碱性蛋白酶钝化胰蛋白酶抑制剂的研究

以碱性蛋白酶水解无糖豆粉溶液 ,检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化 ,采用四因素五水平饱和最优试验设计 ,当作用时间为 1h时 ,最佳酶解钝化条件为 :pH值 8 88～ 9 0 8;温度4 3 2 2～ 4 4 90℃ ;酶用量 11 5uL/g;底物浓度 5 99%～ 6 72 %。     

碱性蛋白酶钝化胰蛋白酶抑制剂的研究

以碱性蛋白酶水解无糖豆粉溶液，检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化，采用四因素五水平饱和最优试验设计，当作用时间为1h时，最佳酶解钝化条件为；pH值8.88-9.08；温度43.22-44.90℃；酶用量11.5uL/g；底物浓度5.99%-6.72%。     

微波去除大豆抗营养因子的研究

为探讨微波技术在大豆干法加工中应用的可行性,考察微波功率、处理时间对大豆中的抗营养因子胰蛋白酶抑制剂、脲酶及蛋白质溶解性的影响。结果表明：在微波功率3400W处理120s的条件下,胰蛋白酶抑制剂及脲酶钝化率达到80%以上,可有效去除大豆抗营养因子;同时测得蛋白质溶解度约为40%,该处理条件下的豆粉可以作为大豆即时冲调饮品专用原料加以利用。     

冷榨豆粉凝胶特性及其在千页豆腐制作中的应用

目的 研究不同加热温度(90、95、100℃)、不同加热时间(20、30、40、50、60 min)对冷榨豆粉凝胶特性的影响及其在千页豆腐中的应用。方法 以凝胶强度和持水性为指标探究冷榨豆粉凝胶特性; 以黏度、储能模量和损耗模量为指标探究冷榨豆粉凝胶在热处理过程中流变学特性变化。采用单因素实验和响应面优化实验对冷榨豆粉基千页豆腐加工工艺进行优化, 探讨不同冷冻条件对其品质影响。结果 热处理使冷榨豆粉分散液形成弹性凝胶(储能模量大于损耗模量)。冷榨豆粉凝胶黏性、储能模量、损耗模量、随着加热温度的升高及加热时间的延长而增加, 凝胶强度和持水性同样随之增加, 且分别在100℃加热90 min处达到最大[(130.57±0.02) g, 0.99 g/g]。经优化得出冷榨豆粉基千页豆腐最佳工艺条件为: 冷榨豆粉添加量100.00 g、冰水添加量575.00%、谷氨酰胺转氨酶(transglutamianse, TG)添加量1.64%、大豆分离蛋白(soy protein isolate, SPI)添加量46.00%。优化后的冷榨豆粉基千页豆腐的硬度为2271.24 g, 弹性为0.95。在-18和-45℃两种冷冻温度下, 千页豆腐中结合水(T2b)含量随着冷冻时间的延长而减小, 弛豫时间缩短, 凝胶网络中的水受到限制。降低冷冻温度可缩短水受到限制的时间, 导致水的流动性降低。不易流动水(T21)含量随着冷冻时间的增加先增加后减小, 且分别在冷冻7和3 d处达到最大。结论 热处理会对冷榨豆粉凝胶特性产生积极的影响。冷冻会使冷榨豆粉基千页豆腐内部结构中的更多结合水向自由水转移, 使冷榨豆粉基千页豆腐结构疏松, 孔径变大。     

可溶性固定化胰蛋白酶的制备及性质研究

将胰蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物N-琥珀酰壳聚糖上,制备得到水溶性固定化胰蛋白酶,并对其部分酶学性质进行了研究。结果表明,可溶性固定化胰蛋白酶的最适pH为9·0,最适温度为60℃,Km值为0·28mg/mL;该酶在pH6·0以上能够完全溶解,在pH4·0左右基本不能溶解;可溶性固定化胰蛋白酶在60℃条件下,保温8h,仍有55%的活性;在4℃条件下,30d后活性保留达98%;在4℃下保存72h,活性没有明显降低。pH8·0~10·0稳定性最好(相对活性>90%)。     

固定化酶法分离纯化大豆胰蛋白酶抑制剂

大豆分离蛋白生产中的大豆乳清废水中含有多种生理活性成分,其中大豆胰蛋白酶抑制剂可作为癌症和糖尿病治疗的药物。利用固定化胰蛋白酶分离纯化大豆胰蛋白酶抑制剂可得到高纯度的大豆胰蛋白酶抑制剂。研究结果表明:大豆胰蛋白酶抑制剂通过各阶段纯化后其活性从0.95TIU/mL增高至325.5TIU/mL,纯化程度提高324.6倍,得率0.033%;电泳结果表明:利用固定化胰蛋白酶分离纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂有单一谱带,纯化效果明显。     

凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达及性质研究

通过PCR扩增得到凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)基因,将其插入大肠杆菌表达载体p ET-28a,实现丝氨酸蛋白酶抑制剂在BL21(DE3)菌中以包涵体的形式大量表达。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量约为15 ku,与预期大小一致。将包涵体溶解后,利用Ni2+亲和柱层析对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组SPI。经复性后的SPI对胰蛋白酶具有较高的抑制活性。该抑制剂在90℃内加热1 h,可保留90%以上的抑制活性,且在p H 1~8范围内较稳定。该抑制剂能特异性抑制凡纳滨对虾内源性胰蛋白酶的活性。抑制动力学试验结果表明,该抑制剂是竞争性抑制剂,其抑制常数Ki为1.69×10-9mol/L。结论:重组凡纳滨对虾丝氨酸蛋白酶抑制剂具有较高的抑制活性且较稳定,经优化表达条件后有望应用于新型对虾保鲜剂。     

响应面法优化微波钝化核桃胰蛋白酶抑制剂的研究

目的:探讨响应面优化核桃胰蛋白酶抑制剂的微波钝化工艺。方法:以微波功率、微波时间和液料比作为影响核桃胰蛋白酶抑制剂钝化的因素,通过单因素试验选取因素与水平,根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,结合单因素试验,采用3因素3水平响应面分析法,根据多元回归分析确定各钝化工艺条件的主要影响因素。结果:胰蛋白酶抑制剂钝化的最佳工艺参数为微波炉中加热90 s、微波功率900 W、液料比25,胰蛋白酶抑制剂的钝化率为99.6%。结论:通过响应面分析法可以优化微波钝化核桃胰蛋白酶抑制剂的钝化工艺,应用回归模型方程找到了核桃胰蛋白酶抑制剂钝化的最佳工艺参数。     

重组降血压肽IYPR的分离与稳定性研究

研究了大肠杆菌表达的降血压肽IYPR(Ile-Tyr-Pro-Arg)的分离纯化过程,并分析了其活性稳定性。大肠杆菌细胞经过超声提取和亲和层析得到重组蛋白,然后经过肠激酶和胰蛋白酶酶切、凝胶过滤得到肽IYPR,测定了IYPR经过不同的温度、pH和消化道酶处理后的活性变化。结果表明,亲和层析后重组蛋白的纯度达到了约90%,肠激酶酶切重组蛋白后利用透析法将串联多肽IYPR和6×His标签成功分离,串联多肽经过胰蛋白酶酶切和凝胶过滤后得到了单体肽IYPR。IYPR在90℃处理1 h时,其活性为原来的98%,在pH为2～10的水溶液处理5 h时活性保持不变,经过胃蛋白酶消化后,其活性升高了13%。这些特性为重组降血压肽IYPR作为高血压病的防治药物的深入研究提供了参考。     

豆类胰蛋白酶抑制剂抗鲢鱼鱼糜凝胶劣化的研究

为改善鲢鱼鱼糜凝胶特性,以野生及市售大豆为原料,利用等电点沉淀法制备了豆类胰蛋白酶抑制剂提取物,研究其对鲢鱼鱼糜凝胶劣化的影响。结果表明,等电点沉淀提取法可有效地分离胰蛋白酶抑制剂与其它大豆蛋白;与空白对照相比,添加0.5%～1.0%胰蛋白酶抑制剂提取物的鲢鱼鱼糜凝胶,自溶降解速度和蛋白溶解度明显受到抑制,且保水能力和凝胶强度显著增强;胰蛋白酶抑制剂通过抑制组织丝氨酸蛋白酶活性而抑制鱼糜凝胶的劣化。豆类胰蛋白酶抑制剂提取物的应用属低浓度范围,可广泛应用于鲢鱼、草鱼、带鱼等各种鱼糜制品的品质改善。