人乳头瘤病毒治疗型疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致尖锐湿疣的主要原因,约有90%的生殖器疣由HPV6、11型引起。我国妇女宫颈癌组织中HPV感染率大于95%,其中HPV16、18型占90%以上。随着对HPV及其致病机理研究的深入和免疫学的发展,利用免疫学方法治疗HPV引发的疾病显示出极大的应用前景。本文就人乳头瘤病毒治疗型疫苗的研究进展作一综述。     

已上市人乳头瘤病毒疫苗的概况及其在国内的临床研究进展

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是诱发该病的主要病原。HPV疫苗是全球首个预防癌症的疫苗,已在多个国家广泛应用。目前成功上市的宫颈癌疫苗有默沙东公司研发的4价和9价Gardasil及葛兰素史克公司(GSK)研发的Cervarix;在我国,HPV疫苗于2016年7月上市。本文就上述疫苗的基本情况、安全性、保护效果及免疫原性作一综述,并对HPV疫苗在国内的临床研究现状进行简介。     

宫颈癌筛查女性对人乳头瘤病毒疫苗认知及接种意愿的调查

正人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种无包膜的双链小DNA病毒,有极强的嗜上皮细胞属性,可引发皮肤及黏膜病变。HPV感染是常见的性传播疾病之一,持续感染16、18等高危型HPV可导致宫颈浸润癌~[1]。研究证明,接种HPV疫苗可有效预防特定亚型的HPV感染,并可减少70%左右的宫颈癌发生~[2]。HPV疫苗在美国上市已近10年,国产疫苗也有望在不久的将来应用于临床。本文调     

人乳头瘤病毒疫苗效力评价用核酸检测试剂的讨论及思考

<正>宫颈癌是影响女性健康的第二常见的癌症,每年约有50多万女性罹患宫颈癌,死亡约20多万例,严重影响女性健康。宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续性感染密切相关。目前,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)国际癌症研究中心将12种HPV型别(HPV16、18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59)定为高危型HPV(High-risk HPV,HR-HPV),HPV66、68、73型别列为潜在高危风险型别[1],其中,约70%宫颈癌患     

人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

宫颈癌是全球妇女恶性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二种最常见的恶性肿瘤。人乳头瘤病毒(Human papillo-mavirus,HPV)与宫颈癌的发生密切相关,利用分子生物学方法构建的HPV疫苗对宫颈癌具有预防和治疗作用。目前,HPV疫苗的研究得到了迅速发展,并涌现出许多新的开发策略。本文对HPV疫苗的研究进展和前景作一综述。     

人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期蛋白L1 DNA疫苗的免疫原性及安全性

目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价。方法将HPV18L1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNAL1。使用脂质体将重组质粒转染COS7细胞,用Westernblot检测体外瞬时表达的抗原。将重组质粒pcDNAL1肌肉注射BALBc小鼠(100μg只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检测质粒的组织分布。采用ELISA法检测DNA疫苗免疫后抗核抗体和抗双链DNA抗体的效价。结果重组质粒可在真核细胞中有效地转录和表达HPV18L1蛋白。小鼠免疫后可检出较高滴度的抗HPV18L1抗体和特异条带。免疫后质粒主要分布在注射部位,且随着时间延长被清除;未检测到抗核抗体和抗双链DNA抗体。结论HPV18L1重组质粒可诱导小鼠产生特异的体液免疫反应,且该DNA疫苗是安全的,为进一步研制开发HPVDNA疫苗打下了基础。     

人乳头状瘤病毒疫苗2006年有望在墨西哥上市

墨西哥科学家日前宣布，人乳头状瘤病毒（HPV）疫苗的研制在墨已进入人体试验阶段，2006年有望获准上市，批量使用。疫苗的研制工作主要由墨西哥国立自治大学的实验室科学家承担。科学家们已对不同类型HPV患者进行过该疫苗的人体试验，下一步试验对象包括儿童和已感染该病毒的妇女，以进一步检验疫苗对HPV病毒的预防效果。     

HPV疫苗防治宫颈癌的研究进展

宫颈癌是国内外危及女性生命的高发肿瘤之一,其发病率在女性恶性肿瘤中居第2位。子宫颈癌的病因学研究在80年代取得的显著进展,明确了人乳头瘤病毒与子宫颈癌病因学联系,HPV基因工程疫苗的研制成为近年来研究热点。而HPV疫苗研制的成功则是子宫颈癌防治研究的里程碑。     

四价人乳头瘤病毒疫苗接种后1例偶合肾病综合征

<正>世界卫生组织(WHO)推荐用人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗预防宫颈癌及其他HPV相关疾病[1]。四价HPV疫苗于2017年5月18日在中国大陆获批上市,接种对象为20～45周岁女性。本文现对第1剂四价HPV疫苗接种后的1例肾病综合征进行报道。     

重组人乳头瘤病毒疫苗免疫原性检测方法的比较

目的评价重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗免疫原性2种检测方法的相关性。方法应用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和假病毒中和(pseudovirion-based neutralization assay,PBNS)法对26份阴性血清样本、34份自然感染HPV16或HPV18的血清样本及30份接种HPV16/18型双价疫苗后7个月的血清样本进行抗体滴度检测,并采用Pearman进行相关性分析。结果 3组样本的抗HPV16型和HPV18型抗体滴度的2次检测结果比值显示,试验室内重复性较好;2种方法检测血清样本抗HPV16型抗体滴度的总体相关系数为0.826,抗HPV18型为0.921;自然感染HPV的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.519,抗HPV18型为0.613;接种HPV16/18型双价疫苗后的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.671,抗HPV18型为0.879。结论间接ELISA法和PBNS法在检测血清样本中抗HPV16/18型抗体滴度时均具有较好的重复性和相关性,其中以接种疫苗后的血清样本中抗体滴度相关性最佳,为HPV疫苗免疫原性的检测及剂量探索试验提供了参考依据。     

人乳头瘤病毒中和抗体检测方法的研究进展

人乳头瘤病毒疫苗已成为预防宫颈癌的最根本手段,而疫苗成功的关键是诱导有效的体液免疫,产生具有保护作用的中和抗体。本文就目前几种中和试验方法的原理及其优缺点进行综述。     

人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒的特征分析

目的对人乳头瘤病毒18型(human papilloma virus 18,HPV18)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)进行特征分析。方法采用质谱技术分析HPV18 VLPs(重组大肠埃希菌表达系统表达L1蛋白,自组装成为VLPs)蛋白质一级结构,圆二色谱技术分析蛋白质二级结构,高效液相色谱、透射电镜和动态光散射技术分析蛋白质三级和四级结构;同时采用假病毒中和试验分析HPV18 VLPs的免疫原性,SDS-PAGE法分析样品纯度。结果HPV18 VLPs蛋白翻译后修饰主要包括氧化和去酰胺化,完整L1单体分子量约56 000;二级结构中螺旋、折叠、转角、不规则卷曲的比例分别为8. 4%、46. 1%、18. 5%、30. 2%;颗粒纯度达99%以上,且形态饱满完整,大小均一,直径约60 nm。HPV18 VLPs诱导小鼠产生中和抗体滴度的几何均值达3 000以上。HPV18 VLPs中完整L1单体含量达95%以上。结论 HPV18 VLPs结构完整,颗粒大小均一,纯度高,免疫原性良好,本研究为宫颈癌疫苗安全性和有效性的评价奠定了基础。     

wH0召开修订天花疫苗规程研讨会

世界卫生组织于2002年5月2～3日在日内瓦总部召开了“天花疫苗生产和检定规程修订研讨会”。参加会议的有来自欧洲EMEA、美国FDA和CDC、英国NIBSC、俄国生物制品标准化研究所、比利     

两种重组人乳头瘤病毒52型免疫原性检测方法相关性的比较

目的比较两种重组人乳头瘤状病毒52型(human papilloma viruses type 52,HPV52)免疫原性检测方法的相关性。方法分别采用假病毒体外中和试验(pseudovirus based neutralization assay,PBNA)及酶联免疫吸试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫后小鼠血清中HPV52型中和抗体滴度,比较两种检测方法的相关性。结果重组四价HPV疫苗免疫小鼠血清中,HPV52型中和抗体滴度与抗体滴度的Spearman相关系数为0. 765,P 0. 01;不同状态HPV52型VLP蛋白颗粒免疫小鼠血清中,HPV52型中和抗体滴度与抗体滴度的Spearman相关系数为0. 809,P 0. 01。结论采用PBNA法检测的HPV52型中和抗体滴度与ELISA法检测的抗体滴度具有较高的相关性。     

重组人乳头瘤病毒33型L1病毒样颗粒的表达、纯化及免疫原性评价

目的利用毕赤酵母表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)33型L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),评价其在小鼠体内的免疫原性。方法构建HPV33 L1表达质粒,电转化毕赤酵母,筛选高表达菌株,15 L发酵罐发酵,离子交换和凝胶体积排阻层析分离纯化HPV33 L1 VLPs,纯化后样品免疫小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠免疫后血清中和抗体滴度。结果质粒HPV33 L1-pPIC3. 5K经双酶切及测序鉴定证明构建成功;毕赤酵母表达产物经Western blot分析,可见相对分子质量约56 000的目的条带;透射电镜下可见直径约60 nm的病毒样颗粒;纯化后的HPV33 L1 VLPs纯度可达95%以上;0. 4和0. 04μg HPV33 L1 VLPs免疫后小鼠血清中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为3 200和566,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论利用毕赤酵母成功表达了HPV33 L1 VLPs,并具有良好的免疫原性。     

人乳头瘤病毒16型L1蛋白的纯化及免疫学活性

目的纯化人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,并分析其免疫学活性,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。方法采用电洗脱的方法纯化目的蛋白,通过免疫双扩散和ELISA法检测其免疫反应性。将该蛋白免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后的目的蛋白经凝胶灰度扫描显示,其纯度达到95%,免疫双扩散和ELISA结果显示,宫颈癌病人血清抗体效价明显高于健康人,表明该蛋白具有良好的抗原性,小鼠免疫力试验结果表明该蛋白具有较好的免疫原性。结论电洗脱法得到的目的蛋白纯度较高,且有较好的免疫学活性。     

新型层析技术在人乳头瘤病毒L1蛋白病毒样颗粒快速纯化中的应用

目的采用新型层析技术快速纯化人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。方法应用新型的基于阴离子交换和分子筛原理的色谱填料CaptoCore 700初纯昆虫细胞表达的HPV L1蛋白VLPs,再用高流速、高分辨力的阴离子交换树脂Capto Q ImpRes进一步纯化。各步纯化的样品经SDSPAGE进行分析,采用ImageQuant图像分析软件分析两步纯化后蛋白的纯度,并对初纯蛋白进行质谱分析;改良Lowry法测定初纯蛋白的浓度,并计算杂蛋白去除率。结果昆虫细胞表达的HPV L1蛋白经CaptoCore 700初纯后,目标蛋白组成的VLPs存在于流穿组分中,经质谱分析,为目的蛋白HPV L1;料液处理量为1个柱体积时,杂蛋白去除率达80%,料液处理量为2个柱体积时,杂蛋白去除率为76%。初纯的蛋白经Capto Q ImpRes进一步层析纯化,HPV L1蛋白的纯度接近100%。结论 CaptoCore 700加Capto Q ImpRes两步层析纯化能够快速高效地纯化HPV L1蛋白VLPs,整个工艺过程简单、快速、高效、易放大,适用于大规模生产。     

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1基因重组MVA病毒的构建及鉴定

目的研制预防人乳头瘤病毒(HPV)感染的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)活载体疫苗。方法将HPV16L1基因插入MVA病毒转移载体psc11M2的P7·5启动子的下游,构建转移质粒psc11M2-L1,与MVA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。通过9轮蓝斑筛选,以PCR和Westernblot鉴定重组病毒。结果获得的含目的片段的重组MVA病毒,表达产物与鼠抗人HPV16L1抗体发生阳性反应,目的蛋白相对分子质量约为55000。结论已成功地构建了可正确表达HPV16L1基因的重组MVA病毒株。     

人乳头瘤病毒16型L1/E7嵌合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的克隆人乳头状瘤病毒16型(HPV16)L1/E7嵌合蛋白基因,并在毕赤酵母中表达。方法PCR扩增HPV16L1/E7基因,并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC-3·5K和pPIC-9K中,构建含HPV16L1/E7基因的pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,经测序证实插入的外源基因读码框正确后,分别转入GS115和KM71菌株中,筛选阳性转化菌株,经PCR鉴定,甲醇诱导表达HPV16L1/E7嵌合蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,电镜观察,并经离心法纯化VLPs。结果HPV16L1/E7基因已成功插入pPIC-3·5K和pPIC-9K载体中,共获得6株KM71HPV16L1/E7-pPIC3·5K、5株GS115HPV16L1/E7-pPIC3·5K、1株KM71HPV16L1/E7-pPIC9K和2株GS115HPV16L1/E7-pPIC9K阳性转化菌株,并可表达相对分子质量约为69000的蛋白,与预期值一致。表达量约为0·35~1·04mg/ml。Westernblot显示该蛋白可与抗-HPV16L1蛋白和抗-HPV16E7蛋白的单克隆抗体特异性结合。在透射电镜下可观察到VLPs的形成,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。经纯化的目的蛋白纯度接近100%。结论已成功构建了pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,阳性转化菌株可表达结构与野生型HPV16一致的VLPs。     

人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)是导致婴幼儿及老年人下呼吸道感染的主要病原体之一。hRSV基因组全长为15 222 bp,包含10个基因,共编码11种蛋白质(9种结构蛋白,2种非结构蛋白),不同蛋白在hRSV致病过程中发挥不同作用。随着对hRSV生物学和结构特性的深入研究,已研发出多种类型的hRSV疫苗,如hRSV减毒活疫苗hRSV?NS2/?1313/I1314L已进入Ⅱ期临床试验,hRSV亚单位蛋白疫苗Pre-F-GCN4t已进入Ⅲ期临床试验等。本文就hRSV的生物学特性及研制进展较快的hRSV疫苗类型作一综述,以期为我国hRSV疫苗的研发提供参考。