胶体金法试剂与EIA试剂检测梅毒螺旋体抗体的临床比较分析

目的探讨胶体金法梅毒螺旋体(TP)抗体试剂的灵敏度与特异性。方法用胶体金法与EIA法对188份梅毒患者血清样本进行检测。结果TP抗体S/CO值在>10.0时,胶体金法与EIA法的阳性符合率只有85.3%。结论胶体金法检测TP抗体S/CO值高值样本时存在着一定的漏检率。     

梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品的研制

目的建立梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品。方法通过对84份血浆的复核、确证,组建梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品,并将3份效价检测用参考品溯源至国际标准品,经5家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品由25份阴性及25份阳性样品组成,3份效价检测用参考品的效价定值分别为12、10和5 IU/mL。协助标定确证25份阴性参考品均为阴性,25份阳性参考品均为阳性,效价参考品的效价检测值均≤0. 625 IU/mL。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论研制的参考品可作为梅毒非特异性抗体检测试剂的质量控制和评价使用。     

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)血清抗体的效果。方法以FAMA法为"金标准",同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本(水痘疫苗免前92份、免后92份)的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度(GMT)为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率(灵敏度)为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高(z=-6.03,P0.001)。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义(P0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P0.05)。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8~1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。     

丙型肝炎病毒核心总抗原检测试剂的评价

目的评价国外丙型肝类病毒核心抗原检测试剂盒的质量以及窗口期检测核心总抗原(HCVcAgTrak-C)的意义。方法用该试剂检测8649份自然献血员及566份HCV可疑感染者血清的核心总抗原,并与抗体试剂(Anti-HCV)、游离抗原(HCVfreeAg)试剂、核酸(HCVRNA)试剂进行比较。结果筛出核心总抗原和抗体同时阳性血清152份,抗体阴性而总抗原阳性血清5份。利用RNA试剂检测这5份血清,结果HCVRNA阳性。利用HCVfreeAg试剂检测这9215份血清,发现2份阳性,其中1份为抗原和抗体同时阳性,RIBA检测确证这份血清产生的是核心区抗体。另1份为单独抗原阳性。结论在应用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时使用HCVcAg试剂检测,可以减少因窗口期造成的漏检。     

ELISA在梅毒检测中的价值

近年来梅毒发病率正呈逐年增长之势 ,为了解两种常用梅毒血清诊断方法的差异 ,本文对ＴＲＵＳＴ和梅毒 ＥＬＩＳＡ两种方法进行了比较。取血浆样本 2 0 70份 ,经ＴＲＵＳＴ检测阳性 90份 ,阴性1980份 ,再经上海科华生物工程股份有限公司的梅毒螺旋体抗体酶联免疫法诊断试剂盒复检 ,结果不一致的样本再用日本富士公司的ＴＰＰＡ试剂盒作进一步检测。结果 90份ＴＲＵＳＴ阳性标本中有 3份梅毒 ＥＬＩＳＡ为阴性 ,1980份ＴＲＵＳＴ阴性标本中 ,12份为阳性 ,共有 15份不一致标本。用ＴＰＰＡ试剂检测这 15份标本 ,结果 3份梅毒 ＥＬＩＳＡ阴性标…     

人类免疫缺陷病毒抗体快速检测试剂的临床评价

目的评价人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体快速检测试剂检测全血、血清或血浆样品中HIV抗体的敏感性及特异性。方法从不同地区及不同人群中收集全血样品493份,并分离血清,用考核试剂分别检测同一人的全血及血清样品;同时从不同地区及不同人群中收集HIV抗体阳性和阴性血清/血浆样品共1175份,用考核试剂和参比试剂同时检测。结果考核试剂检测493份全血和血清样品的结果一致,HIV抗体阳性为99份;与参比试剂相比,考核试剂检测血清/血浆样品的敏感性为100%,特异性为99.92%。结论该考核试剂与参比试剂的质量相当。     

梅毒螺旋体血凝试剂盒的研制

以超声波处理的梅毒螺旋体为抗原,致敏经醛化、鞣化处理的绵羊红血球,应用血凝试验检测梅毒患者血清中梅毒螺旋体特异性抗体。同时以国际上公认的标准方法——FTA-ABS作为对照试验。共检测1125份血清(其中梅毒血清205份,非梅毒血清920份).两种方法检测结果完全相符,即敏感性皆为100％,血凝试验的特异性为99％。     

应用ELISA间接法检测乙肝核心抗体

作者应用高纯度基因重组的酵母菌生产的 HBcAg(YrHBcAg),建立了 ELISA 间接法。用酶标记抗人 Ig 检测结合于固相 YrHBcAg 上的抗-HBC。检测阳性血清的敏感性比竞争性抑制法高3个滴度;在36份参比血清的检测中,间接法和竞争性抑制法与 Abbott 试剂的符合率分别为72.1%和33.3%;在558份献血员血清的检测中,间接法比竞争性抑制法的检出率高7.7%。     

EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用

目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量。结果所建立的BA-ELISA法在EV71蛋白含量625～156.25ng/ml之间线性关系最佳,R2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25ng;与包括CoxA16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约103～104CCID50的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒。结论用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考。     

化学发光免疫分析法检测人血清孕酮

目的研究用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清孕酮(PROG)。方法采用竞争抑制法,用高亲和力的多克隆抗体包被,碱性磷酸酶标记孕酮,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物来检测PROG。并考察试剂的灵敏度、精密性、准确性、特异性和测定范围。将试剂盒置4℃存放14个月,检测质控血清的PROG含量,考察试剂的稳定性。并与进口试剂进行比较。结果CLIA法检测PROG灵敏度达0.1ng/ml;特异度99.5%;测定范围在0.1～200ng/ml之间;用PROG浓度分别为高、中、低的质控血清测定精密性,批内和批间变异系数均小于10%,回收率在91.7%～108.4%之间;与雌二醇、雌三醇和雌酮的交叉反应率低于0.1%,与睾酮和可的松无交叉反应;试剂在4℃存放14个月,质控血清的测定值均在规定范围内;与进口全自动化学发光试剂BeckmanAccessTM相比有较好的相关性。二者测定结果的符合率为99.2%。结论化学发光法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有很好的准确性和精密性,是现有放射免疫法的理想替代方法。     

梅毒螺旋体特异性抗原TP17、TP0453的表达及以其作为诊断抗原的间接ELISA方法的建立

目的表达、纯化梅毒螺旋体特异性外膜蛋白TP17和TP0453,并以其作为包被抗原,建立新型梅毒酶联免疫诊断方法。方法 PCR扩增TP17和TP0453基因,分别克隆入pET-22b(+)和pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化后进行Western blot鉴定。以纯化的重组TP17和TP0453蛋白作为诊断抗原,建立间接ELISA方法,并对该方法进行验证。结果 PCR分别扩增出500和800bp的TP17和TP0453基因片段,测序结果与GenBank中登录的CDS序列完全一致。重组表达质粒pET-22b(+)-TP17和pET-28a(+)-TP0453经双酶切鉴定正确;重组TP17和TP0453蛋白的相对分子质量分别约为18000和29000。表达量分别约占菌体总蛋白的18%和24%,纯化的重组TP17和TP0453蛋白的纯度分别>95%和>90%。两种重组蛋白均能与梅毒标准血清发生特异性反应。检测70份梅毒参考血清和定值质控血清的批内变异系数(CV)≤4.35%,批间CV≤6.69%,表明精密性良好;对国家标准血清盘的检测灵敏度为94.4%,特异性为97.1%,符合率为95.7%,最低检出限为0.25NCU/ml。结论表达和纯化的重组TP17和TP0453蛋白具有良好的抗原性和特异性,可用于梅毒血清学诊断。     

梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达

目的克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据。方法PCR法扩增TP0684编码基因。T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定。结果PCR法扩增出了1212bp的目的片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致。转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约43000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础。     

梅毒螺旋体特异性抗原TpN47基因片段的克隆与表达

目的在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp)TpN47(68~410 aa)重组蛋白。方法采用PCR法从Tp全基因组中扩增TpN47(202~1230 bp)片段,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47,经酶切鉴定后转化EcoliBL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化,Western blot鉴定其免疫反应性。结果PCR法扩增出约1 000 bp的目的片段,原核表达质粒pET-22 b(+)-TpN47经酶切鉴定正确,表达的蛋白约占菌体总蛋白的43%,相对分子质量约为39 000,以包涵体形式存在。经纯化后蛋白纯度达95%以上,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论所表达的TpN47重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒奠定了实验基础。     

丙型肝炎抗体确证试剂检测结果的分析

目的分析丙型肝炎抗体确证试剂的检测结果。方法用两种国外抗HCV确证试剂(RIBA和MP)分别对89份抗HCVEIA试剂(Ortho)检测为高值阴性或弱阳性样品进行检测,按试剂说明判定结果。并对两种确证试剂对4种丙肝分片段抗体的检出率进行比较。结果两种确证试剂RIBA和MP与Ortho试剂的总符合率分别为43.8%和47.2%,均出现了较多的不确定样品。两种试剂对丙肝NS3抗体和NS5抗体的检出率基本一致,MP试剂对丙肝核心抗体和NS4抗体的检出率显著高于RIBA试剂。结论对于不确定样品,最好结合临床症状及病人追踪检测进一步确诊。     

两种乙型肝炎病毒核酸定量试剂对315例样本检测结果的比较

目的采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异。方法采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称"Roche试剂")及国产(简称"国产试剂")乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性。结果两种试剂定性结果阳性符合率为60.6%(134/221),阴性符合率为100%(94/94),总符合率为72.4%,检测结果差异有统计学意义(P<0.01);无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均<0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因;定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性。结论不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高。     

狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用

目的建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFIT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定最佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性。结果狂犬病病毒抗原AG∶CTN-1=4∶1为最适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00～33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),最低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU。该方法检测人血清白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%～7.84%之间;回收率在97.25%～104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801。结论已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查。     

两种进口HBV/HCV/HIV核酸筛查试剂的质量评价

目的对Gen-Probe公司的Procleix Ultrio(Ultrio)和Roche公司的Cobas TaqScreen MPX(MPX)HBV/HCV/HIV核酸筛查试剂的质量进行初步评价。方法从我国不同地区收集60份HIV-1感染者样品(包括59份HIV抗体阳性样品和1份HIV抗体阴性的HIV-1感染窗口期样品)及540份HIV抗体阴性样品,将60份HIV-1感染者样品随机分布于540份HIV阴性样品中,按照合并检测模式对600份样品进行检测,并对每种试剂的检测结果为阳性的样品汇集池(pool)分别按其说明书进一步进行拆分和/或鉴别试验。结果 MPX试剂和Ultrio试剂的单一人份样品检测(Individual donor test,IDT)结果一致的样品共586份,二者的符合率为97.67%,MPX试剂共有12份样品检测结果为假阳性,Ultrio试剂共有6份样品检测结果为假阳性,4份样品MPX试剂检测为阳性,而Ultrio试剂检测为阴性,其核酸含量较低(1份样品HIV-1RNA<40cp/ml,3份样品HBV DNA<12cp/ml),由于无法完成跟踪随访,因此不能确定其最终感染状态。结论 MPX试剂和Ultrio试剂检测结果具有较高的一致性,但对于HBV DNA、HCVRNA和HIV-1RNA含量较低的样品,二者检测结果可能存在一定的差异。     

VIDAS HIV Duo Assay试剂的特异性及敏感性

目的评价HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV Duo Quick)和超敏法(VIDAS HIV Duo Ultra)试剂的特异性及敏感性。方法用这2种试剂和HIV抗体参比试剂,分别检测287份HIV感染或疑似感染者样品、1240份非HIV感染者血清/血浆样品,对与参比试剂检测结果不一致样品,进行抗体的确认及HIV p24抗原和RNA的检测,并比较其特异性和敏感性。用这2种试剂和HIV-1p24抗原参比试剂,分别检测3株病毒培养上清的系列稀释样品,并比较其检测p24抗原敏感性的差异。结果共检测1277份HIV抗体阴性样品和250份HIV抗体阳性样品,与参比试剂相比,快速法试剂的特异性为99.45%,敏感性为100%,而超敏法试剂的特异性为99.14%,敏感性为99.20%。两种试剂检测病毒株培养上清的敏感性均不低于HIV-1p24抗原参比试剂,且能检出HIV感染窗口期样品。结论这2种试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性均没有明显降低,并且能检测出HIV感染窗口期样品。     

肽基精氨酸脱亚胺酶4抗体定性检测试剂盒的研制及初步应用

目的研制肽基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylarginine deiminase 4,PADI4)抗体定性检测ELISA试剂盒,并初步探讨其对诊断类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的临床意义及应用价值。方法采用PADI4多肽片段作为包被抗原,制备PADI4抗体定性检测试剂盒,并检测50份RA患者和283份健康人血清,评价该试剂盒的分析性能、精密性和稳定性。使用该试剂盒对181份临床确诊RA患者和353份健康人的血清样本进行初步检测。结果所制备的PADI4抗体定性检测试剂盒总体符合率为85.3%,灵敏度为46.0%,特异性为92.2%;板内变异系数分别为2.47%和4.26%,板间变异系数分别为4.24%和6.20%;在4℃保存6个月,总体符合率、灵敏度、特异性、精密性均无明显变化,稳定性良好。181份RA患者血清中阳性检出率为45.3%,353份健康人血清中阳性检出率为7.7%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论所研制的试剂盒可用于类风湿关节炎的临床辅助诊断。