烟草染色体标本制备方法的研究

采用风油精作预处理药剂处理烟草根尖分生组织。结果表明，烟草染色体分散性较好，制得片子较干净，有利于获得更多的染色体长度适中的早中期分裂相。     

烟草染色体显带技术试验研究

染色体显带技术在烟草遗传育种方面有着重要的应用价值。本试验在比较常规制片和Ｆ一ＢＳＧ酶解火焰干燥制片方法的基础上，提出用６％ＮａＨＣＯ＿３代替Ｆ一ＢＳＧ中的５％Ｂａ（ＯＨ）＿２对染色体进行变性处理，处理时间－２０～２５分钟显带效果较好。用对二氯苯饱和水溶液对烟草根尖预处理３～５小时可以积累较多的细胞有丝分裂相。     

具翼烟草(Nicotiana alata)核型、C带与rDNA染色体定位研究

采用去壁低渗法、BSG法和双色荧光原位杂交技术,分别开展了具翼烟草（Nicotiana alata）的核型分析、C显带与45S和5S rDNA染色体定位研究。4个具翼烟草收集系根尖细胞有丝分裂中期染色体平均核型为2n=2x=12m+6st,染色体臂比的变异幅度为1.14~4.22,平均臂比值为2.17,最长与最短染色体之比为2.16,属2B型。C带研究结果显示,具翼烟草中期染色体C带丰富,多态性良好,共显带25条,包括7条着丝粒带、15条端带和3条中间带。45S和5S rDNA染色体定位研究结果显示,具翼烟草根尖细胞有丝分裂中期染色体细胞相分别显示了3对45S rDNA和2对5S rDNA基因位点信号,45S rDNA基因位点分别位于I S、III S、V L上,2对5S rDNA基因位点分别位于I L、IV S上（字母L和S分别代表染色体长臂和短臂,罗马数字代表同源染色体序号）。在I号同源染色体上同时存在45S和5S rDNA基因位点。研究结果对烟草属系统起源、遗传进化以及遗传育种等领域的进一步研究具有重要的参考价值。      

烟草与药用植物罗勒远缘杂交后代的细胞学研究

利用普通烟草Hicks与药用植物罗勒杂交后代Hicks×罗勒的F1代花粉母细胞进行减数分裂观察和F2代根尖细胞进行核型分析。研究结果表明:科间杂种后代的染色体数目为不固定的数值,具有非整倍性,且整倍体与非整倍体共处于同一植株体内。从花粉母细胞的形态结构来看,出现一些异常,有“8”字形、“O”形多价体及一些单价体。对2n=38的一组根尖细胞的核型分析发现,第6对染色体为一个三价体,还发现一个单价体,且带有随体,其核型为2B,核型公式2n=38=26m+8sm+1Ш+1Ι。     

浅谈人体外周血淋巴细胞染色体的制备

染色体制备技术是医学遗传学中最常见而重要的一种技术,由于各个实验室实验条件和个人操作手法的差异,细胞培养和染色体标本的制作方法也不尽相同。笔者就人体外周血淋巴细胞染色体的制片过程中容易出现的问题及近几年制作染色体标本总结的经验和实验方法改进进行探讨,并提出了有效的避免方法。     

烟草根细胞原生质体的制备

根细胞是植物单细胞多组学研究的重要材料,烟草作为重要的模式生物之一,其根细胞原生质体的高效分离也越来越重要。为了获得产量和活性较高的烟草根细胞原生质体,以本氏烟草和栽培烟草K326为材料,采用酶解法制备了烟草根细胞原生质体,同时优化了影响原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间和酶解渗透压等条件,并通过显微镜观察和台盼蓝染色鉴定其活性。结果表明：(1)以1.5%纤维素酶+1.5%果胶酶+0.4 mol/L甘露醇的酶解液组合,经过2h酶解、500 r/min离心10 min得到的根尖细胞原生质体产量和活性相对较高;(2)最终获得了活性大于70%、数量达到105数量级的较高质量烟草根原生质体。     

烟草薄片制备工艺的现状

目前烟草薄片的生产方法主要有稠浆法、辊压法和造纸法.文章综述了近年来国内外不同制备工艺对烟草薄片理化性质的影响,同时分析了各种生产工艺的优缺点,并指出了今后国内烟草薄片的研究方向和发展趋势.     

淀粉改性烟草保润剂的制备

以淀粉为研究对象,通过化学反应将强亲水性基团引入淀粉分子内,大幅度提高其吸水和保水能力,制备了改性淀粉保润剂;确定制备反应条件为：过氧化氢用量10%、反应温度60℃、反应时间3 h;通过对平衡含水率的测定,对改性淀粉保润剂与常见的烟用保润剂的保润性能进行了比较。结果表明：该改性淀粉保润剂的保润性能优于常见的烟用保润剂（丙二醇、甘油和山梨醇）。     

烟草转基因检测方法的研究

通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260－280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动于,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类。并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量。     

抗二氯喹啉酸烟草材料的筛选与鉴定

为获得抗二氯喹啉酸的烟草育种材料,本研究通过叶面喷施不同浓度二氯喹啉酸,研究受药害烟株叶面积变化规律和烟草药害等级情况,确定喷施二氯喹啉酸对烟草苗期药害的临界浓度及适宜观测时间,并对烟草EMS突变体材料进行规模化筛选鉴定。结果表明,喷施处理引起烟草药害的临界浓度为0.5 mg/L,超出临界值浓度,烟草叶片会出现明显药害症状;为获得较高抗性的突变体材料,以1 mg/L为最适施药浓度,在药害症状明显时（施药后14 d）进行观测,获得了多个对二氯喹啉酸高抗、中抗及敏感的突变体材料。对高抗材料QR-19的杂交一代株系抗性分析显示,该材料对二氯喹啉酸的抗性可能受隐性基因控制。本研究为解析烟草对二氯喹啉酸等激素型除草剂的抗药性机理及除草剂抗性育种奠定了材料基础。     

利用杀配子染色体2C诱导中国春-长穗偃麦草1E二体附加系染色体畸变的研究

偃麦草属具有许多优良的遗传性状,利用杀配子染色体诱导小麦-偃麦草的染色体易位,是创建小麦异源易位系、丰富小麦遗传资源的一个有效途径。杀配子染色体2C在单体附加时,可高效率地诱导染色体畸变,得到易位、缺失等畸变类型。本研究利用含有杀配子染色体的中国春-柱穗山羊草2C(Ae.Cylindrical2n=28CCDD)二体附加系与中国春-长穗偃麦草(E.elongate2n=14EE)1E二体附加系杂交。观察F1花粉母细胞减数分裂情况,发现存在到量的染色体异常行为。单价体数超过理论值,棒状二价体数明显增加,并出现一定频率的三价体和四价体,及大量的染色体断片、染色体桥和落后染色体、微核,并伴随发生多极分裂现象。经C-分带与荧光原位分子杂交鉴定83株杂交F2,共检测到5株易位、6株缺失。易位频率为6.02%,缺失率为7.22%,染色体畸变的总频率为13.24%。并对杀配子染色体的诱变机制及引起杂交后代结实率降低的原因进行了讨论。     

产气荚膜梭菌肠毒素基因地高辛探针制备与检测方法建立的初步研究

产气荚膜梭菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ,ＣＰ）是人类和家畜重要的厌氧性病原菌,产生肠毒素的ＣＰ是人类食物中毒病原菌。本研究用地高辛标记肠毒素基因制备探针,并建立了原位杂交检测方法,直接检测肠毒素基因（ｃｐｅ）。这是继ＰＣＲ检测方法后又一项特异性基因诊断技术。由于利用了光学显微镜观察结果,形态学上比较直观,增加了实验的准确性。与ＰＣＲ、乳胶凝集相比,原位杂交检测方法具有较高的敏     

地衣芽孢杆菌的双位点荧光原位杂交检测

为了研究芽孢杆菌荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测的影响因素,该实验以地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为研究对象,分析了不同探针、菌体预处理方式、细胞通透化处理条件及杂交条件对FISH检测结果的影响,并进一步对选出来的探针进行特异性检测。结果表明,在设计的探针中有两个可以特异性识别地衣芽孢杆菌,且使用双探针检测比单探针荧光效果更好,提高1.54倍灰度值;当反应条件为超声分散菌体时间120 s、溶菌酶处理40 min、杂交时间为6 h、甲酰胺浓度为30%时检测结果最佳,其灰度值为41.16、菌体检出率为96.35%;特异性检测表明该方法可以特异性识别地衣芽孢杆菌。该研究建立了一种操作简单的地衣芽孢杆菌的双位点荧光原位杂交检测方法,无需核酸提取及扩增,且具有较强特异性。     

Preparation of polypyrrole coated cotton conductive fabrics

Polypyrrole-coated cotton conductive fabrics were prepared by in situ polymerization. The influences of pyrrole dosage, mole ratio of pyrrole to iron (III) chloride, reaction temperature and reaction time on the conductivity of the polypyrrole-coated cotton conductive fabrics were analyzed. The best method for preparing the polypyrrole-coated cotton conductive fabrics was determined. The structures of the conductive cotton fabrics were characterized with Fourier transform infrared spectroscopy and scanning electron microscopy. The results showed that when mo1e ratio of pyrrole to iron (III) chloride was 2:1, reaction at room temperature for 1 h with a bath ratio of 1:40, the conductivity of the prepared fabric was the best with a surface resistance of 0.15 kΩ/cm. The chemical structure and the surface morphological structures of the conductive cotton fabrics were different from that of the untreated cotton fabrics. By in situ polymerization, the fiber surfaces appeared homogeneously coated with a film of polypyrrole. Importantly, the process of pyrrole polymerization is very simple. This study offers a new simple way for preparing the polypyrrole-coated cotton conductive fabrics effectively.     

新疆红花随体染色体及25S rDNA位点分析

利用荧光原位杂交技术研究我国新疆红花（Carthamus tinctorius L.）25S rDNA在染色体上的位点数目,同时分析了其随体染色体数目。研究结果显示：新疆红花有2对随体染色体;4对染色体存在25S rDNA位点,其中3对染色体上的杂交信号较强,可稳定检出,有时还可检测到1对染色体上较弱的杂交信号。与国外红花品种相比,新疆红花rDNA位点数目多,表明新疆红花与国外红花品种间核仁组织区结构存在较大差异。这些结果将为研究红花染色体进化及其准确的核型分析提供一定的参考。     

烟草过氧化氢酶基因CAT2克隆与表达特征分析

基于已有的植物Catalase 2基因（CAT2）序列设计烟草Nicotiana tabacum CAT2的特异性引物,通过RT-PCR扩增克隆获得Nicotiana tabacum var.NC89 CAT2全长mRNA序列,包含1479 bp完整的读码框（ORF）,可编码492个氨基酸残基。遗传进化分析显示,烟草NC89 CAT2与N.benthamiana CAT2基因亲缘关系最近。利用Quantitative Real-time PCR技术分析了CAT2基因在NC89烟草中的组织特异性表达和其应对生物和非生物胁迫的表达差异。结果表明,CAT2基因在烟草NC89的根、茎、叶、花瓣、花萼、种子中均有表达,其中在花中相对表达量最高,其次为叶、茎、种子和根。生物和非生物胁迫处理烟株,其CAT2诱导表达分析显示,机械损伤、渗透压、低温和高温、干旱和感染PVY时CAT2表达量均上调。上述研究表明烟草CAT2基因可能参与了应对非生物和生物胁迫的过程。     

纯培养微生物荧光原位杂交技术检测的影响因素探究

为了研究纯培养微生物荧光原位杂交技术（FISH）检测的影响因素,该实验以大肠杆菌（Escherichia coli）及植物乳杆菌（Lactobacillus planetarium）为研究对象,研究不同种属、不同生长期菌株、菌体预处理方式及杂交条件对基于探针EUB338的FISH检测结果的影响。结果表明,菌体种类及菌体生长阶段均较明显影响FISH计数的准确性;确定超声分散菌体时间60 s（100 W、每30 s间歇）、溶菌酶处理60 min可较大幅度提高FISH对菌体的检出率;杂交时间和洗脱液中NaCl浓度对FISH检测结果影响小,杂交温度、杂交液中甲酰胺浓度对大肠杆菌影响小而对植物乳杆菌有一定影响。     

杏鲍菇原生质体制备技术的研究

本文详细地探讨了杏鲍菇原生质体制备条件。结果表明:用0.6mol/L的甘露醇配制成质量比为2.5%,pH值为4.5～5的溶壁酶酶液,在酶液量与菌丝体的比值为20:1(V/W),温度30℃,转速为50r/min条件下酶解3h,可得到最高的原生质体得率。其原生质体数可达15.35×107个/ml。本研究为今后进行杏鲍菇原生质体的诱变及融合育种奠定基础。     

羧甲基淀粉干法制备工艺

采用干法制备了羧甲基淀粉 ,研究了各反应因素对羧甲基淀粉取代度和CH2 ClCOOH反应效率的影响 ,并以取代度为指标 ,利用二次通用旋转试验建立了相应的回归方程 ,确定了其最佳工艺参数为 :NaOH与CH2 ClCOOH摩尔比为 3 2 ,反应体系水的质量分数为 2 0 % ,反应温度为 6 6℃ ,反应时间为 3 7h。当CH2 ClCOOH与淀粉摩尔比为 0 4时 ,取代度可达 0 35。     

抗性淀粉制备研究

抗性淀粉是一种新型的膳食纤维资源。研究不同抗性淀粉的制备方法对促进该产品的工业化生产具有重要意义。介绍了4类抗性淀粉的制备方法,简述了脂类、糖等食品成分对抗性淀粉形成的影响。