湘潭县和融水县2岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻病流行病学调查

目的通过对监控区域内腹泻病例的监测,获取轮状病毒(rotavirus,RV)腹泻发生率。方法在广西壮族自治区融水县、湖南省湘潭县两个地区的村卫生室及乡镇卫生院中开展腹泻监测,收集腹泻病例和流行病学信息,采集病例粪便样本。应用ELISA法检测RV,RT-PCR法对其进行基因分型。结果湘潭县和融水县RV腹泻高峰主要集中在2月份,分别占总数的45. 9%和53. 9%;两地腹泻发病率为285. 1/(1 000人·年),RV检出率为18. 0%,RV腹泻发病率为51. 2/(1 000人·年);湘潭县和融水县的轮状病毒血清型均以G9型(分别占58. 7%和73. 7%)和P8型为主(分别占67%和81. 6%)。结论 RV是导致2岁以下婴幼儿腹泻的常见病原体,湘潭和融水县的RV流行株均为G9型和P8型,流行高峰为2月。     

基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒抗原含量检测方法的建立及验证

目的建立基于中和表位的GⅡ. 4型重组诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗原含量检测方法,并进行验证,以用于重组NoV疫苗质量控制。方法应用ELISA和HBGA-VLP阻断试验筛选中和性单克隆抗体,并筛选配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,建立GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。确定方法的线性检测范围,并对方法的专属性、准确性和精密性进行验证。结果27株GⅡ. 4 VLP特异性ELISA检测阳性的杂交瘤细胞克隆中,有12株GⅡ. 4型阻断抗体检测呈阳性,选择具有GⅡ. 4型阻断活性的特异性单抗2H7-C5和2E6-B3作为双抗夹心抗体对,用于建立GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。该方法的线性测定范围为15. 63～250 ng/mL,标准曲线R2均 0. 98;准确性验证的加标回收率在72. 23%～134. 03%之间;重复性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为7. 06%,中间精密性验证的RSD分别为8. 04%和9. 14%。结论建立了基于中和表位的GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP抗原含量检测方法,该方法专属性、准确性、精密性良好,可用于GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP定量检测,为GⅡ. 4抗原相关疫苗研发中质量控制和检定提供了技术支持。     

诺如病毒优势流行基因型间免疫交叉阻断谱分析

目的分析诺如病毒(norovirus,NoV)GⅠ和GⅡ基因群内5种优势流行基因型(GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17)间的抗体交叉反应性和交叉阻断活性,为NoV疫苗的研发路线和疫苗临床研究设计提供基础数据。方法使用经铝佐剂吸附的NoV GⅠ. 1、GⅡ. 2、GⅡ. 3、GⅡ. 4、GⅡ. 17病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)和佐剂对照品免疫小鼠,抗原剂量为3μg/只,第28天加强免疫1次,第56天处死小鼠,采集血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中各型NoV特异性IgG抗体,以基于ELISA法的受体结合阻断试验检测各型NoV阻断抗体。结果 GⅠ. 1型和GⅡ基因群各型间交叉反应IgG抗体GMT均小于或接近cut-off值(滴度=40)。GⅡ各型间,GⅡ. 2和GⅡ. 3VLP免疫小鼠后,均可诱导针对其余型别的交叉反应IgG抗体,各组GMT在494～2 792之间。GⅡ. 4 VLP可诱导GⅡ. 2 IgG抗体(GMT=1 660),以及较低水平的GⅡ. 3(GMT=226)和GⅡ. 17(GMT=147)IgG抗体。GⅡ. 17 VLP可诱导GⅡ. 2(GMT=6 401)和GⅡ. 3(GMT=830)IgG抗体。GⅠ. 1型和GⅡ各型间交叉阻断抗体GMT均小于cut-off值(BT_(50)=20)。在GⅡ各型间,交叉阻断抗体阳性的分别为:GⅡ. 2 VLP免疫血清对于GⅡ. 3和GⅡ. 4,GⅡ. 3VLP免疫血清对于GⅡ. 2,GⅡ. 4和GⅡ. 17 VLP免疫血清对于GⅡ. 2和GⅡ. 3;上述阻断抗体GMT均在31～73之间,且各组间针对同一型别的交叉阻断抗体GMT差异无统计学意义。GⅡ. 2、GⅡ. 3和GⅡ. 4均无针对GⅡ. 17的交叉阻断活性。结论 NoV GⅠ基因群和GⅡ基因群间不存在抗体交叉反应性和交叉阻断活性,而GⅡ群部分型别间存在有限的抗体交叉反应性和交叉阻断活性。     

诺如病毒GⅡ.13P蛋白的糖结合特征

目的分析诺如病毒(norovirus,NoV)GⅡ.13毒株09N3145与组织血型抗原(histo-blood groups antigens,HBGAs)的结合特性。方法表达并纯化GⅡ.13 09N3145的P区蛋白,通过唾液及寡糖结合试验确定其与多种不同寡糖的结合特征,并以GⅡ.13/2010 P区蛋白与Lea寡糖复合物结构为模板,对GⅡ.13 09N3145 P蛋白进行同源模拟。结果 GⅡ.13 09N3145的P区蛋白可以与A、B、O+和非分泌型O-发生结合;可以与Lec双糖抗原和乳糖发生结合,而与A、B、H、Lewis型等寡糖无明显结合。分子模拟显示P蛋白使用一个可能的结合位点与半乳糖环结合。结论确定了GⅡ.13 09N3145 P蛋白与HBGAs的结合特征,为NoV宿主相互作用、人诺如病毒(human norovirus,huNoV)进化、流行以及天然抗病毒策略的提出奠定基础。     

基于噬菌体抗体库技术制备诺如病毒全人源单链抗体

目的 基于噬菌体抗体库技术制备抗诺如病毒(norovirus,NoV)全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)。方法 从GⅡ. 6 NoV感染者恢复期外周血中分离得到外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),提取总RNA,RT-PCR法分别扩增scFv的重链和轻链可变区基因片段,通过Overlap PCR技术将两者随机拼接成scFv基因片段。将scFv基因克隆至噬菌体质粒pCANTAB-5E,转化至感受态E. coli TG1,获得全人源scFv噬菌体抗体库。以GⅡ. 6 P蛋白为固相抗原对抗体库进行4轮生物筛选,以选取的特异性抗NoV阳性噬菌体为模板,扩增scFv基因后,进行原核表达及纯化,并鉴定其特异性及中和性。结果 人源噬菌体scFv抗体库库容约为8.8×10⁶PFU/mL。4轮生物筛选共获得10株scFv,均能与GⅡ. 4、GⅡ. 6和GⅡ. 17 NoV P蛋白发生特异性结合,且对3株NoV毒株均有不同程度的阻断作用。结论 利用GⅡ. 6 NoV感染...     

重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点

目的了解重庆地区5岁以内儿童腹泻病毒病原及流行病学特点。方法收集重庆医科大学附属儿童医院2010年8～11月就诊的5岁以内腹泻患儿的粪便标本共500份,采用胶体金法检测A组轮状病毒(Rotavirus,RV),RT-PCR法检测B、C组RV、诺如病毒(Norovirus,NV)GⅠ和GⅡ、肠道腺病毒(Adenovirus,ADV)、札如病毒(Sapovirus,SLV)和星状病毒(Astrovirus,ASV),取NV和SLV阳性PCR产物测序,并对病毒基因进行分型。采用MEGA 5.05软件构建进化树,Kimura’s two-parameter法计算遗传距离,邻接法(Neighbor-joining)boot-strap重复检验1 000次。结果 500份标本中,检测到A组RV阳性标本134份,阳性率为26.8%;NV GⅡ型阳性标本132份,阳性率为26.4%;ADV阳性标本31份,阳性率为6.2%;SLV阳性标本9份,阳性率为1.8%;ASV阳性标本1份,阳性率为0.2%;未检测到B、C组RV和NV GⅠ型。随机选择22份NV阳性标本进行测序及基因分型,其中GⅡ/4占绝对优势,其次为GⅡ/6、GⅡ/2、GⅡ/3和GⅡ/7。SLV可分为4个基因亚型,其中GⅠ/1为优势株,其次为GⅠ/2、GⅡ/1和GⅠV 1。结论重庆地区5岁以下儿童腹泻以病毒感染为主,RV是主要的病原体,其次为NV、ADV、SLV和ASV。     

诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的分泌表达

目的探讨诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在毕赤酵母表达系统中分泌表达的可行性。方法用pPICZa-A表达载体和X-33毕赤酵母株进行NoV GⅡ.4和GⅡ.17型VP1蛋白的分泌表达,并对阳性菌株进行Mut表型筛选。同时优化起始pH(5.0、6.0、7.0、8.0)、甲醇终浓度(0.5%、1.0%、1.5%、2.0%)及发酵时间(24、48、72、96、120 h)3个表达条件。取原始及传代10代菌株,采用优化条件进行发酵,于诱导0～60 h间,通过双标准曲线实时荧光定量PCR法测定外源基因拷贝数。发酵产物经蔗糖密度梯度离心纯化后,检测其浓度及纯度,并观察VLP的形态。结果表达目的蛋白的重组酵母菌株均为Mut~+型。最佳发酵pH为7.0,甲醇终浓度为1%,发酵时间为72 h。菌株传代后未发生基因缺失,整合基因在10代内稳定性良好。GⅡ.4及GⅡ.17型VP1纯度均约85%,浓度分别为133和165μg/mL,VP1蛋白均可自发组装成直径约40 nm的VLP颗粒,形态与天然病毒相似。结论用毕赤酵母表达系统进行NoV VP1蛋白VLP分泌表达是可行的。     

GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定

目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。     

GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法 PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒p GEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1。利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化。采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性。结果经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确。重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85 000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL。筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶10⁷以上,亲和力常数K...     

口服轮状病毒减毒活疫苗Rotarix的现状及研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内导致婴幼儿重症腹泻的重要病原。由于当前尚无治疗RV感染的特效药物,因此,开发安全、有效的疫苗具有重要意义。G1型RV流行范围较广,本文主要对目前国内外上市的3种RV疫苗中的G1P[8]型Rotarix疫苗的情况作一综述。     

DUO-ICP-AES测定精对苯二甲酸中的钴、铬、铁、锰、钼、镍、钛

采用DUO-ICP-AES同时测定精对苯二甲酸中钴、铬、铁、锰、钼、镍、钛,并对仪器的分析线选择、背景校正、入射功率、雾化器压力、辅助气流量、冷却气流量、蠕动泵转速的影响及共存元素的干扰、硝酸铯灰化助剂等因素进行了详细的研究。方法的检测限:钴0.0097 mg/L;铬0.0021 mg/L;铁0.0078 mg/L;锰0.0012 mg/L;钼0.0027 mg/L;镍0.016 mg/L;钛0.0027 mg/L,回收率和精密度分别为93.0%～99.5%和0.37%～3.2%。该方法快速简便,具有良好的精密度和准确度,适用于进出口精对苯二甲酸的日常检验。     

汉中绿茶中铜、铁、锰、锌、氟含量的测定

为了解汉中地区绿茶中铜、铁、锰、锌、氟的含量,采用微波消解-原子吸收分光光度法及氟离子选择电极法对汉中绿茶中的铜、铁、锰、锌、氟含量进行了测定。结果显示,汉中绿茶中铜、铁、锰、锌、氟的含量范围分别为66.96μg.g-1,482.30μg.g-1,854.57μg.g-1,89.75μg.g-1,48.6μg.g-1。与文献相比,汉中绿茶中铁、锌含量远高于平均值,锰和铜的含量与平均值相当;氟含量略低于绿茶平均氟含量。     

对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸、苯甲酸、对苯二甲酸和间苯二甲酸在N,N-二甲基甲酰胺中的溶解度

采用激光监视技术由合成法实验测定了对羧基苯甲醛、对甲基苯甲酸、苯甲酸、对苯二甲酸和间苯二甲酸在N,N－二甲基甲酰胺中的溶解度。实验数据用多项式方程进行关联,计算的溶解度与实验值符合良好。     

ICP—AES测定石英砂中的铁、铝、钙、钛、硼、磷

本文阐述了用ICP—AES法同时测定石英砂中的Fe、Al、Ca、Ti、B、P,试样用HF和H2SO4加热分解,HCl溶解盐类。试样的处理只需一次便可做多元素的分析。测定结果准确、快速,相对偏差小,在操作上更易掌握。     

Metabolism of an n-paraffin,heptadecane, in rats

¹⁴C-heptadecane incorporated in rat diet was largely absorbed, and a balance study showed extensive¹⁴CO₂ excretion (65%). There was no elimination of the hydrocarbon in the urine, and only minute quantities of labeled metabolites. Radioactivity in the feces was entirely in heptadecane. About 7% of the heptadecane absorbed was stored in the carcass, whereas the rest was ω-oxidized to heptadecanoic acid. This fatty acid was incorporated into neutral lipids and phospholipids, underwent the normal fatty acid degradation pathway, and contributed to the synthesis of lipids, including fatty acids, squalene and cholesterol, and nonlipids (7–10%). Heptadecanoic acid was desaturated to heptadecenoic acid. The even distribution of radioactivity in the fatty acids of the various phospholipid classes indicated that heptadecane did not interfere with the biochemical mechanisms of these functional lipids.     

菠菜中镁、锌、铜的测定

以非完全消化法处理样品,即在低温下用浓硝酸一高氯酸（4＋1）混合酸消解样品,再加入乳化剂TX-10溶解消化过程中所产生的油脂,可得黄绿色透明的样品溶液。建立了非完全消化一火焰原子吸收光谱法快速测定菠菜中镁、锌、铜的分析方法,对非完全消化法样品处理条件、干扰、试液的物理性质与其空白溶液的一致性和特征浓度进行了考察。测定结果的相对标准偏差小于1．7％,本方法的测定结果与灰化法一致,相对误差小于2．0％。     

菠菜中镁、锌、铜的测定

以非完全消化法处理样品,即在低温下用浓硝酸-高氯酸(4+1)混合酸消解样品,再加入乳化剂TX-10溶解消化过程中所产生的油脂,可得黄绿色透明的样品溶液。建立了非完全消化-火焰原子吸收光谱法快速测定菠菜中镁、锌、铜的分析方法,对非完全消化法样品处理条件、干扰、试液的物理性质与其空白溶液的一致性和特征浓度进行了考察。测定结果的相对标准偏差小于1.7%,本方法的测定结果与灰化法一致,相对误差小于2.0%。     

Ozonation of estrone, estradiol, diethylstilbestrol in waters

The ozonation of three environmental endocrine disrupters (EDCs), estrone(E₁), estradiol(E₂), and diethylstilbestrol(DES), in aqueous solutions were investigated. Batch experiments were carried out to research the effect of initial EDCs concentrations, initial pH values and ozone dosages on the degradation efficiency. At pH 9.0, the degradation efficiency of estrone (E₁) reached to 94% after 8 min; diethylstilbestrol could be totally degraded after 6 min, and even estradiol was completely degraded after only 4 min. After 6 min for ozonation, the degradation efficiency of E₂ was nearly 48% with ozone dosage of 0.13 mg min^− 1. Compared with the ozone dosage of 0.38 mg min^− 1, E₂ entirely degraded after 6 min. Ozone dosage on degradation of E₁ was in a similar way. DES had analogous rule. At four different concentration solutions (5-20 mg L^− 1) of EDCs exposed to ozone, the higher the initial EDCs concentration, the lower EDCs degradation efficiency was obtained. During the ozonation process, the rapid decreasing of pH and the sharp increasing of electrical conductivity indicated the higher polarity by-products were produced during ozonation, which was confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC) analysis. The results could provide some useful information for the potential treatment of EDCs by ozonation in waters.     

ICP-OES测定大量元素水溶肥料中锌、镁、铜、铁、锰、钼、硼含量

采用ICP-OES对大量元素水溶肥料中微量元素锌、镁、铜、铁、锰、钼、硼进行分析,研究确定了最佳分析条件。加标回收率为96.94%～106.2%,RSD为0.50%～1.40%,检出限为0.001 8～0.218 0 mg/L,方法简便、快速、准确。     

Breaking, making, and twisting of chemical bonds in gas, liquid, and nanocavities

In this Account, we recount on our studies of 1'-hydroxy-2'-acetonaphthone (HAN, a proton transfer prototype molecule) in gas, solutions, and nanocavities. The internal H-bond photoreaction in HAN leads to a keto type structure, and following its formation, an internal twisting motion gives birth to keto rotamers. Theory, temperature, and solvent effects on its photodynamics show the involvement of efficient radiationless processes in both keto structures. When HAN is caged in a cyclodextrin nanocavity, the spectroscopy, photodynamics, and issues of twisting motion are strongly affected and could be tuned: a behavior relevant to those of many chemical and biological systems.