青蒿琥酯对小鼠骨髓造血干祖细胞分化的抑制与毒性作用

目的 观察青蒿琥酯(artesunate, AS) 对小鼠骨髓造血干/祖细胞分化的影响。方法 取小鼠骨髓干细胞进行体外液体或半固体定向培养并加入不同浓度的AS, 光镜下计数半固体培养的红系集落形成单位(CFU-E) 与红系爆式集落形成单位(BFU-E) 数量, 流式细胞术检测液体定向培养的细胞凋亡和线粒体膜电位变化, 同时进行DNAladder 凝胶电泳实验。结果 AS 可显著抑制CFUE与BFU-E 集落的生成(P <0.05) 并具有一定的量效关系;DNA ladder 凝胶电泳结果显示0.01 ~1.30 mmol/L 的AS 可明显诱导细胞凋亡, 流式细胞仪检测细胞晚期凋亡 死亡率具有统计学意义(P <0.05);线粒体膜电位的下降程度也与AS 浓度正相关(r=0.546, P=0.018)。结论 AS 对小鼠骨髓造血干/祖细胞的增殖和分化具有明显抑制作用, 小剂量AS 可诱导小鼠骨髓造血干/祖细胞发生凋亡, 大剂量可直接引起细胞坏死。     

青蒿琥酯对体外培养的视网膜神经节细胞氧化应激损伤的保护机制研究

目的:研究青蒿琥酯对体外培养的视网膜神经节细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:体外培养视网膜神经节RGC-5细胞,将细胞分为空白对照组、H2O2组、H2O2+低剂量青蒿琥酯组、H2O2+中剂量青蒿琥酯组、H2O2+高剂量青蒿琥酯组,CCK8法检测各组细胞的相对存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测各组细胞匀浆中氧化应激产物MDA、NO、SOD1水平,Western blot检测各组细胞中HO-1、SOD1、PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达水平。结果:与H2O2组比较,不同剂量青蒿琥酯可以促使RGC-5细胞增殖,抑制其凋亡,差异比较有统计学意义（P<0.05）;各药物组中MDA、NO显著低于H2O2组,而SOD1活性显著高于H2O2组;各药物组HO-1、SOD1、PI3K及p-Akt蛋白表达水平均显著高于H2O2组,差异均有统计学意义（P<0.05）;并且PI3K抑制剂能降低青蒿琥酯对RGC-5细胞的保护作用。结论:青蒿琥酯能明显降低H2O2诱导的视网膜神经节细胞氧化应激损伤,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7血管生成和肿瘤浸润作用研究

目的: 观察青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7血管生成及浸润转移的抑制作用。方法: 建立人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型,给予不同剂量青蒿琥酯治疗并观察其对移植瘤的抑制作用;用免疫组化检测移植瘤组织细胞中VEGF、HIF-1α、uPA、E-cadherin蛋白表达和Western blot检测移植瘤组织细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果: 青蒿琥酯低、高剂量组抑瘤率分别为(24.39±10.20) %、(40.24±7.02 ) %;免疫组化结果显示,与生理盐水组比较,青蒿琥酯低、高剂量组VEGF、HIF-1α蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05); uPA和E-cadherin蛋白在生理盐水组和青蒿琥酯低、高剂量组中的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),HIF-1α/VEGF之间表达呈正相关(r=0.983,P=0.000);Western blot 结果显示,青蒿琥酯低、高剂量组中VEGF、HIF-1α蛋白下调,表达量低于生理盐水组,青蒿琥酯高剂量组的蛋白表达量最低。HIF-lα与VEGF蛋白表达之间存在一致性。结论: 青蒿琥酯可显著抑制乳腺癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抗肿瘤血管及抑制肿瘤侵袭相关。     

青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究

目的: 探讨青蒿琥酯(Art) 是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用。方法: 选用人胚肺成纤维细胞株(HLF) 、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF) 和人脐静脉内皮细胞(HUVEC), 用免疫组化法鉴别细胞;MTT 法检测青蒿琥酯对上述3 种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA 的变化。结果: 青蒿琥酯在30 ~ 240 mg·L^-1浓度范围内作用细胞24 h 对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P <0.05), 对血管内皮细胞增殖抑制作用不明显(P >0.05) 。药物作用24 h 后,HLF 、HSF 、HUVEC 细胞的IC₅₀ 分别为:64、60、600 mg·L^-1 。光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆, 突起变短变少, 胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化。琼脂糖凝胶电泳结果显示在240 mg·L^-1浓度作用24 h, 两种成纤维细胞的DNA 出现梯带状的电泳图谱, 而内皮细胞的DNA 无梯状条带。结论: 青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用, 而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响。该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡, 而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用。     

氯胺酮对腹腔感染脓毒症小鼠生存率的影响

目的: 探讨早期使用氯胺酮是否延迟盲肠结扎穿孔(CLP)所致脓毒症小鼠的死亡时间。方法: 60只CLP小鼠,分别于术后1、6 h 腹腔注射氯胺酮0、3、6、12 mg·100 g^-1,观察小鼠死亡情况并比较累计生存率。结果: 氯胺酮延长CLP小鼠死亡时间(P<0.05);氯胺酮6 mg·100 g^-1组小鼠生存时间明显长于3 mg·100 g^-1组和12 mg·100 g^-1组(P<0.05)。结论: 氯胺酮延迟CLP小鼠死亡时间,并呈现剂量依赖性。     

青蒿琥酯增加小鼠腹腔巨噬细胞内化内毒素、大肠埃希菌的作用及可能机制

目的: 观察青蒿琥酯(artesunate, AS)对小鼠腹腔巨噬细胞内化清除脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin, LPS)和吞噬大肠埃希菌的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法: MTT法检测不同浓度网格蛋白抑制剂(monodansylcadaverine, MDC)、内体酸化抑制剂氯喹(chloroquine, CQ)对小鼠腹腔巨噬细胞活力的影响,以选择恰当的药物工作浓度;激光共聚焦法检测青蒿琥酯及MDC、CQ对小鼠腹腔巨噬细胞内化FITC-LPS的影响;分别采用激光共聚焦和菌落集落形成计数实验观察青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞内化大肠埃希菌的影响;逆转录PCR检测青蒿琥酯对小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体A(class A scavenger receptor,SR-A) mRNA表达的影响。结果: MDC和CQ浓度分别小于 25 μg/mL 和 20 μg/mL 时对小鼠腹腔巨噬细胞活力无影响;MDC、CQ可抑制小鼠腹腔巨噬细胞内化LPS,青蒿琥酯可增加小鼠腹腔巨噬细胞对LPS的内化,而且青蒿琥酯可增加MDC和CQ处理的巨噬细胞内化LPS的功能。激光共聚焦和菌落集落形成计数实验均显示青蒿琥酯可增加小鼠腹腔巨噬细胞对大肠埃希菌的内化能力。逆转录PCR结果显示青蒿琥酯可增强LPS处理或未处理的小鼠腹腔巨噬细胞SR-A mRNA的表达。结论: 青蒿琥酯可增强小鼠腹腔巨噬细胞内化LPS、大肠埃希菌的能力,该作用可能与SR-A mRNA表达升高有关。     

青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存活蛋白表达有关

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate, Art)诱导肿瘤细胞凋亡与存活蛋白(survivin protein)表达的关系。 方法 采用细胞荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法和测定细胞浆Caspase-3 的活性等手段检测肿瘤细胞暴露于不同浓度的Art 时, 对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;用RT-PCR、Western Blotting 法,检测不同浓度的Art 作用于肿瘤细胞时, 对survivinmRNA 和survivin 蛋白表达的影响。 结果 HL60 细胞暴露于Art 时, 呈现典型细胞凋亡特征, 如:胞核固缩、形成凋亡小体;凋亡细胞的比例呈浓度依赖性增高;琼脂糖电泳出现明显的“ 梯状” 条带;细胞浆Caspase-3 的活性呈浓度依赖性增高等。RT-PCR 检测表明, A549 细胞暴露于Art 10 和50 g·L^-1 72 h后, survivin mRNA 的表达呈浓度依赖性降低, 对照组、10 和50 mg·L^-1 处理组的survivin 条带和内标GAPDH 条带灰度的比值分别为1.745、0.390 和0.023;Western Blotting 法也检测到Art 抑制Survivin蛋白的表达。 结论 Art诱导肿瘤细胞发生凋亡, 激活Caspase-3 途径, 可能与抑制survivin 基因表达有关。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate, Art) 诱导人急性早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制。方法:用Art 处理HL60 细胞, 通过MTT 比色法检测细胞增殖抑制的效果;透射电镜、DNA 凝胶电泳技术观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM) 进行细胞周期分析和线粒体膜电位(mitochondrialmembrane potential, MMP) 水平的检测;比色法检测半胱-天冬氨酸蛋白酶3(cysteine containing aspartate,Caspase 3) 活性。结果:Art 呈浓度和时间依赖性的抑制HL60 细胞的增殖(P<0.05) 。Art 诱导后HL60 细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变, G²⁺M 期细胞比例增高, S 期减少, 凋亡率上升(P<0.05), 线粒体膜电位降低(P<0.05),Caspase 3 活性增强(P<0.05) 。结论:Art 可能通过线粒体/半胱-天冬氨酸蛋白酶3 特定途径诱导HL60细胞凋亡。     

小剂量CpG ODN 预处理对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其机制探索

目的:研究CpG ODN 对细菌脓毒症小鼠的保护作用及其部分作用机制。方法:建立细菌脓毒症小鼠模型, 给予不同剂量的CpG ODN 后, 再给予热灭活E.coli 攻击小鼠, 观察各组小鼠的死亡情况;有效剂量的灭活E.coli 攻击小鼠后收集血清, 测定血清中TNF-α浓度。结果:10 mg°kg^-1 CpG ODN 预处理小鼠, 可缩短灭活E.coli 攻击后小鼠的死亡时间;提前给予3 d 2 mg°kg^-1 CpG ODN, 能提高灭活E.coli 攻击小鼠的存活率;CpG ODN 预处理能有效抑制细胞因子TNF-α的释放。结论:适当剂量的CpG ODN 预处理对灭活E.coli 攻击小鼠具有保护作用, 其机制可能与抑制Th1 型细胞因子TNF-α的释放有关。     

苦参碱对缺血性脑中风小鼠神经元及星形胶质细胞的保护作用

目的: 观察苦参碱(Matrine)对缺血性脑中风小鼠的神经保护作用及对缺氧缺糖诱导的神经元和星形胶质细胞损伤的减轻作用,并初步探讨可能的作用机制。方法: 采用原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞缺氧缺糖模型(Oxygen and glucose deprivation, OGD),MTT法和测定乳酸脱氢酶(LDH)观察Matrine对OGD神经元及星形胶质细胞的损伤是否有减轻作用;建立小鼠永久性大脑中动脉阻塞(Permanent middle cerebral artery occlusion, pMCAO)模型,观察Matrine 10 min、1 h、3 h 及 6 h 四个不同时间点给药后,脑梗死面积和神经症状的改善情况及其分子机制是否与抑制神经元及星形胶质细胞NF-κB信号通路有关。结果: 经OGD诱导后,原代培养小鼠大脑皮层神经元及星形胶质细胞活力明显下降,与OGD模型组比较, 给予Matrine(50 μmol/L)干预后,神经元及星形胶质细胞的存活率明显提高(P<0.01);与此同时,OGD可使小鼠大脑皮层星形胶质细胞LDH漏出量增高(P<0.01), Matrine(50 μmol/L)与模型组比较,LDH漏出量明显降低(P<0.01);Matrine(37.5 mg/kg) 10 min、1 h 两个给药时间点的脑梗死面积与模型组比较明显减少(P<0.01);与模型组比较,Martine 10 min、1 h 两个给药时间点术后24 h的神经症状评分明显降低(P<0.01);Matrine可降低pMCAO缺血区IκBα与IKK蛋白的表达水平(P<0.01, P<0.05),同时降低细胞核NF-κB蛋白的表达(P<0.01)。结论: Matrine可通过直接保护神经元及星形胶质细胞改善缺血性脑中风症状,其作用时间窗可能在发病 1 h 以内, Matrine保护作用可能与NF-κB信号通路有关。     

哌芳安他对异丙肾上腺素诱发的小鼠心肌缺血的保护作用

目的 评价新化合物哌芳安他(pivanampeta)对异丙肾上腺素诱发的小鼠心肌缺血损伤的保护作用。 方法 昆明种小鼠49 只, 雌雄兼用, 随机分成5组, 每组8 ~ 11 只, 灌胃给药, 共7 d。正常对照组及损伤模型组:按10 ml·kg^-1 给予生理盐水, 每日2次;哌芳安他低、中、高剂量组:分别按1, 5,25 mg·kg^-1给予哌芳安他, 每日2 次, 自d 6 第1 次给药后0.5 h 内, 损伤模型组和哌芳安他高中低剂量组动物连续2 d 接受皮下注射异丙肾上腺素(isoproteronol,ISO), 每次剂量20 mg·kg^-1, 每日1 次, 正常对照组给予皮下注射等容积生理盐水(NS), 每日1 次。各组动物于末次皮下注射异丙肾上腺素或生理盐水后2 h, 采血测定磷酸肌酸激酶(CK) 及乳酸脱氢酶(LDH), 留取心脏观察心肌组织形态学变化。 结果 与正常对照组相比, ISO 组血清LDH 及CK 水平显著升高(P <0.01), 组织形态学改变明显, 心肌细胞损伤严重。各哌芳安他用药组血清LDH 及CK水平较ISO 组有所降低(P <0.05), 组织细胞损伤明显减轻。 结论 哌芳安他对异丙肾上腺素诱发的小鼠心肌缺血损伤有确切的保护作用。