不同地理漆树种源的遗传多样性AFLP分析

为了探索不同区域与海拔漆树种源遗传多样性及相关性,利用AFLP分子标记技术对源于陕西、四川、重庆、湖北四省市的70个不同种源漆树样本进行了遗传多样性分析。从64对Pst I+3/Mse I+3引物组合中,筛选出8对引物,用于扩增基因组DNA,共获得27831条清晰可见的标记,其中多态性标记有26545条,多态性检出率95.38%。所有样本的的遗传距离在0.191~0.995之间,相似性为0.741~0.917。海拔不同的11个样本的遗传距离为0.219~0.468,相似性为0.828~0.915。UPGMA聚类结果显示漆树种群与海拔标高的相关性不明显,但是与区域联系紧密。同一区域的漆树种群在分子水平上较相似,趋向于聚为一簇,邻近区域的种群也有较大相似性。     

四川地区小麦主栽品种遗传多样性研究

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对所选取的10个四川地区小麦主栽品种进行了基因组DNA多态性分析。14个随机引物产生的76条谱带中,74条谱带(97.37%)表现出多态性,平均每个引物可扩增5.43条谱带,这说明这10个品种之间具有丰富的遗传多样性。利用76个RAPD标记,计算材料间的遗传距离,在NTSYS程序中利用UPGMA进行聚类分析,结果表明,绵阳19与宁春47差异明显,其遗传距离在0.357~0.928之间,亲缘关系较远;绵农4号与川农17差异较小,其遗传距离在0.142~0.143之间,亲缘关系较近。研究结果可为四川地区小麦品种改良和遗传育种提供理论依据。     

一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分特异性引物的研发

目的研发一种用于实时荧光PCR法检测肉制品中鼠源性成分的特异性引物。方法通过比对NCBI中多种物种的脱氧核糖核酸细胞色素b(mitochondrial deoxyribonucleic acid cytochrome b,Cytb)基因全序列,设计针对鼠源性成分的特异性引物。采用DNA提取试剂盒提取鼠DNA,以其为模板,通过设计的特异性引物进行实时荧光PCR扩增,试验重复3次。同时验证该引物的特异性,并对羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品进行检测。结果通过设计的特异性引物进行3次实时荧光PCR扩增的Cp平均值为16.47,标准差为0.430,熔解曲线具有明显的单一主峰,且重合度良好。仅鼠源DNA模板的PCR产物可见115 bp的目的条带,其他物种DNA模板均未扩增出该目的条带。羊肉卷、牛肉卷和猪肉片样品中均未检测出鼠源性成分。结论本实验设计的引物可用于实时荧光PCR法对肉制品中鼠源性成分的检测,且特异性较好。     

聚合酶链式反应技术检测化妆品中的铜绿假单胞菌

利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有铜绿假单胞菌基因组的样品中得到条带;对染菌样品的扩增结果显示,可以在原样品的活菌浓度为6 cfu.mL-1时通过增菌12 h后检出。     

海水厌氧氨氧化反应器的启动及最佳运行工艺摸索

从渤海湾滩涂地区采集泥水样品,通过厌氧氨氧化反应特异引物对样品进行PCR扩增,选取可以扩增出特征条带的样品构建厌氧氨氧化反应器,容积为18L。当反应器的水力停留时间从7d延长到14d时,反应器启动成功。反应器稳定运行的最佳条件为:水力停留时间7~21d、盐度35‰~50‰、进水总氮负荷变化值小于20%、温度20~35℃、pH值6~7。     

菌落PCR技术检测化妆品中金黄色葡萄球菌

利用菌落PCR技术，以金黄色葡萄球菌的特有基因femA为靶基因，选择特异引物．进行扩增，鉴定化妆品中金黄色葡萄球菌。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示，仅在含有金黄色葡萄球菌基因组的样品中得到条带。     

烤后烟叶SSR反应体系的优化研究

以烤烟RG11品种为原料,研究烤后烟叶简单重复序列(SSR)分析中聚合酶链式反应(PCR)体系各主要因素及其之间的相互作用对SSR扩增的影响,结果表明:烤后烟叶SSR-PCR反应最佳体系为20μL体系中含35 ng模板DNA,1.5 U TaqDNA聚合酶,2.375 mmol/L MgCl2,0.6 mmol/L dNTPs和0.4μmol/L引物.     

大肠埃希菌O157:H7新型多重PCR检测方法的建立及其初步应用

目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌O157∶H7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌O157∶H7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌O157∶H7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌O157∶H7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌O157∶H7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。     

黄瓜细菌性萎蔫病菌分子诊断研究

从田间黄瓜细菌性萎蔫病植株分离获得病原菌,比对其近源种的16S rDNA序列,确定该病原菌为嗜维管束欧文氏菌(Erwinia tracheiphila),并设计出特异引物ET-P1/ET-P2.经过对该引物的PCR扩增条件优化,扩增出一条794 bp的黄瓜细菌性萎蔫病菌特异条带,检测灵敏度达100 fg/μL,可准确扩增出黄瓜发病植株和根围土壤中的DNA片段.     

分子生物学方法在土壤真菌多样性研究中的应用

真菌是生态系统的重要组成成分,研究土壤中真菌的多样性和群落结构对于开发利用微生物资源、进行土壤生物修复具有重要意义。现代分子生物学的发展为研究土壤真菌提供了行之有效的方法。主要综述了限制性片段长度多态性、末端限制性片段长度多态性、变性梯度凝胶电泳、随机引物扩增多态性DNA、18S rDNA文库构建等技术的原理及在土壤真菌多样性研究中的应用。     

中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法的建立

目的建立中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法。方法参照已发表的中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)基因序列,针对其结构蛋白基因设计1对特异性引物,提取感染CSBV的囊状幼虫RNA,反转录为cDNA,以其为模板,进行PCR扩增,对检测方法进行优化,验证该方法的特异性及敏感性,并对31份临床样品进行检测。结果所建立的CSBVRT-PCR检测方法特异性和敏感性良好,以含CSBV结构蛋白基因的重组质粒为模板,最低可检出10pgDNA。临床症状诊断和电镜观察均为阴性的22份样品经RT-PCR检测,有2份扩增出目的条带。结论已建立了中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法,为CSBV检测、流行病学调查及动物模型的建立奠定了基础。     

Ag85B-ESAT6重组腺病毒肺结核疫苗的遗传稳定性

目的 分析Ag85B-ESAT6重组腺病毒(rADV-Ag85B-ESAT6)肺结核疫苗的遗传稳定性。方法将纯化的重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在HEK293细胞上连续传代20次,观察细胞病变情况;PCR扩增及序列比对分析重组腺病毒基因的稳定性;Western blot分析重组腺病毒Ag85B-ESAT6融合蛋白的表达稳定性。结果重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6引起HEK293细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;第10代和第20代重组腺病毒均可扩增出1 322 bp的外源基因片段和860 bp的重组腺病毒特征基因E2b片段,野生型腺病毒引物未扩增出特征条带;Western blot分析表明,第10代和第20代重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在相对分子质量约47 000处可见Ag85B-ESAT6融合蛋白表达条带。结论重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在体外传代20次,表现出良好的基因结构稳定性。     

高温热管热风炉系统在喷雾干燥上的应用

如果两个亲本表型，则杂交后代产生超亲个体的可能性较大。利用杂种优势、亲缘系数分子标记可直接鉴定亲本间的遗传多亲笥。本研究主要是确定了７个硬粒红色春小麦材料ＤＮＡ多态性的范围，研究以分子标记为基础的多样性和以亲缘系数为基础的遗传多亲性的关系，鉴定遗传多样性与这７个亲本双列杂交下Ｆ１表型的关系。     

黄芪干燥根与鲜品总DNA提取方法评价

以采挖的2份新鲜黄芪根为原料,经干燥处理另制成2份干燥根样品。利用传统SDS法和改良CTAB法对干品和鲜品黄芪总DNA提取,为黄芪中药材资源的分子生物学试验提供基础原料。结果显示:改良的CTAB法提取的干品和鲜品总DNA的A260/A280比值在正常范围值内,而SDS法提取的4个样品比值均低于1.6。对8个样品总DNA进行琼脂糖电泳显示,CTAB法提取的样品条带清晰无拖尾现象,鲜品提取的总DNA浓度和质量高于干品。     

SSCP技术解析硫酸盐还原反应器中微生物群落结构

采用改进的单链构象多态性（SSCP）技术，以16SrRNA基因的V3区为靶对象，分析完全混合式硫酸盐还原反应器中微生物的群落结构以及硫酸盐还原菌（SRBs）与产酸菌（ABs）的种间关系，共得到13个可辨晰的SSCP条带，对其中的6条带（A1、A3、A4、A5、A9、A10）进行了测序分析，分别同嗜柠檬酸明串球菌、未培养细菌、产乙醇杆菌、梭杆菌等相似性较大。     

厌氧降解六氯苯菌群的群落结构及多样性分析

利用对六氯苯(HCB)有了较好降解活性的厌氧混合菌群反应系统,以HCB驯化0 d、60 d、90 d、180 d、240 d和480 d(编号为1~6)的厌氧污泥作为样品(每次取样约为100 mg污泥),利用PCR-DGGE、DGGE条带测序等方法对降解HCB的厌氧菌群群落结构演变进行了分析。结果表明,对提取的6个样品总DNA进行了PCR扩增,其片段大小约为245 bp;驯化前和驯化60 d的样品,菌种丰富度比较高,而随着驯化时间的延长,样品条带数减少,但部分条带信号明显被强化,说明HCB驯化使污泥中微生物种群和数量得到了定向富集。应用QuantityOne软件分析DGGE图谱不同样品间的相似程度,结果表明,驯化前污泥与驯化不同时期的污泥样品微生物相似性变化呈现降低-增大-再降低的过程,说明HCB驯化过程中微生物群落结构经历了复杂的演替变化。对6号样品的1~4个条带,进行了测序,测序结果表明,降解HCB的优势菌群包含四类菌群,但是目前尚无法单独培养。     

生物反硝化脱氮碳源上微生物的多样性

为了研究废弃农作物作为反硝化脱氮处理的新型碳源和生物膜载体中微生物的多样性及微生物的群落结构,将玉米芯作为反硝化碳源和生物膜的载体伽置在河道中,采集同步脱氮过程中的玉米芯样品并提取微生物总DNA,使用细菌通用引物对(GC341F和518R)从总DNA中成功扩增出目标16SrDNA片段,然后对扩增的16SrDNA进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)测定,对凝胶染色并进行条带统计分析和切胶测序.结果表明以玉米芯为载体的生物膜优势菌变化规律与生存环境的变化存在较好的相关性,当水体中溶解氧提高后,生物膜上的优势种群以好氧/兼氧的异养杆状细菌Bacillus为主.     

低品位硫化铜矿生物柱浸过程细菌种群结构及演替规律

利用分子生物学的PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)分析技术和PCR-16S rDNA序列分析技术研究了以黄铜矿为主的低品位硫化铜矿中温硫杆菌柱浸过程中细菌种群结构、演替规律及与铜浸出率之间的关系. DGGE电泳图谱共6个条带中有5个条带对应的菌株16S rDNA序列与已知菌?嗜酸氧化亚铁硫杆菌A.f的同源性均为98%以上. 用9K固体培养基从柱浸浸出液中随机分离出3个纯菌株的16S rDNA序列,与已知菌A.f的同源性也均为99%,均证明该生物柱浸过程以A.f为优势菌种. 细菌柱浸的菌群演替发生在A.f同菌种内的各菌株之间. 柱浸前期易浸的次生硫化铜矿选择了02和05两条带所对应的A.f菌株,柱浸中后期难浸的黄铜矿则选择了01, 02, 03, 04, 06五条带所对应的A.f菌株.     

中蜂囊状幼虫病病毒依赖解旋酶扩增检测方法的建立

目的建立中蜂囊状幼虫病病毒(chinese sacbrood,CSBV)依赖解旋酶扩增(helicase-dependent amplific ation,HDA)检测方法,并对该方法进行优化及验证。方法提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫RNA,以其为模板进行HDA,对建立的HDA的引物浓度(原始浓度为50μmol/L,进行10、20、40、80、160、240、320倍稀释)、反应温度(60、65及70℃)及时间(60、90及120 min)进行优化,并对优化的方法进行特异性、敏感性及稳定性验证。经电镜观察、RT-PCR及优化的HDA法对37份临床样品进行检测。结果 HDA最佳引物浓度、反应温度及时间分别为5μmol/L、65℃及90 min;CSBV与健康幼虫、蜜蜂急性麻痹病毒(acute bee paralysis virus,ABPV)、蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus,CBPV)、黑蜂王台病毒(black queen cell virus,BQCV)和残翅病毒(deformed wing virus,DWV)cDNA均无交叉反应,HDA的最低检出限为10-2ng,检测试剂保存12个月后,仍可扩增出目的条带;37份临床样品中,有6份样品的RT-PCR和HDA结果为阳性,但电镜观察仅有4份为阳性。结论建立了CSBV HDA检测方法,该方法具有较高的敏感性、特异性及稳定性,为检测其他蜂病毒及快速鉴定其他动物病毒提供了参考。     

昆虫抗药性遗传的研究进展

昆虫对药剂的抗药性是可以遗传的，表现出不同的规律性，这些规律较早的被人发现并用于研究昆虫的抗性机理。作者对抗药性的形式遗传、分子遗传、群体遗传三个研究方向的进展进行了综述，并对其发展的方向进行了展望。