海藻糖合成酶产生菌筛选、鉴定及其产酶特性

以麦芽糖为唯一碳源高盐培养基,经高温培养,从温泉水样及其附近土壤中筛选得到一株菌株T2,经过生物合成途径初步验证,该菌株产海藻糖合酶,能够通过海藻糖合成酶（TreS）途径将麦芽糖转化为海藻糖。菌株T2为革兰氏阳性菌,杆状,有芽孢,经过生物学鉴定,将其初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）。对其产海藻糖合酶的酶学性质进行了研究：酶反应最适作用温度为60 ℃,在60 ℃条件下保温100 min仍能保持酶活性80.7%;最适作用pH值为7.0,在pH 6.0～7.5范围内稳定。采用正交试验对其发酵培养基配方进行了优化研究,确定了最佳的培养基组成为牛肉膏3.0 g/L,麦芽糖20.0 g/L,蛋白胨7.5 g/L,无机盐（K2HPO4＋NaH2PO4＋MgSO4·7H2O）3.0 g/L。在此条件下,菌株T2产海藻糖合酶酶活力达到310.6 U/L。     

海藻糖合酶基因在毕赤酵母中的表达

首次构建来源于恶臭假单胞菌海藻糖合酶基因（AE015451.1）的真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达。PCR扩增目的基因,经EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的pPICZaA中,经PCR检测和序列测定准确后,通过电击法将重组质粒转入毕赤酵母GS115中,利用含Zeocin的YPD平板筛选到阳性转化子,提取阳性转化子基因组并利用特异性引物PCR得到一条与目的基因大小相同的条带,说明目的基因转入成功,诱导重组蛋白表达并用SDS-PAGE检测可见一条约76 ku与目的蛋白大小预测相符合的蛋白条带,最后HPLC检测重组蛋白可将麦芽糖特异转化为海藻糖,说明外源表达的海藻糖合酶具有一定酶活。通过PCR、SDS-PAGE和HPLC结果说明成功构建重组pPICZaA-TreS质粒并整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,且海藻糖合酶基因得到预期的表达并具有活性,为下一步研究奠定基础。     

透性化海藻糖合酶的研究

海藻糖是一种新型食品添加剂 ,目前其主要生产方法是利用微生物酶法合成。文章研究了在不易破壁取得胞内酶的情况下 ,采用渗透处理细胞技术生产透性化细胞酶的方法 ,获得较高酶活力     

壳聚糖固定化海藻糖合酶

利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60 ℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。     

TreY-TreZ途径高产海藻糖菌株的筛选

为筛选能以TreY-TreZ途径合成海藻糖的菌株,对采自鲁山中汤温泉水样、温泉土样及面粉厂附近的土样,经高渗平板高温培养,以碘-淀粉水解圈作为初筛方法,通过TLC及HPLC检测,获得了2株产海藻糖的节杆菌属新菌株,经过初步的途径验证,证实这2株菌均以TreY-TreZ途径生成海藻糖。     

大肠杆菌产海藻糖合成酶发酵条件优化

采用单因素试验和正交试验,研究海藻糖合成酶发酵过程中加诱导剂时菌浓OD600 nm、诱导温度、诱导时间、海藻糖合成酶转化海藻糖时间4个因素对转化率的影响,确定大肠杆菌产海藻糖合成酶转化海藻糖的最优条件组合。结果表明,转化时间和诱导温度对转化率的影响较大,在大肠杆菌生长到菌浓OD600 nm值为0.8时加诱导剂,诱导温度26 ℃保持8 h,在转化过程中反应14 h为最佳搭配。在此最佳条件下,海藻糖的转化率可达69.29%。     

极地微生物产海藻糖合成酶菌株的筛选

来源于极地的微生物经过筛选,得到能产海藻糖合成酶的耐冷菌株S1和S2,分别用TLC、DNS和HPLC的方法确证其酶反应的产物为海藻糖.以质量分数1%麦芽糖为底物,S1粗酶液能将麦芽糖转化为海藻糖,并且没有明显的葡萄糖生成,在pH值7.0的磷酸盐缓冲液下15℃反应48h,经过HPLC测定转化率最高达到75.2%.     

酶法生产海藻糖研究进展

海藻糖是一种安全的非还原性二糖,广泛存在于自然界中,具有保湿性,抗冻抗干燥性,热酸稳定性等特殊的生物学功能,对生物大分子有着非特异性的保护作用,因此在医学、农业、化妆品、食品等行业应用潜力巨大.自20世纪80年代后,各国相继开展了海藻糖生理生化和分子生物学的研究,该糖现已成为国际上最近开发的主要低聚糖之一.本文介绍了海藻糖的生产背景、功能和机理、研究意义和酶合成的生产方法,着重讨论了透性化细胞技术生产海藻糖的国内外研究进展和意义,列举了一些有实际意义的实例,并指出在多种发酵生产海藻糖的技术中,利用基因工程大幅度提高酶活,将透性细胞固定,连续化生产海藻糖成为未来生产的趋势,特别是利用海藻糖合酶一步法转化麦芽糖为海藻糖最具应用前景.     

海藻糖的分析方法

本文对目前糖类研究的热点之一——海藻糖的分析方法进行了评述，并且给出了纸层析、薄层层析及高效液相色谱分析条件。     

HPLC在研究微杆菌D-97胞内酶合成海藻糖机制中的应用

微杆菌D 97胞内酶对麦芽糖的水解微弱 ,并且合成海藻糖的酶反应对磷酸盐无依赖性。采用氨基键合柱HPLC对酶作用的初始底物麦芽寡糖混合物 (Ⅰ )、酶作用 2 4h后未糖化的底物 (Ⅱ )及其糖化水解后的底物 (Ⅲ )分别进行检测对照 ,底物Ⅰ麦芽五糖占34 1 5 % ,底物Ⅱ海藻糖、三糖和五糖分别占 1 7 68%、37 63 %和 3 0 8% ,底物Ⅲ的 2种主要产物葡萄糖和海藻糖各占 77 57%、2 0 2 0 %。通过上述 3种底物二糖至六糖浓度变化的比较 ,发现 DP 值 >4的麦芽寡糖为微杆菌D - 97胞内酶合成海藻糖的较适底物 ,并推断麦芽五糖生成海藻糖的基本方式为 :麦芽五糖→麦芽三糖 +海藻糖。以麦芽五糖为底物的酶反应研究进一步证实了上述作用方式。对于筛选得到的野生菌酶 ,HPLC对照检测从 1个角度为其酶合成海藻糖基本机制研究提供 1种方法。     

海藻糖的研究现状及其应用前景

综述海藻糖的理化特性、生物活性、生产制备及应用前景。海藻糖对生物物质具有保护作用。制备方法包括微生物提取法、微生物发酵法、酶合成法和基因工程法等。海藻糖广泛应用于生物药物、食品及化妆品等行业。     

海藻糖的性质及其在新型食品开发中的应用

海藻糖是一种新型的多功能食品配料，本文介绍了海藻糖的理化性质和在食品加工中的功能特性，综述了海藻糖在食品加工的应用领域和应用效果，并展望海藻糖在新型食品开发中的应用前景。     

淀粉糖新产品的开发与研究

阐述了国内外应用生物技术开发淀粉糖新产品的现状与前景。     

酶法合成海藻糖的HPLC测定

采用高效液相色谱法(HPLC)可以准确测定淀粉酶法合成海藻糖反应中的海藻糖产率,色谱柱REZEXRNMCARBOHYDRATE,水为流动相,流速0.6ml/min,柱温70℃。试验结果证明,此工艺转化淀粉生产海藻糖产率可达82.07%。     

海藻糖对淀粉回生抑制作用的研究

本文主要研究了海藻糖对糯米粉的回生抑制作用。研究发现，在含有糯米粉、白砂糖的复合体系溶液中，用海藻糖替代部分白砂糖，能有效地延缓回生的进程。同时，通过对保存条件的分析，发现海藻糖在频繁的冻，融过程中更能体现出抑制回生的效果。     

海藻糖产生菌株发酵条件的研究

从土壤中分离得到的一株海藻糖产量较高酵母菌株,对其进行最佳摇瓶发酵条件的研究。最佳的发酵条件为：碳源为2%蔗糖,氮源为0.2%酵母膏和0.1%牛肉膏,发酵初始pH为4.5,接种量为8%,装液量为40mL。该摇瓶发酵酵母内海藻糖的产量为381.190μg/mL,比优化前的180.870μg/mL提高了2.1倍。     

酵母胞内海藻糖提取工艺研究

采用微波破碎酵母细胞,然后用三氯乙酸溶液提取胞内海藻糖,用蒽酮比色法测定海藻糖含量,研究不同温度、提取时间、溶剂浓度、溶剂用量对海藻糖提取率影响;提取最佳工艺条件为:三氯乙酸浓度0.5 M,提取温度40℃,提取时间70 min,提取率为17.4%。     

Supplementation of the diet of dairy cows with trehalose results in milk with low lipid peroxide and high antioxidant content

The objective of this study was to investigate the effect of dietary supplementation with the disaccharides trehalose and cellobiose on antioxidant activity in rumen fluid, blood, and milk of dairy cows. Nine Holstein dairy cows housed in a free-stall barn were divided into 3 groups, with each group receiving a different dietary treatment (a control diet, a 1% trehalose-supplemented diet, or a 1% cellobiose-supplemented diet) following a 3 × 3 Latin square design. Feed intake and milk production increased in cows receiving the trehalose-supplemented diet compared with those receiving the control and cellobiose-supplemented diets. The total protozoa numbers in the rumen fluid of cows fed trehalose- or cellobiose-supplemented diets were greater than those of the control group. The C18:0 and C18:1 fatty acid content was increased in the milk of cows fed the trehalose-supplemented diet compared with that of the control group, and the C18:3n-3 fatty acid content in the milk of cows fed the cellobiose-supplemented diet was less than that of the control group. Plasma biochemical parameters were unchanged among the different treatments. In rumen fluid, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity and superoxide dismutase activity were increased 2 h after feeding in cows receiving the cellobiose-supplemented diet compared with the control group, and the concentration of thiobarbituric acid reactive substances in the rumen fluid of cows fed the cellobiose-supplemented diet was decreased. In contrast, the values of these parameters measured in the milk of cows fed the cellobiose-supplemented diet were no different from those of control cows. Dietary supplementation with trehalose did, however, bring about an improvement of the oxidative status of milk and blood in these animals compared with controls. These results provide the first evidence supporting the use of dietary disaccharides to decrease lipid peroxide levels and increase the antioxidant content of dairy cow milk. The findings suggest that disaccharides, particularly trehalose, might be useful as supplements for reducing oxidative stress and improving the quality of milk for human consumption, as well as possibly impairing the processes that give rise to lipid oxidation odor in dairy cow milk.     

面包酵母耐冷冻性影响因子的研究进展

论述了影响面包酵母耐冷冻性的各种因子。耐冷冻面包酵母是冷冻面团技术的关键,许多因素与酵母冷冻耐受性有关,如酵母胞内海藻糖含量、甘油含量、酒精含量、热休克蛋白含量、不同脂肪成分的比例、某些带电荷的氨基酸含量、呼吸能力、控制质膜的水运送的基因的表达等等,而海藻糖在酵母胞内起到的耐冷冻作用被广泛证明。     

一株海藻糖合成酶产生菌的筛选及初步鉴定

由长白山温泉附近土壤筛选得到菌株编号SH-110菌,分别利用TLC方法、HPLC法来确定该菌株所产的胞内酶能够利用麦芽糖作为底物来合成海藻糖,确定该酶为海藻糖合成酶,通过对该菌生物学特征鉴定,生理生化特征分析,初步鉴定该菌属于芽孢杆菌属(Bacillussp)。