西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1 (P27)蛋白的表达。结果: (1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFB G₀/G₁期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G₂/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05 或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β₁的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论: Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

血管紧张素Ⅱ和缬沙坦对血管内皮细胞AT1/AT2及eNOS 表达的调节作用

目的: 研究缬沙坦在血管内皮细胞中对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 受体I 型(AT₁) 和Ⅱ型(AT₂) 、一氧化氮合酶(eNOS) 的表达和一氧化氮(NO) 生成的影响。方法: 使用人脐静脉内皮细胞系ECV-304(HUVECs), 分为对照组、Ang Ⅱ组、缬沙坦组和Ang Ⅱ加缬沙坦组, 作用不同时间, 检测AT₁/AT₂ 的mRNA和蛋白表达、eNOS 的蛋白表达和NO 的生成。结果: 在HUVECs 细胞中未检测到AT₂的蛋白表达,Ang Ⅱ 、缬沙坦均显著抑制细胞中AT₁的mRNA 和蛋白表达, 且缬沙坦呈明显的剂量依赖效应, Ang Ⅱ作用36 h 显著抑制NO 的生成而合用缬沙坦可明显逆转该效应。结论: 在HUVECs 中缬沙坦可通过自身的结合下调AT₁, 并能逆转Ang Ⅱ长时间作用对NO生成的抑制作用, 提示缬沙坦可改善血管内皮细胞的功能。     

辛伐他汀对一氧化氮缺乏性高血压大鼠心肌纤维化的作用1

目的: 观察辛伐他汀对一氧化氮( NO) 缺乏性高血压大鼠心肌纤维化的作用。方法: 24 只WKY 大鼠随机分为正常对照组( C 组) 、硝基精氨酸甲酯( LNAME)组( L 组) 和L-NAME +辛伐他汀组( L +S组), 8 wk 后测定大鼠血清和心肌组织血管紧张素Ⅱ( Ang Ⅱ) 、血管紧张素转换酶(ACE) 活性和心肌组织羟脯氨酸浓度, 并取大鼠左心室心肌横截面组织作病理形态检测和计算机图象分析。结果: L 组大鼠血浆ACE 活性与C 组相比明显降低( P <0. 01), 心肌ACE 活性则较C 组明显增高( P <0. 01), 辛伐他汀干预后血浆ACE 活性升高, 但与L 组无显著差异( P >0. 05), 心肌ACE 活性则比L 组有明显降低( P <0. 05); 各实验组大鼠血浆Ang Ⅱ水平与C 组比较未显示统计学差异( P >0. 05); L 组心肌组织AngⅡ水平与C 组比较显著增加( P <0. 01), L +S 组心肌组织Ang Ⅱ水平则较L 组明显降低( P <0. 05); 此外, L 组心肌羟脯氨酸浓度和左心室胶原容积分数(CVF) 和心肌内血管周围胶原面积( PVCA) 均比C组明显增高( P <0. 01), L +S 组羟脯氨酸浓度和CVF 、PVCA 值则均较L 组明显降低( P <0. 05) 。结论: 辛伐他汀可能通过降低局部心肌组织ACE 活性减少Ang Ⅱ生成, 减轻心肌纤维化。     

汉防己甲素延缓肾小球硬化机理的实验研究1

目的 探讨汉防己甲素对肾小球硬化大鼠肾脏转化生长因子(TGF-β₁)基因表达的影响。方法 27只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、肾小球硬化模型组、汉防己甲素组和氨氯地平组,用单侧肾切除加2次注射阿霉素制备肾小球硬化动物模型,用Northern 印迹杂交,观察肾皮质TGF-β₁mRNA表达。结果 汉防己甲素使肾小球硬化大鼠肾皮质TGF-β₁mRNA表达较模型组明显下调,肾小球细胞外基质较模型组明显减少。结论 汉防己甲素通过下调TGF-β₁表达而减少肾小球ECM沉积,从而延缓肾小球硬化。     

罗格列酮对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解的影响

目的: 探讨罗格列酮(rosiglitazone maleate)对糖尿病肾病的保护机制。方法: 大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度(5.5 mmol/L) ,高糖浓度(25 mmol/L )及25 mmol/L 葡萄糖+20μmol/L 罗格列酮的培养液中。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA 法检测培养上清液 Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1) ;明胶酶谱法检测培养上清液基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2, 9) 的活性。结果: 高糖组系膜细胞较正常对照组出现增殖增加, 合成基质蛋白Col-Ⅳ、FN增多;MMP-2及MMP-9 活性下降 ;TIMP-1 含量增加;TGF-β₁分泌增加。与高糖组比较, 罗格列酮干预后能逆转上述变化。结论: 罗格列酮能抑制高糖培养的系膜细胞增殖, 减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

缬沙坦及苯那普利对5/6肾切除大鼠肾小球硬化的影响

目的: 观察并比较缬沙坦及苯那普利对5/6肾切除大鼠肾小球硬化的改善作用,探讨其作用机制。方法: 选用SD 雄性大鼠30 只,通过5/6 肾切除法制造慢性肾功能衰竭模型,术后2 周随机分为模型组、缬沙坦组及苯那普利组,并设假手术组作为对照。术后第6 周末各组大鼠进行体重、血压、血清肌酐(Scr)及尿素氮(BUN)的测定,处死大鼠,取出肾组织进行病理组织形态学观察,并采用免疫组织化学方法检测肾组织转化生长因子β₁ (TGF-β₁ )、IV 型胶原、纤维连接蛋白(FN)表达。结果: 同模型组相比,两治疗组收缩压下降(P均<0.01),肾功能改善;肾小球系膜增殖程度、肾小球硬化指数(GSI)降低(P均<0.01);免疫组化染色显示,两治疗组肾小球转化生长因子β₁ (TGF-β₁)、纤维连接蛋白(FN)及IV 型胶原表达均较模型组下降(P均<0.01)。结论: 缬沙坦及苯那普利对慢性肾功能衰竭大鼠具有同等的肾脏保护作用;改善肾小球硬化是通过减少肾小球TGF-β₁ 表达,从而减少FN 及IV 型胶原生成来实现的。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

鸢尾黄素对肝星状细胞外基质表达的影响

目的: 研究鸢尾黄素对肝星状细胞的活化以及细胞外基质合成和降解的影响。方法: 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,通过荧光定量PCR法检测鸢尾黄素对肝星状细胞的Ⅰ型胶原、α-肌动球蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及基质金属蛋白酶-1抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达的影响。结果: 鸢尾黄素能显著抑制肝星状细胞中Ⅰ型胶原及活化标志α-SMA mRNA的表达,增强肝星状细胞中MMP-13 mRNA的表达,降低TIMP-1 mRNA的表达。结论: 鸢尾黄素既可以有效地抑制肝星状细胞的活化,同时又能减少肝星状细胞胞外基质的合成以及增加胞外基质的降解,因而具有潜在的抗肝纤维化的作用。     

夏枯草总三萜对乙醛刺激的肝星状细胞作用及部分机制

目的: 探讨夏枯草总三萜(TTP)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响及部分作用机制。方法: 用不同浓度的TTP(10、30、100、300、1000 μg/mL)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测HSC-T6中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型前胶原(ProcollagenⅠ)、TGF-β信号转导通路下游中介分子Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达。结果: TTP可抑制乙醛刺激的大鼠HSC-T6增殖,诱导其凋亡,下调HSC-T6中α-SMA、ProcollagenⅠ、Smad2、Smad3的mRNA表达,上调Smad7的mRNA表达。结论: TTP对乙醛刺激的HSC-T6增殖具有抑制作用,并能够促进其凋亡,下调α-SMA、ProcollagenⅠ表达量,其机制可能与TTP能抑制Smad2、Smad3表达,升高Smad7的表达,从而对TGF-β/Smad信号通路发挥调控作用有关。     

川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响

目的:探讨川芎嗪对脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞间粘附因子-1 表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞, 经脂多糖诱导后, 分别应用噻唑蓝(MTT) 比色法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率和细胞周期的变化, 应用免疫细胞化学法检测细胞表面细胞间粘附因子-1 的表达。结果:川芎嗪呈剂量依赖性的抑制系膜细胞的增殖,并阻止细胞由G₀/G₁ 期进入S 期;使系膜细胞间粘附因子-1 的表达水平明显减少。结论:川芎嗪能抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖和降低细胞间粘附因子-1 表达水平。     

异丙肾上腺素对大鼠心肌纤维化和相关细胞因子的影响

目的: 探讨异丙肾上腺素(isoprote renol, Iso)对 大鼠,心肌纤维化和相关细胞因子的影响。方法: 20只SD大鼠随机分成正常对照组(空白组)、异丙肾上腺素组(Iso组),每组10只。Iso组经皮下注射Iso 后,对两组行组织学观察心功能、胶原容积分数(CVF)、胶原蛋白含量和血浆中血管紧张素II(An­gll)、一氧化氮(NO)浓度的测定。结果: 与空白组相 比,Iso组心肌细胞间有大量胶原增生, 心功能有所降低,CVF、胶原蛋白含量和Angil含量增加,NO含量降低,最大上升速率(+ dp/dt_max)和心室收缩压(LVSP)未见明显改变。结论: Iso能促进大鼠,心肌纤维化和相关细胞因子浓度的变化。     

氟伐他汀对心衰大鼠基质金属蛋白酶、转化生长因子及左室重构的影响

目的: 了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及转化生长因子-β₁(TGF-β₁)在心肌梗死大鼠左室重构及心衰发展过程中的改变,以及氟伐他汀的干预作用,探讨心梗后心衰的发生机制。方法: 选用雄性SD大鼠67只随机分为假手术组、心梗组和心梗他丁组,经冠状动脉前降支结扎术建立心肌梗死后心衰模型,手术24 h后心梗他汀组大鼠管饲氟伐他汀4 mg·kg^-1·d^-1,假手术组和心梗组大鼠管詞安慰剂。术后3 d、4周、8周检测大鼠非梗死区心肌MMP-2 的含量（Westem-blot 法）、胶原、TGF-β₁的改变（免疫组化法）,压力传感器记录左室血流动力学改变。结果: 术后各时点非梗死区心肌的MMP-2含量,心梗组及心梗他汀组显著高于假手术组（P <0.05),而心梗他汀组显著低于心梗组（P<0.05);术后各组各时点非梗死区心肌TGF-的表达的变化趋势与MMP-2相同;与心梗组比较,心梗他汀组术后4周和8周的心功能明显改善,股原容积分数(CVF)及 I/III 型脱原比值（Ratio of type I/HI)降低(P<0.05)。结论: 氟伐他汀通过减少非梗死区心肌MMP-2和TGF-J3,的含量,而减轻心梗后非梗死区心肌胶原网络的破坏及反应性胶原的过度沉积,从而子页防和逆转心室重构,改善心脏功能。     

辛伐他汀对肾性高血压心肌纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的: 探究辛伐他汀(simvastatin) 对肾血管性高血压心肌纤维化及结缔组织生长因子(CTGF) 表达的影响。方法: 建立二肾一夹肾血管性高血压(2K1C-RH) 大鼠模型, 将实验大鼠随机分为3 组:假手术组、高血压组、辛伐他汀治疗组。术后4 周末,开始以辛伐他汀(5 mg·kg^-1·d^-1) 灌胃, 共8 周。测量大鼠收缩压(SBP) 、心肌总胶原容积分数、心肌胶原浓度以及CTGF 的表达。结果: 与假手术组相比,高血压组的收缩压、心肌总胶原容积分数、心肌胶原浓度显著增加(P<0. 01), CTGF 表达上调(P<0. 01), 辛伐他汀抑制2K1C-RH 大鼠心肌纤维化的发展和心肌组织中CTGF 的表达(P<0. 05) 。结论: 辛伐他汀能抑制高血压心肌纤维化, 可能与下调CTGF 的表达有关。     

黄芪总提物对大鼠肝星状细胞增殖及产生胶原的影响

目的 研究黄芪总提物(TEA) 对体外肝星状细胞增殖和产生胶原的影响。方法 采用IV 型胶原酶灌流分离大鼠肝星状细胞进行原代培养, 用CCl₄急性损伤的大鼠肝枯否细胞条件培养基(KCCM)刺激肝星状细胞, 用³H-TdR 和³H-Proline 的掺入法分别检测肝星状细胞的增殖和胶原的产生。结果 TEA (5 ~ 40 mg·L^-1) 可明显降低由KCCM 刺激的肝星状细胞的增殖和胶原的产生。结论 TEA对体外激活的肝星状细胞的增殖和产生胶原有明显抑制作用, 该作用可能是TEA 抗肝纤维化的机理之一。     

牛磺酸对烫伤大鼠血浆及心肌组织肿瘤坏死因子和血管紧张素Ⅱ含量的影响

目的 观察牛磺酸对大鼠严重烧伤后心肌损害的影响。 方法 用健康Wistar 大鼠, 随机分为对照组、烧伤组(造成30 %TBSA Ⅲ度烫伤) 和治疗组(烧伤后腹腔注射牛磺酸, 剂量400 mg·kg^-1 体重)。于伤后1、3、6、12 和24 h 检测血浆TNF-α、Ang Ⅱ和TnT含量与心肌中TNF-α、Ang Ⅱ含量。 结果 烧伤大鼠烧伤后3 h血浆cTnT 呈显著升高, 12 h 达峰值, 24 h显著高于对照组;烫伤后6 h 血浆和心肌组织TNF-α含量显著高于对照组(P <0.01), 12 h 达峰值;伤后1 h 血浆Ang Ⅱ含量呈显著升高, 伤后24 h 血浆及心肌中Ang Ⅱ高于对照组;牛磺酸治疗组血浆cTnT、TNF-α和Ang Ⅱ水平较烧伤组均有显著性降低。血浆TNF-α、Ang Ⅱ含量与血浆cTnT 变化密切相关。 结论 牛磺酸对严重烫伤后心肌损伤有较好的保护作用。     

茶多酚对缺血心肌组织PIP2和IP3水平的影响

目的 观察荼多酚对急性缺血心肌磷酯肌醇代谢的影响。方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型。结果 急性心肌缺血10min,心肌磷酯肌醇代谢功能增强,缺血组心肌PIP₂、IP₃水平明显高于非缺血对照组(P<0.01);茶多酚能显著抑制急性心肌缺血所致心肌组织PIP₂和IP₃水平的升高。结论 茶多酚心肌保护作用与抑制缺血心肌组织磷酯肌醇代谢有关。     

红杉醇对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的: 观察红杉醇对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响。方法: 采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型35只,灌服红杉醇(50、25及 12.5 mg·kg^-1·d^-1)6周,每天1次。全自动生化分析仪测定血清TG、TC、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量;ELISA法检测血浆游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)、肝脏载脂蛋白A₁(Apolipoprotein A₁,Apo-A₁)和载脂蛋白B₁(Apolipoprotein B₁,Apo-B₁) 含量;放射免疫法测定肝组织瘦素(Leptin)含量;MASSON染色观察肝脏病理改变。结果: 红杉醇能显著降低模型大鼠血脂、FFA含量,下调肝组织Apo-B₁及Leptin水平,上调肝组织Apo-A₁的含量,减轻肝细胞脂肪变性,减少肝细胞间质和血管旁胶原沉积。结论: 红杉醇具有调节2型糖尿病大鼠脂代谢、减轻脂肪肝和肝脏胶原沉积的作用。     

血管紧张素受体阻滞剂对自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的: 研究自发性高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE₂) 蛋白表达水平及血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体阻滞剂厄贝沙坦对ACE₂表达的影响, 以了解高血压的病理改变, 探讨血管紧张素受体阻滞剂治疗高血压又一可能机制。方法: 20 只14 周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为自发性高血压大鼠(SHR) 组(n =10) 和厄贝沙坦组(n =10) 。厄贝沙坦组每只大鼠以厄贝沙坦50 mg·kg^-1·d^-1灌胃, 给药时间12 周。同时取14 周龄雄性京都种Wistar 大鼠为正常对照(WKY) 组(n =10) 。利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾脏ACE₂ 表达。结果: 与WKY 组比较, SHR 组ACE₂ 表达显著减少(0.72 ±0.11 vs 1.11 ±0.15); 与SHR 组比较, 厄贝沙坦组经12 周治疗后, ACE₂ 表达明显提高(1.03 ±0.13 vs 0.72 ±0.11) 。结论: 高血压大鼠肾脏ACE₂表达减少, 血管紧张素Ⅱ-Ⅰ 型受体阻滞剂对高血压大鼠肾脏ACE₂ 的表达有上调作用。此作用可能是血管紧张素受体阻滞除阻滞血管紧张素受体以外的另一间接调节肾素-血管紧张素系统的途径。     

雷公藤红素对小鼠的免疫抑制作用及其对IL-6 mRNA 表达影响的研究

目的:研究雷公藤红素对小鼠的免疫抑制作用及对细胞因子IL-6 mRNA 表达的影响。方法:采用碳粒廓清、迟发型变态反应、血清溶血素测定和T 淋巴细胞转化实验, 观察雷公藤红素对小鼠免疫功能的影响;运用RT-PCR 半定量法研究雷公藤红素对小鼠肝脏IL-6 mRNA 表达影响。结果:雷公藤红素能抑制小鼠血清溶血素水平(400 μg/kg), 且与剂量呈依赖关系;小鼠耳廓肿胀度研究表明, 雷公藤红素能使迟发型变态反应程度减轻(400 μg/kg );雷公藤红素剂量在0.25 μg/mL 时, 可以明显抑制植物血凝素(PHA)诱导的细胞增殖;雷公藤红素800 μg/kg 能对抗CCl₄ 引起的急性肝损伤小鼠肝脏IL-6 mRNA 含量的升高。结论:雷公藤红素在一定程度上能抑制小鼠的免疫功能, 能抑制炎症细胞因子IL-6 基因的过度表达。     

κ-阿片受体与β1-肾上腺素受体交互作用抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的: 观察选择性 kappa 阿片受体(kappa opi-oid receptor,κ-OR)与 β 肾上腺素受体(β adrenergicreceptor, β-AR)在心肌细胞肥大方面的交互作用。方法: 以 体 外 培 养 的 乳 鼠 心 肌 细 胞 为 模 型, 10 μmol°L^-1 的异丙肾上腺素(β肾上腺素受体激动剂,β-AR)诱导心肌肥大, 观察 1μmol°L^-1的 U50,488H(κ-OR激动剂,U50)对其作用。进一步探索在100 nmol°L^-1ICI118, 551(β₂ -AR 阻断剂)存在情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的作用。用 Lowry's 法测心肌细胞的蛋白质含量;用消化分离法,并利用计算机图象分析系统测心肌 细胞的体积;用[³H]leucine 掺入法测定心肌细胞蛋白的合成。结果: 异丙肾上腺素使心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成明显增加;1 μmol°L^-1 的 U50, 488H 使 ISO 诱导的心肌细胞总蛋白含量、体积、蛋白合成减少, 这种作用可被选择性 κ-OR阻断剂-nor-BNI(norbinaltorphimine)抑制。在 ICI118, 551 存在的情况下, U50 也能起到减弱 ISO 诱导心肌细胞肥大的作用。结论: U50,488H 通过激活 κ-OR 与β₁ -AR 交互作用抑制 ISO 所诱导的心肌细胞肥大。