用部分氨基酸序列对家蚕丝胶的表征

从桑蚕鲜茧制取丝胶,采用凝胶电泳法分离出3种主要丝胶A、M和P,经赖氨酰内切酶、胰蛋酶降解、逆相色层分离出氨基酸碎片,再利用气相定序器确定了丝胶的氨基序列,并根据丝胶Ser 1基因编码顺序表征了3种丝胶的基本结构,表明丝胶A有别于丝胶M和P,因其不含构成Ser 1蛋白质主要部分的38-氨基酸重复。     

用部分氨基序列对家蚕丝胶的表征

从桑蚕鲜茧制取丝胶，采用凝胶电泳法分离出3种主要丝胶A、M和P，经赖氨酰内切酶、胰蛋酶降解、逆相色层分离出氨基酸碎片，再利用气相定序器确定了丝胶的氨基序列，并根据丝胶Ser1基因编码顺序表征了3种丝胶的基本结构，表明丝胶A有别于丝胶M和P，因其不含构成Ser1蛋白质主要部分的38-氨基酸重复。     

米糠类阿片拮抗肽的氨基酸序列分析

采用氨基酸分析仪、LC-MS对米糠类阿片拮抗肽的结构进行了分析，米糠类阿片拮抗肽由Asp、Gly、Ser、Val和Arg组成，它的氨基酸序列为Asp-Gly-Ser-Val-Arg。     

玉米降血糖活性肽制备分离及其氨基酸序列分析

以水解度(DH)和游离氨基酸含量为指标优化玉米蛋白粉的酶水解工艺,结果显示,在pH 8.5,60℃条件下经过正交试验得到最适组合为:酶底物比3.5g/100g,水解时间2h,料液比120(g/mL),在该条件下其DH为27.02%,多肽含量为85.23%。同时,还优化了玉米肽的脱色工艺,最佳条件为:温度50℃,pH 3.5,活性炭用量1.5g/100mL,脱色时间45min,该条件下玉米肽得率为77.86%,脱色率为87.27%。将脱色脱盐后的玉米多肽经过凝胶色谱分离得到3个组分。体外降血糖活性结果显示,CP1促进正常HepG2细胞葡萄糖消耗效果最优,并且其α-糖苷酶抑制活性也最高(34.64%);CP1经过RP—HPLC制备柱纯化得到含量较高的14个组分,其中CP1-13的α-糖苷酶抑制活性最強,达到39.50%。经UPLC—Q—TOF—MS/MS测定,其氨基酸序列为A-P-A-L-L-P-F。     

植物乳杆菌和蛋白酶协同发酵水解大米蛋白ACE抑制肽高活性组分的氨基酸序列分析

利用低大米蛋白制备过程发酵水解液中富含大米蛋白和肽。以乳杆菌L2-18+风味蛋白酶/菠萝蛋白酶+胃蛋白酶/酸性蛋白酶分步获得的大米蛋白水解液为研究对象,通过超滤获得小于3 kDa蛋白肽。经阳离子交换、凝胶柱层析和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)三步分离纯化,确定出高活性ACE抑制肽组分,IC_(50)值为33.81μg/mL。经液质联用(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)鉴定分析,其多肽序列为VVFFAAAL。     

苦瓜中植物胰岛素的分离及其氨基酸序列测定

采用有机酸、醇提取 ,SephadexG 5 0筛分、RP HPLC色谱分离 ,从苦瓜中分离出植物胰岛素 ,并报道了植物胰岛素的氨基酸序列     

汉麻籽抗氧化肽的制备与氨基酸序列分析

为开发具有较好抗氧化活性的植物源蛋白肽,采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻籽粕获得汉麻籽蛋白水解物,经膜分离技术得到4种不同分子质量的多肽组分。通过DPPH自由基清除率、总还原力的测定,评价不同多肽组分的抗氧化活性,并对抗氧化活性最强的多肽组分进行氨基酸序列分析。结果显示：低分子质量的汉麻籽多肽组分具有更好的抗氧化活性,其中HP-Ⅳ组分（分子质量＜1 kDa）的抗氧化活性最强;HP-Ⅳ组分中丰度较高的6个肽段的分子质量分别为 364.84、539.77、630.30、662.33、718.90、827.41 Da,氨基酸序列分别为NRDDMRER、ANQLDQFSR、NPEDEFEQLRREGGRG、NHNNQLDLTPR、TVNSYNLPILRF、VSLLDTSNVNNQLDDNPRRFY。汉麻籽蛋白水解物,尤其是分子质量小于1 kDa的多肽组分可作为功能性成分用于抗氧化相关功能食品和保健品的开发。     

同义密码子用语与氨基酸序列上下文的关联

对大肠杆菌基因组的全部编码区序列进行了统计分析,发现同义密码子用语与氨基酸序列上下文关系密切,尤其是紧邻氨基酸的影响最为显著.讨论了该结果的结构生物学意义及其在基因工程领域可能的应用.     

眼氨肽注射液中氨基酸的含量测定

目的 测定眼氨肽注射液中氨基酸的含量.方法 用AccQ·Tag方法对该注射液中氨基酸进行衍生化处理,反相HPLC分离衍生产物,用紫外监测器以外标法定量检验衍生化物.结果 用该法测得的6种氨基酸含量符合规定.结论 所用方法结果准确可靠,可用于眼氨肽注射液中氨基酸的含量测定.     

眼氨肽注射液中氨基酸的含量测定

目的测定眼氨肽注射液中氨基酸的含量。方法用AccQ.Tag方法对该注射液中氨基酸进行衍生化处理,反相HPLC分离衍生产物,用紫外监测器以外标法定量检验衍生化物。结果用该法测得的6种氨基酸含量符合规定。结论所用方法结果准确可靠,可用于眼氨肽注射液中氨基酸的含量测定。     

基于识别重叠序列特性的限制性内切酶的重组表达策略研究

甲基转移酶可以保护宿主基因组DNA免受限制性内切酶的消化,根据这一特性,经典的限制性内切酶制备策略是首先通过表达与其配对的甲基转移酶来保护宿主菌株,然后再共表达限制性内切酶,即“一对一”的重组表达模式。作者设计了一个新的策略：通过共表达识别重叠序列的甲基转移酶来保护宿主菌株,以制备限制性内切酶。首先将识别重叠序列的甲基转移酶转入大肠杆菌ER2566,以保护宿主基因组DNA,然后将能识别重叠序列的多个限制性内切酶分别转入该宿主菌株,以进行限制性内切酶的重组表达,即“一对多”的重组表达模式。根据这一方法,利用甲基转移酶M.Esa Dix5 I、M.Alu I和M.Hha I实现了识别重叠序列(TTAA、AGCT和GCGC)的一系列限制性内切酶的重组表达,还利用甲基转移酶M.Alu I成功实现了两个新的R.Sac I同裂酶R.Eco SP4ORF25090P和R.Gma5ORF28P的重组表达。该方法简化了对抵抗限制性内切酶消化的宿主菌株的大量筛选工作,并提供了大规模制备限制性内切酶的能力。这一方法也可用于发现其他微生物中新的同工酶或同裂酶。     

反相高效液相色谱-质谱联用法测定抑菌肽功能单元的氨基酸序列

测定乳酸菌发酵液中小分子抑菌肽抑菌功能单元的氨基酸组成序列对于深入理解其抑菌原理并实际应用有重要意义。作者利用AssayMAP Bravo蛋白纯化系统平台,采用色谱-质谱联用法将相对分子质量为3 500的抑菌肽样品经过凝胶过滤色谱分离纯化,两步反相高效液相色谱分离纯化和二维质谱鉴定,得到高纯度、高抑菌活性的三个抑菌功能单元,氨基酸组成序列分别为Phe-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Ala,Asn-Glu-Arg-His和Lys-Glu-Ile-Thr-Pro-Ser-Glu-Arg,即该小肽的功能单元由三个短肽组成。结果表明,利用该方法,能够有效地提取并检测该小分子抑菌肽,其在氨基酸组成上与Nisin不同。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)的纯化及氨基酸序列分析

本论文研究了超滤法和RP-HPLC对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)的纯化,利用MALDI SYNAPT Q-TOF MS和MS/MS对其氨基酸序列进行分析及推测。纯化去除了Lecitase Ultra中的山梨醇和山梨醇盐,纯度97.7%,酶蛋白和亚基的分子量为30838.0和16536.0。通过MALDI SYNAPT Q-TOF MS和MS/MS对酶蛋白进行分析,确定了Lecitase Ultra的氨基酸序列组成;进行数据库(http: //www.matrixscience.com)比对,发现其氨基酸序列信息与棉状嗜热丝孢菌(T. lanuginosus)脂肪酶和尖孢镰刀菌(F. oxysporum)脂肪酶高度吻合,序列中1-284是T. lanuginosus脂肪酶的氨基酸序列,序列中285-339是脂肪酶F. oxysporum脂肪酶的氨基酸序列,其中113、118和121可能是被基因突变成113 G-A、118 D-W和121 E-K。研究结果为进一步探讨Lecitase Ultra的三维空间结构及其活性中心催化机理提供了数据支撑。     

牛乳铁素的制备纯化与氨基酸序列分析

对牛乳铁素的制备和分离纯化方法进行研究.牛乳铁蛋白经胃蛋白酶水解,其产物经不同分离介质进行分离纯化,用毛细管电泳检测其纯度.用氨基酸分析仪确定其氨基酸组成,并进行适合度检验.结果表明,采用Butyl-Toyopearl 650M树脂分离,其纯度为95.6%.纯化出的产物氨基酸组成和序列与已知的牛乳铁素无显著差异.     

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

以紫苏粕粉为原料,使用碱性蛋白酶进行水解反应,制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明,相较其它3种蛋白酶,碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高,约为(25.94±0.21)%;碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好,对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强,F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P3 3个组分,其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中,最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高,质量浓度为3 μg/mL的 P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS 鉴定,抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽,其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val,分子质量为 1 437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源,研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。     

甜荞苯丙氨酸解氨酶基因PAL的克隆及序列分析

利用RT-PCR技术,首次从甜荞(Fagopyrum esculentum)中克隆得到苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的cDNA ORF序列,命名为FePAL。该序列长2169bp,编码722个氨基酸,与其他植物PAL基因同源性较高,为80%～97%,其推导的氨基酸序列含有PAL酶活性中心特征序列GTITASGDLVPLSYIA和多个脱氨基、催化活性位点。系统发育树表明,甜荞PAL基因与苦荞PAL基因聚类关系最近。     

利用全基因组序列优化气单胞菌脉冲场凝胶电泳分型方法

目的对气单胞菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法从限制性内切酶的选择和电泳条件设置上进行优化,减少片段共迁移,使片段在电泳中分布均匀且利于分析。方法利用6个种的气单胞菌的全基因组数据,通过BioEdit软件对基因组序列进行677种酶的限制性片段分析,选择产生片段数量适宜的、有效片段比例高的酶作为备选酶。对片段长度取以10为底的对数作为自变量,以片段在泳道中的相对迁移距离作为应变量,计算片段长度-相对位置拟合公式,并模拟备选酶的电泳效果图。利用气单胞菌分离株对备选酶进行试验验证,确定PFGE分型方法,并用其对腹泻分离株进行分型应用。结果经Bio Edit分析,根据片段数量及有效片段比例,PmeⅠ、PacⅠ、SwaⅠ比XbaⅠ更适合于气单胞菌的分型。从PFGE模拟效果及分离株试验验证看,Pac Ⅰ、PmeⅠ的限制性片段的分布比XbaⅠ和SwaⅠ更均匀,片段重叠更少。最终确定PmeⅠ、PacⅠ分别为气单胞菌PFGE分型的首选酶和次选酶,脉冲场电流转换时间为2.16~63.8 s。16株腹泻分离株PFGE分型辛普森多样性指数为99.17%。结论优化的PFGE方法使用PmeⅠ、PacⅠ作为气单胞菌PFGE分型的限制性内切酶,该方法产生的片段数量与分布都优于XbaⅠ,在腹泻分离株的分型中能获得良好的分辨率。此研究提供的优化程序可用于其他细菌PFGE方法的建立或优化。     

榛子粕抗氧化肽的分离纯化及序列分析

为研究榛子粕抗氧化肽的抗氧化性和氨基酸组成的关系,本实验通过中性蛋白酶水解榛子粕蛋白得到榛子粕抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,采用超滤分离和葡聚糖凝胶纯化,获得DPPH自由基清除率高的榛子粕抗氧化肽P2,采用超高压液相色谱串联四级杆质谱(LC-MS/MS)测定榛子粕抗氧化肽的氨基酸序列。P2中7个短肽的氨基酸序列分别为His-ILe/Leu-Pro(362 Da)、ILe/Leu-Val-Asp-Glu(475 Da)、Thr-Pro-Pro-His-Lys(588 Da)、His-ILe/Leu-His-Ser-Ala-Thr(662 Da)、Cys-His-Ser-ILe/Leu-Met-ILe/Leu(701 Da)、Thr-His-Ala(327 Da)、Phe-ILe/Leu(279 Da)。由此得出结论,疏水性氨基酸和芳香性氨基酸可以提高榛子粕抗氧化肽的抗氧化性。     

黑曲霉内切β-葡聚糖酶的纯化和性质

黑曲霉(Aspergillus niger)的粗酶滤液经过硫酸铵沉淀和四种色谱CM-Sephadex C-50离子交换色谱、DEAE-Sephadex A-50离子交换色谱、POROS 20 HQ离子交换色谱和TSK-G3000SW凝胶色谱,从中提纯了一个新的内切β-葡聚糖苷酶该酶经SDS-PAGE电泳检测分子量为36.0KD,该酶活力的最适温度为70℃,最适pH值为3.6 纯化后的该酶只能降解羧甲基纤维素,不能降解微晶纤维素,对蔗糖、麦芽糖和纤维素也不起作用。其N-末端部分氨基酸序列为V F E W F G C N E C G A E F Tx N I P G。     

蛋清中ACE抑制肽的筛选及其作用机制

表征来自卵清蛋白中的血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽。基于在线程序,采用胃肠道蛋白酶对卵清蛋白进行模拟酶切。对获得的三肽毒性、溶解性和ADME性质进行预测,以ACE为蛋白靶标,筛选出能够与ACE紧密结合的三肽,对这些三肽的活性进行验证。结果表明：获得了一种新的ACE抑制三肽CIK,其IC50值为（161±0.06）μmol/L。CIK-ACE复合物通过5 个常规氢键,2 个碳氢键和4 个盐桥达到稳定状态。CIK最佳的对接构型可以与ACE的氨基酸残基Gln281、His353、Ala354、Glu376、Val380、His383、Glu384、Lys511、His513、Tyr523和Phe527形成相互作用。最佳的药效团模型由3 个氢键受体,一个疏水中心和一个正电荷中心组成,三肽CIK可与其中4 个特征相匹配。