游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

血清游离3，5，3’-三碘甲腺原氨酸（FT3）酶联免疫试剂盒研制

三碘甲腺原氨酸是人体中随血流循环的一种甲状腺激素,在血液中,它几乎全部(>99.5％)结合于载体蛋白,但只有游离三碘甲腺原氨酸(0.3％)具有生物学活性。而且与总三碘甲腺原氨酸浓度水平相比,游离三碘甲腺原氨酸浓度水平不受载体蛋白浓度的影响,可对临床状态显示可靠的相关性。本法采用T_3抗体包被酶标板微孔、生物素化T_3,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),以配     

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH) 酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA 0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 ,适用于临床检测和科研应用     

癌胚抗原(CEA)酶联免疫分析试剂盒的研制

以一株CEA单克隆抗体(McAb)用于固相包被,另一株McAb与辣根过氧化物酶偶联制备抗CEA酶标记物,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,采用二步法,制备了CEA酶联免疫分析(ELISA)试剂盒.本方法的灵敏度为0.4μg/L,批内变异系数＜10.0%,批间变异系数＜15.0%,回收率为99.4%～108.7%,特异性鉴定显示与其它肿瘤标志物无明显交叉反应.正常参考值＜10.0μg/L.该方法具有简便、快速和准确的特点,适用于临床检测和科研应用.     

白蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制

采用竞争性ELISA法检测人尿中白蛋白(Albumin,Alb)的含量。将Alb抗体包被96孔微孔板,Alb与辣根过氧化物酶结合形成酶标记物,建立了白蛋白酶联免疫分析(Alb-ELISA)方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.28 mg/L;批内、批间变异系数分别为2.63%～5.28%和2.40%～4.26%;回收率为95.0%～106.4%;高浓度Alb样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为r=0.997 4。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

三碘甲腺氨酸(T_3,γ-T_3)免疫原的制备

甲状腺分泌甲状腺素(简称T_4)和三碘甲腺原氨酸的混合物(简称T_3和γ-T_3)。L_4,T_3和γ-T_3中的含碘量分别占人类甲状腺中总碘量的35%—40%,5%,<1%,生物活度为100,500—1000和5。T_4,T_3和γ-T_3(组成的甲状腺激素系列)的放射免疫分析技术已成为研究和临床诊断与普查甲状腺疾病的主要手段之一。我们继制备了T_4抗血清之后又合成了T_3和γ—T_3免疫原(抗原)。经免疫兔子均获得了抗血清。     

磺胺甲恶唑酶联免疫分析方法的建立

本方法建立了磺胺甲恶唑酶联免疫分析方法用以检测动物源性食品中磺胺甲恶唑的残留。利用辣根过氧化物酶（HRP）标记SMX（Sulfamethoxazole ），兔抗SMX抗体制备固相抗体，通过标本中的SMX和一定酶标SMX竞争结合固相抗SMX多抗，标本中SMX的量和显色后的OD450值呈负相关的原理来检测标本中的SMX含量。经方法学鉴定，本方法的灵敏度为0.067μg/L，批内变异<10%，批间变异<20%。牛奶、肉类、鸡蛋、蜂蜜样品的回收率分别为94.9%~116.0%、 82.0%~107.6%、 81.6%~94.9%、89.0%~93.0%，符合免疫分析方法的要求，     

磺胺甲恶唑酶联免疫分析法的建立

建立了磺胺甲恶唑(Sulfamethoxazole,SMX)酶联免疫分析方法,用以检测动物源性食品中SMX的残留。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记SMX,兔抗SMX抗体制备固相抗体,通过标本中的SMX和一定量酶标SMX竞争结合固相抗SMX多抗,标本中SMX的量和显色后的OD450呈负相关的原理检测标本中的SMX含量。经方法学鉴定,本方法的灵敏度为0.067μg/L,批内变异系数<10%,批间变异系数<20%。牛奶、肉类、鸡蛋、蜂蜜样品的回收率分别为94.9%~116.0%、82.0%~107.6%、81.6%~94.9%、89.0%~93.0%,符合免疫分析方法的要求。     

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸(T_3)酶联免疫检测试剂盒

以T_3抗体包被微孔,经处理的T_3生物素化,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),四甲基联苯胺(TM)为底物,建立了T_3生物素-亲合素酶联免疫分析(T4-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.2ng/mL,批内变异因数<8.3％,批间变异因数<10.5％,回收率为98.3％～107.3％,正常参考值范围为1.4～3.8ng/mL,本试剂盒具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

β2-微球蛋白酶联免疫分析试剂盒的研制

以β₂-微球蛋白（β₂-MG）抗体包被微孔板,四甲基联苯胺（TMB）为底物,用辣根过氧化物酶标记β₂-MG,建立了β₂-微球蛋白酶联免疫分析试剂盒,并对该方法进行了方法学分析。结果显示：本方法分析灵敏度为0.15 mg/L,批内、批间变异系数分别为4.1％～11.2%和14.1％～16.0％,回收率为93.3%～115.9%,高浓度β₂-MG样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为r=0.997 4。特异性结果显示：本试剂盒与铁蛋白基本无交叉反应,与白蛋白及甲胎蛋白在浓度分别低于10 mg/L及5 mg/L时有交叉反应,但反应很小。与放射免疫分析法（RIA）同时测定人血清样品,方法间有良好的相关性,相关方程为y_ELIA=1.006x_RIA+0.406,r=0.900(n=59)。以上参数均符合临床免疫分析的要求。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

滤纸干血-新生儿促甲状腺素酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),两株识别人促甲状腺素(hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了滤纸干血-新生儿促甲状腺素生物素-亲合素酶联免疫分析(NeonatalTSH-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本方法的灵敏度为0.5mIU/L,批内变异系数<15%,批间变异系数<20%,回收率为90.1%～103.3%。本方法所制备的试剂盒与NeonatalTSH-IR-MA(磁颗粒法)试剂盒具有良好的相关性,相关方程为y=1.01x+0.34,相关系数为r=0.873。本试剂盒无放射性,操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。     

人胰岛素酶联免疫分析法的建立

采用两株抗胰岛素单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯板、另一株标记辣根过氧化物酶,建立了测定人胰岛素的双抗体夹心酶联免疫分析法。方法学研究表明,本方法的灵敏度为1.7mIU/L,曲线范围5~160mIU/L,批内、批间变异系数分别小于11%、15%,回收率96.4%~111.1%;高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.998;38例健康人血清样品测定值为3.6~10.8mIU/L。该方法与人胰岛素放射免疫分析法测定结果的相关性良好,r=0.97。     

胰岛素酶联免疫分析方法的建立

采用两株抗胰岛素单克隆抗体，一株包被聚苯乙烯板、另一株标记辣根过氧化物酶，建立了人胰岛素测定的双抗体夹心酶联免疫分析法。方法学研究表明本方法的灵敏度为1.7mIU/L，曲线范围5～160mIU/L，批内、批间变异分别小于11%、15%，回收率96.4％～111.1％；高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数0.998；38例健康人血清样品测定值为3.6～10.8mIU/L，该方法与人胰岛素放射免疫分析法测定结果的相关性良好，r=0.97。     

氯霉素酶联免疫分析方法的建立

以兔抗氯霉素多抗为包被抗体,氯霉素（CAP）辣根过氧化物酶连接物为标记物,四甲基联苯胺（TMB）为显色底物,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫分析（CAP-EIA）方法.本方法灵敏度为0.046 μg /L,批内变异系数＜10%,批间变异系数＜24%,回收率62%～145%.用牛奶样品预处理所得上清液为稀释液做得稀释实验,相关方程为y=3.988x-0.234, 相关系数为0.999.标准曲线范围为0.1～10 μg /L.     

The Establishment of an Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Human Thyrotropin

A sensitive and specific ELISA for human thyrotropin(hTSH) is established with using two anti-hTSH monoclonal antibody. One of them is coated on the microtiter plate, the other is conjugate of biotin. The label is horseradish peroxidase(HRP) conjugate of streptavidin. TMB-H2O2 solution is used as the substrate of HRP. The sensitivity of the assay is 0.02 mIU/L. The intra-assay CVs and the intre-assay CVs of 3 samples are lower than 7.8% and 9.6%, respectively. The analytical recoveries are in the range from 93.3% to 107.8%. The assay is specific for hTSH and no cross reaction with other glyco-proteins, such as hLH , hHCG, hFSH. TSH concentrations range from 0.3 to 4,1 mlU/L in 142 normal subjects. As a reference IRMA(Multipact) method, the     

人促甲状腺激素生物素—亲和素系统免疫放射分析法的建立

报道将ＢＡＳ引入双们点夹心ＩＲＭＡ，建立了人血清ＴＳＨ固相试管双位点夹心ＢＡＳ－ＩＲＭＡ。该法批内ＣＶ为１．４％－８．３％，批间ＣＶＯ ６．１％－８．４％，最小检出量为０．０４ｍＩＵ／Ｌ，平均回收率为１００．１６％，灵敏度约是同条件下ＩＲＭＡ的３倍；与ＩＲＭＡ对比测定２０份病人血管ＴＳＨ样品，经统计学处理，两者测定结果呈良好相关性。     

The Establishment of an Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Carcinoembryonic Antigen

Two anti-CEA monoclonal antibodies are used, one is coated on the microtiter plate, the other is labeled with horseradish peroxidase(HRP). The two-step assay is established based on enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). TMB-H2O2 solution is used as the substrate of HRP. The sensitivity of the assay is 0.4 μ g/L. The intra-assay CVs and the inter-assay CVs are lower than 10.0% and 15.0%, respectively. The analytical recoveries are ranged from 99.4% to 108.7%. The reference cut-off value of normal serum (n= 100 ) is 10.0 ng/L.