聚乙二醇干扰素α-2a和重组人干扰素α-2b治疗慢性丙肝的临床疗效观察

目的分析2种类型干扰素治疗慢性丙型肝炎的疗效对比。方法选取我院感染科自2008年6月至2010年12月慢性丙肝150例,随机分成分为2组,聚乙二醇干扰素α-2b(PEG-IFN-α-2b)组:PEG-IFN-α-2b1.5μg/kg体重,每周注射1次,疗程6个月;干扰素α-2b组:普通干扰素α-2b500万单位,隔日1次肌肉注射,疗程6个月。结果 PEG-IFN-α-2b组有13例ALT,3例接近正常,HCV-RNA12例恢复正常,2例接近正常,其余的均较治疗前有所下降。治疗前后有明显下降(P<0.05)。普通干扰素α-2b组ALT有8例恢复正常,1例接近正常,其余患者ALT治疗后仍高。HCV-RNA9例正常,1例接近正常,8例较治疗前下降,2例HCV-RNA定量与治疗前相同。(PEG-IFN-α-2b)组干扰素组完全应答者9例,部分应答者5例,无应答者6例,总应答率为70%。普通干扰素(α-2b)组完全应答者6例,部分应答者3例,无应答者11例,总应答率为45%。结论 (PEG-IFN-α-2b)组干扰素治疗慢性丙肝疗效优于普通干扰素α-2b。     

人白细胞介素-2单克隆抗体的研究

应用杂交瘤技术获得6株抗人白细胞介素-2单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析，各单抗滴度不一，有的高达10(16)，有的则在1∶10左右，大多数（5种）为IgG型，少数（1种）为IgM型。单克隆抗体与纯化的IL－2有明显的特异性吸附（P＜0．01）。有4种单克隆抗体有相同的吸附位点，另外2种至少有3个吸附位点，位阻表现不一。     

小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区的原核表达与纯化

目的原核表达并纯化小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区(sIL-13Rα2)。方法将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pROEXHTa,构建重组表达质粒pROEXHTa/sIL-13Rα2,经双酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。薄层扫描分析目的蛋白的表达量,并对其进行表达形式分析及Westernblot鉴定。镍柱亲和层析纯化目的蛋白。结果重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。表达的sIL-13Rα2蛋白相对分子质量约为36200;诱导6h,重组蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的45%;重组蛋白以包涵体形式存在,可与大鼠抗小鼠sIL-13Rυ2单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度大于95%。结论已成功表达并纯化了sIL-13Rα2,为进一步探讨其治疗支气管哮喘奠定了基础。     

家禽类白细胞介素-2的研究进展及其应用前景

白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种由T淋巴细胞分泌的T细胞生长因子,具有多种免疫调节功能和生物学活性。随着分子生物学、免疫学理论和技术的发展,应用重组表达技术生产IL-2已成为目前研究的热点。本文主要对家禽类IL-2基因的克隆、重组表达、纯化及其免疫活性等方面的研究进展作一综述,并对其应用前景进行展望。     

可溶性白细胞介素-5与白细胞介素-13受体联合应用对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响

目的观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptorα,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。末次激发24 h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavagefluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平。结果与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻。与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01)。结论 sIL-5Rα与sIL-13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症。     

白细胞介素-2基因佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响

目的研究白细胞介素-2基因佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响。方法利用分子生物学技术构建含IL-2基因的重组质粒pcDNA3.1/IL-2,经测序鉴定、碱裂解法大量提取及Sepharose4FF柱层析纯化,得到重组质粒pcDNA3.1/IL-2和pcDNA3.1/S,免疫豚鼠后,经ELISA检测豚鼠血清中抗HBsAg滴度,CTLL-2细胞株/MTT法检测IL-2活性。结果序列测定和分析结果表明重组质粒pcDNA3.1/IL-2构建正确。血清中抗HBsAg抗体滴度:铝佐剂+HBsAg组为2116mIU;IL-2+HBsAg组为1987mIU;质粒pcDNA3.1/IL-2+HBsAg组为2252mIU;质粒pcDNA3.1+IL-2+pcDNA3.1/S组为67·19mIU;质粒pcDNA3.1/S组为50·88mIU。重组质粒pcDNA3.1/IL-2免疫1周后,IL-2表达水平达高峰,以后逐渐降低,但1个月后IL-2水平仍高于空白对照组。对抗HBsAg抗体滴度和IL-2活性的检测结果进行统计学分析表明,各组间差异有显著意义(P<0·05)。结论IL-2基因佐剂可以增强乙肝重组疫苗和乙肝DNA疫苗的免疫效果。     

白细胞介素-2脂质体药物动力学的研究

~(125)I-IL－2脂质体及游离~(125)I-IL－2通过小鼠尾静脉给药后，观察其在主要脏器中的药物分布及血药浓度-时间曲线。结果表明，脾脏和肝脏对IL－2脂质体有较高的摄取，IL－2脂质体具有缓释作用；IL－2脂质体的血浆清除率明显低于单纯IL－2，其生物利用度明显提高。     

重组人干扰素α2a栓剂对慢性盆腔结缔组织炎的疗效

目的 应用重组人干扰素a     

重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合白细胞介素-2或干扰素γ诱导小鼠的脾淋巴细胞免疫应答

目的观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(Recombinant Toxoplasma gondii phosphoglycerate mutase 2,rTgPGAM2)联合白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)或干扰素γ(Interferonγ,IFNγ)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨IL-2和IFNγ的佐剂效应。方法将48只BALB/c小鼠随机均分为6组:rTgPGAM2组(30μg)、IL-2组(500 IU)、IFNγ组(1 000 IU)、rTgPGAM2(30μg)+IL-2(500 IU)组和rTgPGAM2(30μg)+IFNγ(1 000 IU)组和对照组(20μl PBS),免疫途径均为滴鼻免疫,共免疫3次。末次免疫后第14天,颈椎脱臼处死小鼠,CCK-8法检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4和IL-10水平。结果经rTgPGAM2刺激后,与对照组比较,各免疫组小鼠脾淋巴细胞刺激指数(Stimulation index,SI)均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P<0.01或P<0.05);经ConA刺激后,仅IL-2组SI显著高于对照组(P<0.01)。各免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFNγ含量均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P<0.01或P<0.05);rTgPGAM2组及其联合IL-2或IFNγ组IL-4含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-10的含量,只有IFNγ组和rTgPGAM2+IFNγ组显著高于对照组(P<0.05)。结论 rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ鼻内免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答优于rTgPGAM2单独免疫,表明IL-2和IFNγ具有良好的佐剂效应,IL-2的佐剂效应更佳。     

脂质血管生长因子粗制品对小鼠脾细胞增殖及ConA诱导IL-2水平的影响

作者建立了脂质血管生长因于（LAF）的乳化方法。用该方法制备的粗制脂质血管生长因子能明显抑制小鼠脾细胞的增殖月降低IL－2的水平，而对照的皮下脂肪抽提物则无此效应。同时发现，乳化过程中加人的Tween－80有一定的细胞毒性。     

内含肽介导的重组人干扰素α2a的原核表达及其生物学活性

目的原核表达内含肽介导的重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)融合蛋白,并检测其生物学活性。方法以质粒pBV220-IFN-α2a为模板PCR扩增rhIFNα2a基因,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB基因下游的多克隆位点,构建重组表达质粒pTWIN1-rhIFNα2a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析,并对裂菌上清的生物学活性进行测定。结果双酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入表达载体中;rhIFNα2a蛋白的相对分子质量约44 300,表达量占全菌总蛋白的30%,在裂菌上清中的表达量占目的蛋白的25%,可与小鼠抗hIFNα单克隆抗体特异性结合;裂菌上清中rhIFNα2a蛋白的活性为5.57×107IU/ml,表明该重组蛋白具有良好的IFN抗病毒活性。结论已成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了具有生物学活性的可溶性重组rhIFNα2a与内含肽Ssp DnaB融合蛋白,为大量生产IFNα2a提供了新的思路。     

重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎临床研究

目的评价重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎患者的临床疗效和安全性,探讨两者联合治疗的协同作用。方法治疗组服用阿德福韦10mg,每天1次口服。重组干扰素α-2b注射液500万单位,每周2次,皮下注射。对照组单用阿德福韦10mg,每天1次口服,疗程均为6个月。结果治疗满6个月后,治疗组和对照组ALT复常率差异无显著性意义;HBeAg/抗HBe血清转换率HBVDNA转阴率差异有显著性意义,停药随访6个月后,2组ALT复常率、HBeAg/抗HBe血清转换率HBVDNA转阴率差异有显著性意义。结论重组干扰素α-2b联合阿德福韦治疗慢性乙型肝炎疗效优于单一用药,是慢性乙型肝炎患者安全有效的治疗方法。     

鼠白细胞介素-2(mIL-2)真核表达质粒的构建及蛋白检测

目的构建重组鼠白细胞介素2的真核表达体系,获得mIL2基因的表达质粒,用其提高DNA疫苗的免疫原性。方法从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RTPCR技术调取鼠白细胞介素2基因,并将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS7细胞,将转染细胞裂解,进行Westernblot检测。结果获得完整的带有信号肽的mIL2序列的质粒,经Westernblot检测阳性。结论构建了mIL2真核表达体系,并获得有生物活性的mIL2蛋白。     

重组人干扰素α_(2a)软膏剂的检定及其临床疗效观察

目的　对重组人干扰素α2a软膏的质量进行检定及临床疗效观察。方法　连续试制 3批样品进行稳定性试验及生殖器疱疹的临床疗效观察。结果　本品性质稳定 ,2～ 10℃保存 18个月生物学活性无明显下降 ,其他各项检定指标均符合质量要求。生殖器疱疹的临床疗效观察 ,治疗组有效率为 85 .72 % ,对照组的有效率为 6 5 .2 7% ,差异有显著意义。结论　该制品生产工艺稳定 ,疗效确切 ,安全性好     

融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长的抑制作用

目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。     

肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-8与慢性阻塞性肺疾病发病机制的关系

慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是呼吸系统常见疾病,近期研究表明,一些细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)与COPD的发生密切相关。TNF-α和IL-8作为主要的炎性递质参与了介导气道炎症反应,二者相互作用、相互促进、加速局部炎症的发生发展,可导致气道结构的重塑和气流阻塞的形成,最终对COPD的发生、发展产生影响。本文就TNF-α和IL-8与COPD发病机制的关系作一综述。     

白细胞介素-2脂质体的制备及其活性和稳定性的研究

利用逆相蒸发法制备出白细胞介素－2（IL－2）脂质体,其包封率为34．52±1．12％,在电镜下具有典型大单层脂体结构,大小为0．2μm左右。利用“ConA诱导T细胞微量测定法”对其活性进行了测定,结果表明IL－2脂质体,活性提高,稳定性好。     

重组人干扰素α2a栓剂治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒感染的疗效

目的 评价重组人干扰素α2a(recombinant human interferon α2a,rhIFNα2a)栓剂治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的疗效.方法 以200例确诊高危型HPV阳性患者作为研究对象,随机分为观察组(患者阴道局部用rhIFNα2a栓剂,隔日1...     

沙门菌对小鼠胃癌细胞增殖及β-防御素-2表达的影响

目的探讨沙门菌对小鼠胃癌细胞MFC增殖及β-防御素-2(mouseβ-defensin,m BD-2)表达的影响。方法将不同浓度(10、10~2、10~3和10~4个/ml)沙门菌分别作用MFC细胞不同时间(12、24和48 h)后,MTT法检测沙门菌对细胞抑制的最佳浓度及时间;TUNEL法检测不同浓度(10、10~2、10~3和10~4个/ml)沙门菌作用MFC细胞不同时间(12、24和48 h)对细胞凋亡的影响;将不同浓度(10、10~2、10~3和10~4个/ml)沙门菌作用MFC细胞4、8和12 h,定量PCR及Western blot法检测m BD-2 m RNA及蛋白水平。结果浓度103个/ml沙门菌作用24 h对MFC细胞的抑制作用明显,细胞凋亡也明显;沙门菌作用MFC细胞8 h时,m BD-2的表达量无论在蛋白还是m RNA水平均较高。结论m BD-2的表达在浓度103个/ml沙门菌作用8 h后达到最高,为进一步研究m BD-2的产生机制奠定了基础。