小球藻培养条件及其抑制α-葡萄糖苷酶活性的研究

通过对小球藻培养条件中初始pH值、接种量、培养温度、光照等因素进行研究,探讨小球藻的最佳培养条件,并对培养的小球藻提取物进行α-葡萄糖苷酶活性抑制实验。结果表明,初始pH值为7,接种量为100:10,培养温度为25℃/20℃(昼/夜),光照强度为10000Lx为小球藻的最佳培养条件;其水提物对α-葡萄糖苷酶活性的IC50值为3.14mg/mL,具有一定的抑制活性。     

鲎血胶原蛋白酶解条件及其体外活性的研究

为了考察鲎血胶原蛋白(HXJ)酶解条件及其体外活性,以酶解后的肽得率为考察指标,在单因素的基础上,采用正交设计试验对酶解p H、酶解温度和底物浓度进行筛选,寻找HXJ的最佳酶解条件;对酶解后的HXJ进行体外α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酶抑制活性测试,同时对其总抗氧化力和对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子清除率进行测试。结果表明,HXJ的最佳酶解条件为:p H为7.0、温度为70℃、底物质量浓度为0.38 mg/m L、胰酶质量浓度为2.20 mg/m L、酶解时间为5 h,此时肽得率为36.50%;对α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶的最大抑制率分别为47.9%和97.5%;HXJ具有一定总抗氧化能力,对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子的最大清除率分别为29.3%、97.3%和25.9%。HXJ能有效抑制α-葡萄糖苷酶和乙酰胆碱酯酶,具有较强的抗氧化活性。     

鲎血浆蛋白硒螯合肽的生物活性研究

用鲎血浆蛋白合成硒螯合肽(HXXT),研究HXXT抗氧化和酶抑制的体外活性。结果显示:在浓度为1.0 mg/m L时,HXXT总抗氧化能力达到最大,DPPH自由基清除率41.9%;·OH清除率87.0%,和Vc的羟自由基的清除率相当。HXXT浓度0.7 mg/m L时,对α-葡萄糖苷酶达到最大抑制率42.6%,HXXT对ACE和脂肪酶的半数抑制浓度IC50分别是5.239,5.170 1 mg/m L。这表明HXXT可以进一步研究开发为具有补硒功效的治疗糖尿病、高血压和肥胖症的药物或保健产品。     

鲎血浆蛋白硒螯合肽的生物活性研究

用鲎血浆蛋白合成硒螯合肽(HXXT),研究HXXT抗氧化和酶抑制的体外活性。结果显示:在浓度为1.0 mg/m L时,HXXT总抗氧化能力达到最大,DPPH自由基清除率41.9%;·OH清除率87.0%,和Vc的羟自由基的清除率相当。HXXT浓度0.7 mg/m L时,对α-葡萄糖苷酶达到最大抑制率42.6%,HXXT对ACE和脂肪酶的半数抑制浓度IC50分别是5.239,5.170 1 mg/m L。这表明HXXT可以进一步研究开发为具有补硒功效的治疗糖尿病、高血压和肥胖症的药物或保健产品。     

海洋微生物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选及性质研究

建立了α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外筛选模型。10株海洋微生物经摇床培养得到发酵液,经大孔树脂吸附、甲醇洗脱得到粗提物;以阿卡波糖为阳性对照,用比色法（PNPG法）对粗提物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定,并对产生活性代谢产物的菌株做进一步研究。结果发现：有6株菌株的代谢产物均具有不同程度的α-葡萄糖苷酶抑制作用,其中菌株N-1的代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最强,每毫升N-1样品液中含有的活性代谢产物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用相当于5mg的阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;该活性产物具有较强的酸碱耐受性及温度耐受性,在pH值1～14、50～100℃时稳定性较好;初步分析活性代谢产物的成分并非蛋白质、氨基酸、糖类及皂苷类物质。     

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

选用玉米粉、豆饼粉、KH_2PO_4及Na_2HPO_4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的发酵培养基、培养条件、发酵条件进行优化。确定了优化的发酵培养基为:20g·L~(-1)甘油,30g·L~(-1)豆饼粉,2mmol·L~(-1)氯化钙,0.3g·L~(-1 )KH_2PO_4,4g·L~(-1 )Na_2HPO_4;优化的培养条件为:培养温度30℃,接种量5%。调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵24h酶活达到7 344U·mL~(-1)。进行流加甘油实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和通风量控制溶氧30%～35%,接种量5%,经过30h发酵,酶活达到10 654U·mL~(-1),较未补料提高了45%。     

- 葡萄糖苷酶的研究

研究了培养条件对黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的影响及β-葡萄糖苷酶的表观酶学性质。麸皮是黑曲霉β-葡萄糖苷酶的较适诱导物。黑曲霉NL02以 40 g/L 麸皮为碳源,在 250 mL 三角瓶中装液 40 mL,接种量 8%,初始pH值5.5, 30℃、 170 r/min 下培养 10 d,β-葡萄糖苷酶活力为 19.12 IU/mL。β-葡萄糖苷酶最适温度为 65℃,40℃ 时稳定性较好;最适pH值为4.8,在pH值3.0～5.0之间稳定性较好。     

固定化β-葡萄糖苷酶转化糖苷型异黄酮的研究

利用固定化β-葡萄糖苷酶把糖苷型异黄酮水解成苷元型异黄酮,可以提高大豆异黄酮的生理活性.用海藻酸钙包埋富含β-葡萄糖苷酶的黑曲霉孢子,可以方便有效地固定β-葡萄糖苷酶.研究考察了不同底物浓度,pH和温度对固定化β-葡萄糖苷酶酶解作用的影响,以及重复分批酶解条件下固定化酶的稳定性.当固定化酶珠体积占反应总体积的5%,糖苷型异黄酮浓度为1.2mg·mL-1,作用24 h,酶解效果良好.其中,大豆苷比染料木苷易于被酶解.固定化酶适宜的pH范围为3～5,最适pH值为4.8.耐热性比固定化前有所增加,在70℃以下酶较稳定.重复分批酶解糖苷型异黄酮,连续7批的转化率均可保持在90%以上.该研究结果在大豆异黄酮的生物转化方面具有潜在的应用前景.     

一株产木聚糖酶菌株的筛选及发酵产酶条件优化

以木聚糖为唯一碳源,从含有大量腐烂枯枝树叶土壤中筛选到一株高产木聚糖酶菌株,经形态学分析和分子学鉴定,确定其为链霉属(Streptomyces)。通过单因素实验考察了碳源、氮源、初始pH值、发酵温度和发酵时间对酶活的影响;在单因素实验的基础上,利用Design-Expert软件对碳源、氮源和发酵时间进行响应面分析。单因素实验确定适宜发酵产酶条件为:复合碳源为玉米芯粉+蔗糖(1∶2)、氮源为硝酸铵、初始pH值4.0、发酵时间2.5d、发酵温度30℃,此时,所产木聚糖酶酶活为511U·mL~(-1);响应面分析确定最优发酵产酶条件为:复合碳源(玉米芯粉∶蔗糖=1∶2)添加量4.09%、氮源硝酸铵添加量1.16%、初始pH值4.0、发酵时间3.14d、发酵温度30℃,此时,所产木聚糖酶酶活达到641U·mL~(-1),较单因素实验提高了25.44%。     

一种海洋黑曲霉耐盐内切纤维素酶的分离纯化和酶学性质研究

采用实验室从海底淤泥中筛选得到的海洋黑曲霉固态发酵生产纤维素酶,纤维素酶粗酶液经过硫酸铵分级沉淀、超滤、离子交换层析和疏水层析分离纯化后,得到了电泳纯的内切纤维素酶,酶的比活力由37.72 U·mg~(-1)提高到557.27 U·mg~(-1)。SDS-PAGE显示该内切纤维素酶的分子量约为34 kDa。考察了该酶的酶学性质,结果表明该酶的最适温度为60℃,最适pH为4.5,具有较好的热稳定性和p H稳定性。金属离子对该内切纤维素酶的酶活影响较大,Cu~(2+)、Fe~(2+)对内切纤维素酶具有一定的激活作用,Mn~(2+)、Ni~(2+)、Zn~(2+)对酶活性具有强烈的抑制作用。当NaCl浓度为40 g·L~(-1)时具有最佳酶活,在20~60 g·L~(-1)的高NaCl浓度环境下的酶活均高于不含NaCl环境下的酶活,在200 g·L~(-1) NaCl高盐浓度下,该酶尚能保持初始酶活的89%,是典型的耐盐型酶。对该酶的酶促进反应动力学进行研究发现其在pH4.5、60℃条件下米氏常数Km为11.7 mg·mL~(-1),Vmax为943.4 U·mg~(-1)。     

黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的研究

研究了培养条件对黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的影响及β-葡萄糖苷酶的表观酶学性质。麸皮是黑曲霉β-葡萄糖苷酶的较适诱导物。黑曲霉NL02以 40 g/L 麸皮为碳源,在 250 mL 三角瓶中装液 40 mL,接种量 8%,初始pH值5.5, 30℃、 170 r/min 下培养 10 d,β-葡萄糖苷酶活力为 19.12 IU/mL。β-葡萄糖苷酶最适温度为 65℃,40℃ 时稳定性较好;最适pH值为4.8,在pH值3.0～5.0之间稳定性较好。     

玉米须多糖的提取及活性研究

优化了超声波辅助提取法提取玉米须植物多糖的工艺条件,用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法研究了玉米须多糖的抗氧化活性,以对α-葡萄糖苷酶抑制活性的测试方法测定玉米须多糖的降血糖活性。结果超声波辅助提取法的优化工艺参数为:45 min的超声时间,提取功率为400 W。玉米须多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率随其质量浓度的增加而增大,最大清除率为68.13%;对α-葡萄糖苷酶的抑制率随质量浓度的增加而增大,最大抑制率为85.26%。     

五种中草药水溶性多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响

从山茱萸、知母、甘草、地榆及诃子中提取水溶性多糖,并通过酶抑制动力学反应考察其对α-葡萄糖苷酶活性的影响。酶动力学反应结果表明:地榆多糖对α-葡萄糖苷酶有激活作用;知母多糖对α-葡萄糖苷酶的活性随时间的变化先激活后抑制;山茱萸多糖、甘草多糖及诃子多糖均对α-葡萄糖苷酶有抑制活性,其中抑制活性最好的是甘草多糖,其抑制率为72.5%;其各自的影响机理还有待进一步研究。     

鼠妇粉酶解最佳用酶的初步筛选

用胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶四种酶对鼠妇粉进行酶解并选出最佳用酶。利用四种酶分别酶解鼠妇粉,通过观察乳腺癌MCF-7细胞的抑制率以及蛋白质的水解度,作为实验评价指标,综合评价四种酶对于鼠妇粉的酶解效果,最终甄选出最佳酶解用酶。实验测得胃蛋白酶酶解液水解度为19.36%,胰凝乳蛋白酶酶解液水解度19.97%,胰蛋白酶酶解液水解度为34.70%,弹性蛋白酶水解度分别为34.90%。体外抗肿瘤试验表明,在浓度为0~2 mg·mL~(-1)范围内,胰蛋白酶酶解液对乳腺癌MCF-7细胞抑制效果最佳,胃蛋白酶酶解液抑制效果更低,未酶解的抑制率最低,几乎无效。当浓度低于0.7 mg·mL~(-1)时,弹性蛋白酶水解提取液抑制率高于胰凝乳蛋白酶水解提取液的抑制率,当浓度在0.7~2 mg·mL~(-1)时,两种酶的抑制作用恰好相反。鼠妇粉酶解工艺最佳用酶为胰蛋白酶,胃蛋白酶效果最差,弹性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶效果介于二者之间。     

茯砖茶茶多糖乙酰化修饰及其降血糖活性研究

以水提醇沉法制得伏砖茶多糖,以乙酸酐制备乙酰化伏砖茶多糖并测定取代度,采用体外化学模型研究伏砖茶多糖对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶抑制活性。实验结果表明:伏砖茶多糖的提取率为4.62%,含量为68.72%,乙酰化茯砖茶多糖的取代度为0.214。4.0 mg/mL的茯砖茶多糖和乙酰化茶多糖对α-淀粉酶的抑制率分别为92.3%和96.8%;0.18 mg/mL的茯砖茶多糖和乙酰化茶多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为90.3%和92.2%。两种多糖对两种酶均具有剂量依赖性抑制活性,乙酰化茶多糖抑制活性高于非乙酰化茶多糖,说明乙酰化修饰能增加茶多糖的降血糖活性。     

室温下柱层析法同时提取刺玫果肉中维生素C和花色苷及其体外活性研究

探究柱层析法提取刺玫果肉中维生素C和花色苷的工艺条件及体外活性.以提取液中维生素C质量和花色苷吸光度为指标,通过对溶剂浓度、pH、酸度调节剂、吸涨率(MV)、浸泡平衡时间等因素的考察确定最佳提取工艺.通过测定刺玫果肉维生素C、花色苷对α-葡萄糖苷酶的抑制率及对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)的清除率,考察其...     

一株正十六烷降解菌的分离鉴定及其降解性能研究

从长沙某长期受油料污染土壤中驯化筛选得到一株正十六烷降解菌YJ1,经形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列分析及系统发育树分析等对其进行鉴定,初步确定菌株YJ1属于短芽孢杆菌属(Brevibacillus)。并通过单因素实验研究了不同培养条件(初始pH值、培养温度、接种量和正十六烷初始浓度)对菌株YJ1生长的影响及其对正十六烷的降解性能。确定菌株YJ1的最适培养条件为:初始pH值7、培养温度30℃、接种量10%、正十六烷初始浓度10 mL·L~(-1)。在最适条件下培养15 d,菌株YJ1对正十六烷的降解率可达66.7%,降解效果良好。     

绞股蓝总黄酮提取工艺及抗氧化活性研究

在单因素实验的基础上,采用正交实验对绞股蓝总黄酮提取工艺进行优化,并通过测定其对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率来评价其抗氧化活性。结果表明,在提取时间为150 min、提取温度为90℃、乙醇体积分数为40%、固液比为1∶70(g∶mL)、pH值为8、虹吸次数为24次的最优工艺条件下,绞股蓝总黄酮提取量可达83.295 mg·g~(-1);当绞股蓝总黄酮浓度为0.18 mg·mL~(-1)时,其对羟基自由基的清除率达到56.757%;当绞股蓝总黄酮浓度为0.20 mg·mL~(-1)时,其对超氧阴离子自由基的清除率达到65.151%。     

猪粪污水光合细菌制氢的影响因素

利用光合产氢细菌——球形红假单胞菌(Rhodobacter sphaeroides)1.1737菌株研究了原料浓度、温度、光照强度、原料初始pH值和PSB初期活性等因素对猪粪污水光合产氢的影响作用。结果表明:球形红假单胞菌在污水浓度为5687 mg·L~(-1)时的产氢总量高于浓度为3500 mg·L~(-1)和1214 mg·L~(-1)时;温度对光照产氢有比较显著的影响,该菌株产氢最适温度为30℃;球形红假单胞菌的产氢活性随着光照强度的增大而增大,当光照强度高于1000 lx时比低于1000 lx时的产氢活性显著提高,光照强度为1600 lx时的产氢速率达到最大;该菌株适宜产氢的pH在6.5～7.5之间,当pH为7.0时,产氢量达到最大;处于不同生长期的光合细菌的产氢活性略有差异,处于对数生长期的光合细菌的产氢能力略高于稳定期,明显高于延迟期和衰老期。同时,优化实验结果表明温度是影响产氢量的最显著因素,其较佳的产氢条件是温度为30℃、光照强度为1600 lx、原料pH值为7.0、PSB初期活性为对数生长后期60h。     

一种转葡萄糖苷酶基因的克隆表达及其生物催化合成α-熊果苷

通过一步法克隆试剂盒将来自野油菜黄单胞菌的转葡萄糖苷酶基因与表达载体pET28a同源重组,构建质粒pET28a-agl,并转化到不同感受态细胞中,筛选出高效表达转葡萄糖苷酶的基因工程菌E.coli BL21 Gold(DE3)plysS pET28a-agl,以催化合成α-熊果苷。利用IMAC亲和层析,获得转葡萄糖苷酶用于其酶学性质的研究。催化合成α-熊果苷的较佳反应条件为:转葡萄糖苷酶的质量浓度0.272 5 g/L,对苯二酚质量浓度11 g/L,麦芽糖浓度1.1 mol/L,磷酸盐缓冲液浓度100 mmol/L(pH=6.5),30℃下摇床反应3 h。研究发现,反应产物α-熊果苷对转葡萄糖苷酶反应有轻微的抑制作用;1 mmol/L K~+对转葡萄糖苷酶的相对酶活有提高作用,1 mmol/L Cu~(2+)几乎能完全抑制该酶活性。