异丙酚、 咪达唑仑抑制交感神经节细胞钠通道电流的联合作用1

目的: 研究异丙酚、咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流的联合作用, 探讨两者复合诱导时循环稳定的可能机制。 方法: 全细胞膜片钳技术记录急性分离 SD 大鼠(7~ 10 d)颈上交感神经节细胞钠通道电流;等辐射线图法分析异丙酚、 咪达唑仑复合对交感神经节细胞钠通道电流的影响。 结果: 在钳制电压(V_h ) 80 mV、 刺激电压(V_t )0 mV条件下, 临床相关浓度的异丙酚、咪达唑仑分别使钠通道电流峰值降低27.66%(P <0.01)和19.98%(P <0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流受抑制时的浓度(IC₅₀)分别为 33.12 μmol·L^-1 和18.35 μmol·L^-1。 1/4、3/4 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的95%可信区间内; 1/2 IC₅₀ 的异丙酚与咪达唑仑合用时的 IC₅₀ 数值点落在理论上的相加等效线的 95%可信区间的左下方。结论: 临床相关浓度的异丙酚、 咪达唑仑对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性; 除等效剂量合用呈协同抑制作用外, 两者复合主要呈相加抑制交感神经节细胞钠通道流; 复合诱导时循环稳定可能与两者催眠作用明显协同导致诱导剂量的降低, 从而减弱对交感神经的抑制有关。     

地西泮抑制交感神经节细胞钠通道电流的机制

目的 研究地西泮对交感神经节细胞钠通道电流的抑制作用机制。方法 酶消化法急性分离SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 全细胞膜片钳技术记录地西泮对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压(V_h) -80 mV, 刺激电压(Vt) 0 mV 条件下,0.3 μmol·L^-1 地西泮使钠电流峰值降低14.76 %(P <0.01), 其抑制作用与浓度呈正相关(r =0.99,P <0.01), IC₅₀为6.06 μmol·L^-1;钳制电位不同, 抑制作用也不同(P <0.05), V_h -60 mV时的IC₅₀ 为4.60 μmol·L^-1。3.0 μmol·L^-1的地西泮使电流-电压曲线峰值平均降低48.94 %, 峰值向去极化方向移动约10 mV; 对激活曲线无明显的影响(P >0.05), 用药前、后50 %的通道激活时的去极化电压(V_1/2)分别为:-24.64 mV、-23.75 mV; 3.0 μmol·L^-1的地西泮使稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(20.12 mV, P <0.01), 用药前、后50 %的通道灭活时的条件脉冲电压(V_1/2) 分别为:-64.13 mV、-84.25 mV。结论 地西泮对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用, 且呈浓度及电压依赖性;其抑制作用主要与优先结合钠通道的失活状态而影响钠通道的失活有关。提示交感神经节参与介导地西泮的循环抑制作用。     

咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的抑制作用

目的 研究咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的影响,探讨其循环抑制机制。方法 酶消化法急性分离SD大鼠(8~12d)颈上交感神经节细胞,全细胞膜片钳技术记录咪唑安定对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压-80mV,刺激电压0mV条件下,临床相关浓度的咪唑安定(0.3μmol·L^-1)使钠通道电流峰值降低19.98%(P<0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流峰值受抑制时的咪唑安定浓度(IC₅₀)约为18.35μmol·L^-1;3μmol·L^-1的咪唑安定使钠电流稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(7.75mV,P<0.05),用药前、后50%的通道灭活时的条件脉冲电压(V1/2)分别为:-40.39mV、-48.14mV;3μmol·L^-1的咪唑安定对钠电流的激活曲线几乎无影响。结论 临床相关浓度的咪唑安定对交感神经节全细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且主要与钠通道的失活有关。提示咪唑安定的循环抑制作用可能与其直接抑制交感神经有关。     

咪达唑仑对交感神经元电压门控性钾电流的影响

目的: 观察不同浓度咪达唑仑对交感神经元电压门控钾通道电流的影响, 探讨临床浓度咪达唑仑对钾电流的作用是否与抑制交感神经系统有关。方法: 用酶消化法获得急性分离的SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 应用膜片钳技术记录不同浓度的咪达唑仑对电压门控钾电流的影响。结果: 在钳制电位(Vh)-80 mV, 刺激电压(Vt)^-100 mV ~ 30 mV, 时程160 ms 条件下, 不同浓度的咪达唑仑对电压门控钾电流均有抑制作用, 且呈浓度依赖性。临床相关浓度的咪达唑仑(0.3 μmol·L^-1) 使钾通道电流峰值下降3.89 %(P =0.88) 。50 %钾通道电流峰值受抑制时的咪达唑仑浓度(IC₅₀) 约为70.06 μmol·L^-1 。结论: 咪达唑仑对交感神经元电压门控钾电流具浓度依赖性抑制作用, 但临床浓度咪达唑仑对钾电流影响较小。     

过氧化氢对大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的: 研究过氧化氢(H₂O₂)对单个大鼠心室肌细胞L-型钙通道电流(Ica,L)的影响。方法: 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞;用标准的全细胞膜片钳技术记录钙通道电流,观察5mmol·L^-1H₂O₂引起单个大鼠心室肌细胞Ica,L改变。结果: 在5mmol·L^-1H₂O₂作用下,大鼠心室肌细胞Ica,L峰值电流密度从4.89±0.52pApF增加至9.80±0.65pApF(P<0.05,n=10),电流-电压曲线下移,但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变;H₂O₂对Ica,L激活时间常数-电压曲线无明显影响,但可使其灭活时间常数-电压曲线明显向上移;H₂O₂对Ica,L稳态激活曲线无明显改变,但可使其稳态失活曲线明显左移,V0.5从(-26.85±5.3)mV左移至(-37.20±4.5)mV(P<0.05,n=5)。结论: H₂O₂可以增加大鼠心肌细胞Ica,L,且使其失活明显减慢。     

体外“鸡尾酒法”研究5-羟基雷公藤内酯醇对人肝微粒体CYP450酶亚型的抑制

目的: 评价(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(T8)在体外对人肝微粒体CYP450酶7种主要亚型CYP3A/5、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2B6和CYP2C8的直接抑制作用和时间依赖性抑制作用,为临床药物-药物相互作用研究提供指导。方法: 本实验分别利用IC₅₀和IC₅₀ 偏移进行评价。结果: T8对上述7种亚型的直接抑制IC₅₀ 都高于 100 μmol/L,时间依赖性抑制研究中没有出现 IC₅₀ 偏移。结论: T8对7种主要的CYP450酶亚型没有直接抑制和时间依赖性抑制作用。临床上发生由于T8抑制上述7种亚型的CYP450酶导致的药物-药物相互作用的可能性较小。     

应用膜片钳技术研究豆腐果苷对hERG钾通道电生理功能的影响

目的: 探讨豆腐果苷对hERG钾离子电流的影响及潜在心脏毒性。方法: 使用稳定转染hERG基因的CHO细胞,通过全细胞膜片钳技术检测不同浓度豆腐果苷对hERG通道电流活动的作用。结果: 豆腐果苷对hERG钾通道的IC₅₀约为47 μmol/L,比临床常规剂量下人体内峰浓度高1 000倍以上。结论: 临床常用剂量下,豆腐果苷发生与hERG通道抑制作用相关的心脏安全性问题的可能性非常小。     

17β-雌二醇对离体猪基底动脉的影响

目的与方法 研究17β-雌二醇(E₂)对KCl和5-羟色胺(5-HT)引起离体猪基底动脉收缩的拮抗及保护作用。结果 E₂浓度依赖性地对抗KCl引起的最大收缩作用,IC₅₀为10^-4.8mol/L。E₂预处理后,浓度依赖性地抑制KCl引起的最大收缩,IC₅₀为10^-4.8mol/L,并降低5-HT引起收缩的浓度效应曲线的最大反应,其pD₂'为4.57。结论 E₂对离体猪基底动脉有舒张作用。     

银杏叶提取物对豚鼠心室肌细胞动作电位及L 型钙离子通道的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGB)对豚鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙通道的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术的电流钳记录动作电位和电压钳记录L-型钙离子通道电流(I_Ca-L)。结果:银杏叶提取物(原液含银杏黄酮甙0.804 g·L^-1, 银杏内酯0.06 g·L^-1)明显缩短心室肌细胞动作电位时程(APD), 1 ∶800 稀释液致APD₉₀ 缩短13 %(P <0.05), 1 ∶200 稀释液致APD₉₀缩短23 %(P <0.05);银杏叶提取物对心肌细胞L-型钙离子通道的开放有抑制作用, 在1 ∶800 时I_Ca-L 峰值降低15 %(P <0.05), 1 ∶200 时I_Ca-L 峰值降低42 %(P <0.05), 均呈浓度依赖性, 随着药物浓度的增加, I-V 关系曲线逐渐上移, 但出现电流峰值的电压不变。结论:银杏叶提取物能明显缩短APD, 抑制心肌细胞钙离子通道的开放, 具有明显的浓度依赖关系, 可能是其抗心律失常的分子基础。     

盐酸埃他卡林对大鼠海马神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响

目的: 研究盐酸埃他卡林(Ipt) 对脑神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响。方法: 采用原代培养的大鼠海马神经元, 应用膜片钳全细胞记录技术, 记录Ipt 对培养的海马神经元谷氨酸或天冬氨酸(NMDA) 诱发电流及神经元突触后电流的影响。结果: Ipt (1 ~ 100 μmol·L^-1) 可浓度依赖性地对抗培养的海马神经元谷氨酸或NMDA 诱发电流, 并为ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲30 μmol·L^-1所对抗。Ipt 抑制培养的海马神经元之间突触联系形成的自发兴奋性突触后电流, 降低其发放频率, 抑制其电流幅度;但对微小兴奋性突触后电流无显著性影响。结论: Ipt 可阻断脑神经元谷氨酸受体功能, 抑制脑神经元谷氨酸的兴奋性突触传递, 其作用与ATP 敏感性钾通道相关。     

异丙酚对氯胺酮所致大脑皮质神经元损害保护作用的机制

目的: 观察异丙酚对氯胺酮诱导的 c-fos 基因在大鼠大脑后扣带回皮质区表达的影响, 并探讨异丙酚预防或减轻氯胺酮所致精神症状及神经损害的机制。方法: 雄性 Wistar 大鼠 30 只, 随机分为生理盐水 5 ml 组、氯胺酮 100 mg°kg^-1组、异丙酚 100 mg°kg^-1组、异 丙 酚 50 mg°kg^-1+氯 胺 酮 100 mg°kg^-1组、异 丙 酚 100 mg°kg^-1+氯 胺 酮 mg°kg^-1 组。异丙酚与氯胺酮用药间隔 15 min。所用药物用生理盐水配至 5 ml 经腹腔注射。各组动物于用药后 2 h, 断头处死, 分离脑组织, 用半定量RT-PCR 技术和免疫组织化学方法检测各组 c-fosmRNA与 c-fos 蛋白在大鼠后扣带回皮质区表达的变化。结果: 氯胺酮可明显诱导 c-fos mRNA 与 c-fos蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达;异丙酚自身不能诱导 c-fos mRNA 和 c-fos 蛋白的表达;预先给予异丙酚可显著抑制氯胺酮诱导的 c-fos mRNA 和 c-fos蛋白在这一区域的表达, 且抑制效应成剂量依赖性。结论: 异丙酚可抑制氯胺酮诱导的 c-fos mRNA 与 c-fos蛋白在大脑后扣带回皮质区的表达, 这可能是其预防或减轻氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制之一。     

异丙酚靶控输注系统研究不同麻醉深度下兔海马c-fos mRNA 水平的改变

目的:研究异丙酚不同麻醉深度对兔脑海马c-fos mRNA 水平的影响。方法:30 只日本大耳兔,随机分为3 组, 即对照组, 浅麻醉组, 深麻醉组。浅麻醉组, 深麻醉组予以异丙酚靶控输注(TCI) 达到所需麻醉状态30 min 后断头处死, 0 ～ 4 ℃ 分离取脑, 采用原位杂交法测定海马各区c-fos mRNA 表达水平。结果:与对照组比较, 海马CA1 区, 齿状回(DG) 区c-fos mRNA 表达水平随着麻醉深度的增加而显著升高(P <0.05) 。海马CA3 区未见明显变化。结论:异丙酚可能通过影响c-fos mRNA 的表达, 从而影响随后反应基因的转录而发挥抑制中枢的作用且此作用存在区域性差异。     

7-硝基吲唑对兔异丙酚麻醉深度调节的研究

目的: 研冗7-硝基丨吐（7-nitro indazolei,7-NI)对兔异丙酚麻醉深度的调节作用。方法: 20只日本大耳兔,雌雄不限,随机分为2组(n=10):对照组经腹腔注射2 ml花生油;7-硝基吲唑组经腹腔注射50 mg·kg^-17-硝基吲唑。20 min后经颈外静脉连接Graseby 3 500注射泵进行靶控输注（TCI),以咀嚼反射消失作为浅麻醉标志,测定达浅麻醉状态所需异丙酚TCI血药浓度、双频指数（BIS)值及心率变异指数（HRVI)值。对照组达浅麻醉状态后再次经腹腔注射50 mg·kg^-17-硝基吲唑,观察BIS值、HR-VI值变化。结果: 50mg·kg^-17-硝基吲唑显著降低兔达浅麻醉状态时所需TCI农度。对照组达浅麻醉状态后再次注射50 mg·kg^-17-硝基吲唑麻醉深度表现加深趋势,但无显著的统计学意义（P>0.05)。结论: 7-硝基吲唑通过选择性抑制中枢nNOS活性增强异丙酚麻醉效能,提示中枢NO/cGMP信号转导途径在异丙酚全麻作用机制中发挥作用。异丙酚可能通过抑制中枢nNOS活性影响NO/cGMP信号转导系统。     

异丙酚对离体大鼠缺血/再灌注心肌丙二醛和含水量的影响

目的 探讨异丙酚对离体大鼠缺血/再灌注心肌丙二醛(MDA)和水肿程度的影响。方法 采用改Langendorff 离体大鼠心脏模型,将24 只大鼠随机分成4 组。正常对照组:用K-H 液持续灌注80 min;缺血/再灌注模型组:用K-H 液预灌30 min,然后用4 ℃ 的St.Thomas 停搏液使心脏停跳,常温下全心停灌20 min,K-H 液再灌注30 min;异丙酚组和异丙酚+格列本脲组:从预灌第15 min 改用含相应药液的K-H 液灌注,停灌同缺血/再灌注模型组,然后用含相应药液的K-H 液再灌注30 min 。测定心肌含水量、MDA 含量和冠脉流出液肌酸激酶(CK)活性。结果 缺血再灌注可使心肌含水量、MDA 含量和CK活性明显增高(P <0.01),30 μmol·L^-1 异丙酚能显著减轻上述损伤性变化,格列本脲对异丙酚的心肌保护作用无影响(P >0.05)。结论 心肌缺血/再灌注可致心肌水肿,异丙酚减轻水肿作用与其抗氧化有关,而与ATP-敏感性钾通道的开放无关。