西红花酸对阿霉素所致大鼠心肌线粒体损伤的影响

目的: 研究西红花酸对阿霉素所致大鼠心肌线粒体损伤的保护作用。方法: 建立阿霉素致大鼠心脏毒性模型, 观察西红花酸对心肌线粒体膜电位、线粒体DNA 断裂程度、细胞色素C 氧化酶活性及其亚基IImRNA 表达的影响;测定心肌线粒体超氧阴离子含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果: 与模型组相比, 西红花酸可明显升高线粒体膜电位, 降低线粒体DNA 断裂程度, 提高细胞色素C氧化酶活性及其亚基IImRNA 表达水平, 显著降低心肌线粒体超氧阴离子含量, 提高GSH-PX 活性。结论: 西红花酸能明显减轻阿霉素所致大鼠心肌线粒体损伤。     

一氧化氮诱导 PC12 细胞凋亡及芍药苷的保护作用

目的: 探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法: MTT和乳酸脱氢酶活性测定细胞存活率,DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率、检测线粒体跨膜电位。结果: 500μmol·L^-1硝普钠(SNP)可诱导PC12细胞凋亡,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1、1和10μmol·L^-1等浓度芍药苷处理后,SNP诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱一氧化氮对线粒体跨膜电位的影响。结论: 芍药苷可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

应用PCR 和单克隆抗体方法从人粪便及肿瘤组织中检测大肠癌基因突变的研究

目的: 检测大肠癌病人粪便中脱落细胞与肿瘤组织细胞的DNA,对比两者K-ras 基因序列和突变位点的变化,为临床非介入性的、简便的大肠癌诊断提供理论和实验依据。方法: 分离和提纯大肠癌组织及粪便中脱落细胞的DNA,用PCR(Polymerase chain reaction)法扩增K-ras基因,克隆K-ras基因PCR 产物并进行DNA序列的测定。免疫组化检测大肠癌相应抗原的表达:采用ELISA法,用大肠癌单克隆抗体对大便样品进行检测。结果: 同一病人的大肠癌组织细胞与粪便中的脱落细胞的K-ras基因的序列完全一致,并检测到1例K-ras基因点突变。K-ras基因突变与否与大肠癌病理类型和大肠癌单克隆抗体检测大便样品中脱落细胞的癌抗原表达水平有一定的相关性。结论: 以大肠癌分子发病机理为基础的非介入性检测粪便中K-ras突变是可行的,有望成为正常人群大肠癌筛查以及诊断的新方法之一,可以为大肠癌的早期发现及监测大肠癌的发生、发展和预后提供理论和实验依据。     

中国华东汉族人群细胞色素酶 CYP3A4 新基因型的发现与序列分析

目的: 探讨中国华东地区汉族人群细胞色素P450 3A4 基因的基因型差异。方法: 采用 RT-PCR与DNA 测序技术相结合的方法对来自华东地区的6份汉族成人肝组织 P450 3A4基因的cD-NA 进行了扩增与序列分析 。结果: 本研究从6份汉族人肝组织中首次检测到了一种新的基因型,该基因型存在三处氨基酸突变和一处核苷酸缺失, 即第71位氨基酸发生V(GTG)→A(GCG) 突变;第225位氨基酸发生V(GTC)→I(AIC)的突变;第393位氨基酸发生W(TGG)→V(GTG) 突变;第671~673位核苷酸CAG发生缺失。结论: 本研究首次发现中国华东地区汉族人群存在一种CYP3A4 新基因型。     

氨基胍对糖尿病大鼠心脏功能及心肌超微结构的影响

目的: 探讨非酶糖化抑制剂-氨基胍(aminoguanidine, AG)对链尿佐菌素(streptozotocin, STZ)糖尿病大鼠心肌的保护作用, 为糖尿病心肌病的防治提供参考。方法: 建立STZ 糖尿病大鼠模型, 随机分为对照组、糖尿病组和氨基胍治疗组,AG 剂量为150 mg·kg^-1·d^-1。12 周时测定大鼠血清果糖胺含量、心脏重量指数、左室内压最大上升和下降率(±dp/dt_max)值, 电镜观察心肌超微结构, 测量心肌毛细血管基底膜厚度。结果: 糖尿病组大鼠血清果糖胺含量、心脏重量指数明显增高,±dp/d t_max 降低;超微结构显示心肌肌原纤维排列紊乱, 线粒体肿胀变性,间质胶原增生, 微血管内皮细胞肿胀、基底膜明显增厚。氨基胍治疗组血清果糖胺含量降低、心脏重量指数明显下降、±dp/d t_max 值上升, 微血管基底膜增厚减轻, 间质胶原减少, 心肌细胞超微结构异常减轻。结论: 糖尿病时存在心脏功能异常、心肌肥厚和超微结构的改变, 早期应用AG 在一定程度上可阻抑糖尿病心肌病变的发展。     

白藜芦醇诱导K562 细胞凋亡过程中活性氧水平的改变

目的: 探讨白藜芦醇对K562 细胞的凋亡诱导效应和对K562 细胞内活性氧水平的影响。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、光镜、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(FCM) 检测细胞凋亡;FCM 测定细胞内活性氧(ROS) 水平。结果: 白藜芦醇显著抑制K562 细胞增殖, 并呈现典型的凋亡形态学改变;DNA 电泳可见梯状条带出现;FCM 分析显示S 期细胞数明显增多, 出现S/G₂ 期阻滞, ROS 水平升高。结论: 白藜芦醇诱导K562 细胞凋亡与细胞内活性氧水平升高有关。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

二氮嗪对大鼠心肌线粒体膜电位及呼吸功能的影响

目的 研究二氮嗪对大鼠心肌线粒体功能的影响, 以探讨其心肌保护作用的可能机理。 方法 以罗丹明123 为荧光探针测定线粒体膜电位, 氧电极法测线粒体呼吸, 观察二氮嗪对正常大鼠心肌线粒体跨膜电位及呼吸的影响。 结果 50 μmol·L^-1 的二氮嗪可引起线粒体膜电位去极化, 此影响可被钾通道阻滞剂消除;二氮嗪100 μmol·L^-1可降低大鼠心肌线粒体琥珀酸链的R3、R4 速率, 但不影响呼吸控制率。 结论 二氮嗪可调节大鼠心肌线粒体功能, 这与其抗心肌缺血保护作用有关。     

原发性高血压患者中血管紧张素Ⅱ2型受体基因A1675G多态性与缬沙坦降压疗效的相关性研究

目的: 探讨原发性高血压患者中血管紧张素Ⅱ2型受体基因A1675G单核苷酸多态性与高血压发生及缬沙坦治疗的关系。方法: 应用直接测序方法对80例原发性高血压和40例正常人群中血管紧张素Ⅱ2型受体基因作SNP分型。结果: 原发性高血压患者A1675G位点上A等位基因频率和正常人群中相比有统计学意义(P＜0.05);其与用药后血压的下降幅度有统计学意义(P＜0.05)。结论: 血管紧张素Ⅱ2型受体基因的A1675G单核苷酸多态性与原发性高血压发病有关,其可能是缬沙坦降压疗效的新的预测因子。     

组织激肽释放酶基因多态性A1789G对高血压患者血浆肌酐水平的影响

目的: 探讨组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者血浆肌酐水平的影响。方法: 用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) 方法对733 例高血压患者的组织激肽释放酶基因A1789G多态位点进行基因分型, 用线性回归模型分析基因型与血浆肌酐水平之间的关系, 用方差分析分析基因型和血压对血浆肌酐水平的交互影响。结果: 携带突变型等位基因1789G(基因型AG 或GG) 高血压患者较携带野生型等位基因A1789(基因型AA) 患者的血浆肌酐水平明显升高, 且血浆肌酐水平随着血压的升高而升高。结论: 组织激肽释放酶基因多态性对高血压患者的血浆肌酐水平产生明显影响,A1789G 多态位点是高血压患者血浆肌酐清除率下降的一个危险因素。     

焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法的建立

目的: 建立k-ras基因突变的焦磷酸测序方法,并分析该基因在结直肠癌中的突变率。方法: 制备10份卫生部临床检验中心2013年全国k-ras基因突变检测室间质评模板DNA,对焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法进行验证;制备230例结直肠癌标本gDNA,应用PyroMark Q24焦磷酸测序仪进行k-ras基因的焦磷酸测序。结果: 建立了k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法,检测正确率100%;230例结直肠癌标本中共检出基因突变型33例,总突变率 14.34% (33/230),其中12号密码子上34G>T的突变率为 1.74%(4/230),35G>A的突变率为 5.22% (12/230),35G>T的突变率为 3.04% (7/230),37G>A的突变率为 0.43% (1/230),13号密码子上38G>A的突变率为 3.91% (9/230)。结论: k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法具有快速、准确和高通量的优点,适合于在科研和临床基因扩增检验中推广。     

乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定治疗效应关系研究

目的: 探讨乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定治疗效应的关系。方法: 采用DNA 测序和寡核苷酸芯片技术, 检测分析了41 例使用拉米夫定治疗的乙型肝炎患者的基因型与酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD) 变异情况, 同时跟踪观察了患者治疗前、治疗后3 、6 、9 、12 个月的乙型肝炎病毒(HBV) DNA 和丙氨酸转氨酶(ALT) 水平。结果: 41 例HBV 患者中B 基因型21 例(51. 2 %), C 基因型20 例(48. 8 %); 拉米夫定治疗前与治疗12 个月后B 基因型与C 基因型两组间ALT 水平差异无显著性(P > 0. 05) 。拉米夫定治疗乙型肝炎过程中C 基因型HBV DNA 转阴率显著高于B 基因型, B 基因型HBV DNA 反跳率显著高于C 基因型(P<0. 01) 。C 基因型YMDD 突变率与B 基因型差异无显著性(P >0. 05) 。结论: HBV 基因型与拉米夫定治疗效应存在一定的相关性, C 基因型对拉米夫定的治疗效应较好。     

异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠海马线粒体能量代谢、ATP酶活性及自由基系统的影响

目的: 观察异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠海马线粒体能量代谢、ATP酶活性、脂质过氧化及超微结构的影响。方法: 雄性Wistar 大鼠30 只,随机分为假手术组、缺血再灌注对照组和缺血再灌注异丙酚处理组。采用大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。全脑缺血10 min 再灌注60 min 时,断头处死大鼠。检测海马线粒体三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)含量及Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性并观察线粒体超微结构的改变。结果: 缺血再灌注后海马线粒体的ATP含量及Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca2+-ATP酶、SOD、GSH 活性均有不同程度的降低,MDA 含量增高,线粒体超微结构亦发生明显损害;麻醉相关剂量的异丙酚可使ATP含量、Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、SOD、GSH活性有不同程度的恢复,并降低MDA 的含量,减轻线粒体损伤的程度。结论: 异丙酚对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与其抑制线粒体脂质过氧化反应,清除自由基,保持线粒体结构的完整性,促进线粒体ATP含量和ATP酶活性的恢复有关。     

2012年我院临床分离病原菌及耐药性监测分析

目的: 了解医院感染病人病原菌的分布及其耐药情况,指导临床合理使用抗菌药物。方法: 收集2012年1~6月份医院分离出的所有病原菌,采用VITEK-2对其进行鉴定及药物敏感试验,WHONET5.5软件进行数据分析。结果: 共分离出病原菌2791株,以大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌最多见,分别占 18.99%、15.84%、11.03%、8.53%、7.45%;肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的耐药率较高,其中鲍曼不动杆菌的耐药最严重。结论: 医院感染病原菌的分离率和耐药性逐年增加,为控制多重耐药菌的蔓延,必须加强抗菌药物的合理使用。     

利奈唑胺、去甲万古霉素等抗菌药物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌活性

目的:研究北京市三家医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 耐药现状, 评价利奈唑胺、去甲万古霉素等药物的抗菌活性。方法:收集解放军总医院、北京医院、北京协和医院三家医院分离的非重复MRSA 111 株, 头孢西丁纸片法确认MRSA, 采用琼脂稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC) 。结果:111 株MRSA, 对β-内酰胺类的耐药率为100%, 对红霉素的耐药率为92.8%, 对氨基糖苷类(奈替米星、庆大霉素) 的耐药率为99.1%, 对氟喹酮类(加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星) 的耐药率为91.9% ～99.1%, 对氯霉素的耐药率为3.6%, 对去甲万古霉素、利奈唑胺全部敏感, 对去甲万古霉素MIC₅₀ 和MIC₉₀ 分别为0.5和1 μg/mL, 对利奈唑胺的MIC₅₀ 和MIC₉₀ 均为2 μg/mL 。结论:北京三家医院分离的MRSA 对本研究的大多数抗菌药物均耐药, 去甲万古霉素和利奈唑胺对于MRSA 有很高的抗菌活性。     

肠道抗生素行肠道准备后对大肠杆菌耐药的影响

目的: 探讨结直肠肿瘤患者术前口服肠道抗生素行肠道准备对大肠杆菌耐药的影响。方法: 对符合要求的100例结直肠肿瘤患者随机分成两组,观察组采用口服肠道抗生素 1 d,对照组口服肠道抗生素 3 d,于术中采集每例病员结肠黏膜附着物行细菌培养及药敏试验,统计两组大肠杆菌培养阳性率及其耐药情况。结果: 1 d 组和 3 d 组结肠黏膜附着物大肠杆菌培养阳性率分别为46%和40%, 3 d 组大肠杆菌较 1 d 组对丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星及左氧氟沙星耐药增加(P＜0.05);两组均对氨苄西林全部耐药,而对厄他培南、亚胺培南及哌拉西/他唑巴坦全部敏感。结论: 肠道抗生素用于结直肠肿瘤患者术前肠道准备, 3 d 方案致大肠杆菌对部分药物耐药性增加,术前肠道准备宜尽量减少服用抗生素。