10 水平, 从而抑制淋巴细胞NF-κB 表达, 这可能是其抑制哮喘气道慢性炎症的机制之一。     

染料木黄酮对哮喘患者核因子-κB 表达和肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的: 探讨染料木黄酮对支气管哮喘患者外周血单个核细胞(PBMCs) 核因子-κB(NF-κB) 表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 分泌的作用。方法: 32 例支气管哮喘急性发作期患者及31 例健康对照者的PBMCs, 均分空白对照、地塞米松和染料木黄酮3 组进行研究。NF-κB 表达由免疫组化染色检测, TNF-α含量由放射免疫法测定。结果: 哮喘患者PBMCsNF-κB 胞核染色阳性率及培养上清TNF-α含量明显高于健康对照者(P<0. 01), 且二者呈显著正相关(P<0. 01) 。染料木黄酮抑制哮喘组NF-κB 高表达及TNF-α高分泌, 与哮喘空白对照组比较二者均有统计学意义(P<0. 01), 但其抑制作用弱于地塞米松, 且哮喘染料木黄酮组PBMCs NF-κB 胞核染色阳性率与TNF-α含量呈显著正相关(P<0. 01) 。结论: 哮喘患者NF-κB 表达增高, TNF-α分泌增多。染料木黄酮可抑制哮喘患者PBMCs NF-κB 的高表达及TNF-α的高分泌, 对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

参附注射液对大鼠急性缺血/再灌注损伤心肌核转录因子-κB 的影响

目的:探讨参附注射液保护大鼠心肌缺血/再灌注损伤作用与机理。方法:采用大鼠心脏左冠状动脉前降支缺血/再灌注模型, 缺血30 min, 再灌注60 min。24 只SD 大鼠随机分为3 组:假手术组;缺血/再灌注组;参附注射液组。酶联免疫吸附实验法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6) 浓度, 免疫印记法测心肌核转录因子-κB(NF-κB) 活性水平, 电镜观察心肌超微结构。结果:缺血再灌注组心肌NF-κB 的活性, 血浆TNF-a、IL-6 浓度较假手术组明显上升(P<0.01)。参附注射液组中上述指标与缺血/再灌注组比较均显著下降(P<0.01), 电镜下参附注射液组中心肌超微结构较缺血再灌注组明显减轻并接近正常。结论:参附注射液通过抑制缺血心肌中NF-κB 的活性, 降低促炎因子水平, 对心肌起保护作用。     

参附对大鼠肾缺血再灌注损伤NF-κB、细胞黏附分子-1、TNF-α表达的影响

目的:观察参附注射液(shenfu injection, SF)对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞黏附分子-1(ICAM-1)、NF-κB、TNF-α表达的影响。方法:采用切除右肾, 无创动脉夹夹闭左肾动脉45 min, 再灌注2 h制作在体肾缺血再灌注损伤模型。36 只SD 大鼠随机分为缺血再灌注组、假手术对照组、参附预处理组(10 mL/kg), 每组12 只。免疫组化法检测肾组织中NF-κB、ICAM-1 蛋白含量, 酶联免疫吸附实验(ELISA) 检测血清、肾组织中TNF-α的表达。结果:缺血再灌注组NF-κB、ICAM-1 表达和TNF-α含量明显高于假手术对照组(P<0.01) 。与缺血再灌注组相比, 参附预处理组NF-κB、ICAM-1 表达和TNF-α含量明显降低(P<0.01) 。结论:参附通过抑制NF-κB 的表达, 从而下调其下游的TNF-α、ICAM-1 的表达, 发挥其肾脏保护作用。     

大鼠核因子-κB 反义 RNA 腺病毒载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的: 构建表达大鼠核因子 κB(NF-κB, p65)反义 RNA 的重组腺病毒, 并测定受染血管平滑肌细胞(VSMCs) 中 NF-κB 基因的表达变化。方法: 从自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)的VSMCs 中提取总 RNA, 经 RT-PCR 方法获得含全部编码序列的NF-κB (p65) cDNA 片段(1 653 bp), 用TA 克隆技术插入 pMD18-T 载体, 构建 pMD18-T/1653 重组质粒, 并经酶切和 DNA 测序鉴定。以该质粒为模板, 经 PCR 获得 NF-κB(p65) 3' 端 269 bp 片段, 逆向插入 pcDNA3.1(+) 真核表达载体并置于CMV 启动子下。由此构建的 pcDNA3.1(+)/269 质粒含有NF-κB(p65) 的269 bp反义RNA 完整表达框。随后将该表达框克隆到入门载体 pENTR4, 构建重组质粒 pENTR4/CMV/269。使用同源重组方式在体外将该表达框重组到腺病毒载体 pAd/PL-DEST, 最终得到重组腺病毒质粒 pAd/CMV/269。线性化的重组腺病毒质粒转染 293细胞后产生的重组腺病毒颗粒用于VSMCs 的感染。Western Blot 测定感染前后VSMCs 中NF-κB(p65) 表达的变化情况。结果: 构建的pMD18-T/1653 重组质粒经过序列测定, 证实其包含大鼠NF-κB(p65) 基因的 1653 bp 片断;pcDNA3.1(+) /269、pENTR4/CMV/269、pAd/CMV/269 等重组质粒经内切酶消化或 PCR等方法鉴定无误;线性化的 pAd/CMV/269 转染 293 细胞后, 可产生完整 、具有感染性的重组腺病毒颗粒, 病毒在感染上清中的滴度 为 9.23 ×10⁹ pfu°ml^-1 (plaque form units permilliliter);Western Blot 检测证实, 感染重组腺病毒的VSMCs中的NF-κB(p65) 蛋白水平明显减少。结论: 构建了可表达大鼠 NF-κB (p65) 反义 RNA 的重组腺病毒 Ad/CMV/269, 该病毒在受染的 VSMCs 内具有下调 NF-κB (p65) 基因表达的生物学功能, 为后续的基因治疗研究奠定基础。     

心血管疾病中血管平滑肌细胞增殖与药物开发

血管平滑肌细胞增殖在高血压、动脉粥样硬化、再狭窄等心血管疾病的发生、发展中起着重要的作用。本文对血管平滑肌细胞胞外调控因素、胞内信号传导、细胞周期的研究现状及基于此三方面的药物研发进行综述。     

黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 探讨黄芪和当归不同配伍对大鼠血管内皮损伤后血管内膜增生中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化、细胞周期和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号途径的影响。方法: 雄性大鼠制备腹主动脉球囊导管损伤血管内皮模型,设计黄芪和当归单用及不同比例配伍,对内皮损伤模型大鼠灌胃给药,干预14 d后取腹主动脉,检测腹主动脉增生内膜中VSMC表型转化、细胞周期相关蛋白表达和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果: 球囊导管损伤主动脉内皮后,可引起VSMC表型转化及VSMC增殖从而导致血管内膜增生。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可增强血管增生内膜中平滑肌α肌动蛋白（SM α-actin)表达,抑制增生内膜中增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可抑制血管组织中cyclin D1、cyclin E表达的增高,抑制增生内膜中p-PI3K和p-Akt蛋白表达的升高。结论: 黄芪当归配伍对血管内皮受损后内膜增生具有抑制作用,其作用可能与其通过抑制血管内皮受损后PI3K/Akt信号通路激活,进而抑制VSMC表型转化和细胞增殖,从而发挥抗VSMC增殖的作用有关。     

IκB激酶β在肿瘤中的作用及其抑制剂的研究进展

近年来,IκB激酶β（inhibitor kappa B kinaseβ, IKKβ）在肿瘤发生发展过程中的作用逐渐被发现。IKKβ通过作用多种分子通路参与肿瘤细胞增殖、存活等过程,抑制IKKβ已被确定为治疗癌症有希望的手段。研究人员开发一系列IKKβ抑制剂,发现它们能够有效抑制肿瘤的生长,但目前尚无IKKβ抑制剂投入到临床上治疗癌症。在这篇综述中,我们将介绍IKKβ介导肿瘤发生发展及主要IKKβ抑制剂的研究进展。     

白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB 受体活化子配体表达的影响

目的 观察白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素(OPG) 及核因子κB 受体活化子配体(RANKL) 表达的影响。 方法 健康3 月龄雌性SD大鼠48 只, 按体重随机分为6 组:假手术组(SHAM) 、单纯卵巢切除组(OVX) 、17β-雌二醇组(ERT, 0.1 mg·kg^-1 d^-1) 。低、中、高剂量白藜芦醇组(RL 、RM、RH, 每天分别给予10 、20 、40 mg kg白藜芦醇) 。除假手术组外其余各组均切除双侧卵巢。术后1周开始给药, 给药8 周后处死所有大鼠, 测定股骨骨密度(BMD) 及骨生物力学性能:弹性模量(ELASTIC) 、刚度(STIFFNESS) 、最大应力(M-STRESS) 及最大承载力(M-LORD) 。用免疫组织化学染色方法观察股骨OPG 、RANKL 的表达。 结果 与OVX 组比较, 20 、40 mg·kg^-1 d^-1白藜芦醇均能上调股骨OPG 表达(P <0.05) 。与OVX组比较, 20 、40 mg·kg-1·d-1 白藜芦醇均下调RANKL 的表达, 改善股骨骨密度及生物力学性能(P <0.05) 。 结论 白藜芦醇在体内可上调骨组织中OPG 的表达, 下调RANKL 的表达, 这可能是其改善股骨骨密度及生物力学性能的作用机制。     

竹节参皂苷IVa甲酯对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞增殖影响及机制研究

目的: 探讨竹节参皂苷IVa甲酯（chikusetsu saponin iva methyl,CSIM）对血管紧张素II（angiotensin,Ang-II）刺激的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖的影响及机制研究。方法: 以大鼠血管平滑肌细胞为实验对象,建立Ang-II刺激的VSMCs增殖模型。MTT法检测CSIM对VSMCs的毒性;CCK-8法、BrdU法检测CSIM对VSMCs增殖的影响,划痕实验检测CSIM对VSMCs迁移力的影响,免疫蛋白印迹法检测PTEN、NF-κB蛋白表达水平。结果: 3 μmol/L的CSIM可显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖(P<0.05)与迁移(P<0.05),并伴随着PTEN蛋白的明显上调(P<0.05)及NF-κB蛋白表达的显著性降低(P<0.05)。结论: CSIM抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与上调PTEN蛋白,降低NF-κB蛋白表达有关。     

槲寄生通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡

目的:探讨槲寄生诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡所涉及的信号转导途径。方法:采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Westernblotting和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带;槲寄生可通过抑制IκBα蛋白磷酸化进而抑制NF-κB;槲寄生可增强羟基喜树碱对HCT116细胞诱导的凋亡作用。结论:槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制和诱导调亡作用,并且通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡。     

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究中华眼镜蛇毒F 组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法 用体外培养的血管平滑肌细胞, 观察F 组分对20 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H³-TdR) 掺入的影响, 用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 测定F 组分对20 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Proliferationcell nuclear antigen, PCNA) 表达的影响。 结果 F 组分呈浓度依赖性抑制20 %小牛血清引起的细胞对H³-TdR 掺入率和细胞内C-myc、PCNA 的表达, 其中30、100 mg·L^-1给药组与对照组比较有显著差异(P <0.05)。 结论 中华眼镜蛇毒F 组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA 的表达, 抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响

目的:探讨川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞, 经脂多糖诱导后, 分别应用噻唑蓝(MTT) 比色法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率和细胞周期的变化, 应用免疫细胞化学法检测细胞表面细胞间粘附因子-1 的表达。结果:川芎嗪呈剂量依赖性的抑制系膜细胞的增殖,并阻止细胞由G₀/G₁ 期进入S 期;使系膜细胞间粘附因子-1 的表达水平明显减少。结论:川芎嗪能抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖和降低细胞间粘附因子-1 表达水平。     

氧化甾醇抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及诱导其凋亡的作用1

目的: 研究 3β, 5α, 6β-胆甾烷三醇(Triol) 和25-羟胆固醇(25OH) 对 VSMC 增殖的影响, 探讨氧化甾醇在动脉粥样硬化(AS) 发病中的作用和意义。 方法: 培养和鉴定新西兰白兔主动脉 VSMC; 以含不同浓度的Triol 和 25OH 的培养液作用于VSMC 为实验组, 不含氧化甾醇或含胆固醇的培养液作为对照组。 VSMC 增殖及其代谢活性以 WST-1 测定, 细胞凋亡以光镜、透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL) 判断。结果: 在1×10^-9 ~ 1 ×10^-7mol^·L^-1 范围的 Triol 和 25OH 对VSMC 的 WST-1代谢活性无明显变化(P >0.05), 而≥1×10^-6mol^·L^-1 的氧化甾醇则使其代谢活性显著下降 (P <0.01); ≥20 ×10^-6 mol^·L^-1 的 Triol 和25OH 诱导VSMC 胞体皱缩变小、染色质在核周边浓集、核碎裂、 空泡和凋亡小体形成等超微结构变化; TUNEL 呈阳性反应。结论: 小剂量氧化甾醇无促进VSMC 增殖而较大剂量氧化甾醇可诱导 VSMC 凋亡。     

岩大戟内酯B通过阻断PI3K/Akt/NF-κB通路抑制结肠癌细胞的增殖和转移

目的：研究岩大戟内酯B（JB）对结肠癌HT-29细胞增殖和转移的抑制作用及其作用机制。方法：用不同浓度JB处理HT-29细胞,采用MTT法检测细胞增殖率;平板克隆实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞周期变化;划痕实验分析细胞的迁移能力;Transwell小室实验研究细胞的侵袭能力;免疫荧光法和Western blotting法检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白vimentin、锌指蛋白（Snail）1、Snail2、基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的表达;Western blotting法检测p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、NF-κB P65、p-NF-κB P65蛋白表达水平。100 μg/L IGF-1组和100 μg/L IGF-1+20 μmol/L JB组分别处理HT-29细胞,Western blotting法检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达变化。结果：JB抑制HT-29细胞增殖作用浓度依赖性,其作用24 h的IC50为52.68 μmol/L;JB呈浓度依赖性地降低HT-29细胞的克隆形成率（P<0.05）;与对照组相比,JB处理后的HT-29细胞G0/G1期比例显著增高,S期细胞比例明显下降;JB可显著抑制HT-29细胞的体外迁移、侵袭能力（P<0.05）;JB作用后的HT-29细胞E-cadherin蛋白水平升高,vimentin、Snail1、Snail2、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB P65蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;IGF-1+JB组p-PI3K、p-Akt、与p-NF-κB P65蛋白的表达水平较IGF-1组显著下降（P<0.05）。 结论：JB在体外能抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,抑制HT-29迁移和侵袭,调控上皮-间质转化（EMT）及MMPs,其机制可能与阻断PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的: 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F₂)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法: 30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F₂高剂量给药组(2 mg/kg)、 F₂中剂量给药组(1 mg/kg)、F₂低剂量给药组(0.5 mg/kg)。模型组及F₂各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后 7 d 取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果: 与假手术组比较,模型组术后 7 d 血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F₂剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F₂各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论: F₂能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。     

核因子-κB在气道上皮细胞的激活及N-乙酰半胱氨酸的影响

目的 探讨在人气道上皮细胞核因子-κB(NF-κB)的激活情况及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对NF-κB的作用机理。方法 应用炎前性细胞因子TNF-α刺激正常人气道上皮细胞株(16HBE)和肿瘤病人气道上皮细胞株(H292),利用Western-Blot免疫印迹电泳和ELISA实验检测NF-κB 的表达和IL-8的分泌水平。结果 TNF-α在体外能刺激激活人气道上皮细胞16HBE和H292的NF-κB表达,刺激后2~4h最高,6h后有所下降。随着TNF-α刺激量的增加,NF-κB活性也随之升高。TNF-α刺激气道上皮细胞后IL-8的分泌水平增加。加入NAC后可抑制NF-κB激活,IL-8分泌水平随之降低;同时发现NAC能以一种剂量依赖方式发挥作用。结论 NAC可通过阻断NF-κB激活的信号转导,参与细胞因子和炎症介质表达的转录调控,在呼吸系气道炎症控制中起着一定的作用。