槲皮素及其衍生物抗植物病毒活性及作用机制的研究进展

从活体和分子水平上简述了槲皮素对马铃薯X病毒、番茄环斑病毒、番茄丛矮病毒等植物病毒的抑制活性。讨论了槲皮素衍生物和结构类似物对植物病毒或人类病毒的抑制活性。描述了槲皮素对本氏烟等植物热休克蛋白70的表达调控效果。以哺乳动物细胞为例,探讨槲皮素调控热休克因子的分子机理。     

外周血单个核细胞在不同pH条件下HSP70形成的研究

目的探讨不同pH血清对热休克蛋白形成的影响。方法抽取16例健康志愿者外周血,应用密度梯度法分离单个核细胞,分别在不同pH血清中42℃热休克0.5、1h,用免疫组化测定热休克蛋白的形成。结果体外血单个核细胞在不同pH血清中热休克蛋白形成有明显差异。结论热休克蛋白的形成速度与应激源数量密切相关。     

热休克蛋白60的研究前景

简要介绍了热休克蛋白60(HSP60)及其在细胞中的调控功能。叙述了HSP60与某些疾病的关联和在免疫中的作用。最后,对HSP60的研究前景进行了展望。     

食管癌细胞中热休克蛋白70-多肽复合物的分离

目的分离纯化癌细胞中热休克蛋白70(HSP70)-多肽复合物。方法以食管癌组织为材料,通过一系列的层析柱(ConA-Sepharose、ADP-Agarose、MonoQ及HSP70抗体亲和层析柱)进行分离及纯化。结果所分离纯化的HSP70-多肽复合物相对分子质量与预期相符。结论为提取肿瘤HSP70-多肽复合物提供了具体方法,并为研制多肽疫苗奠定了基础。     

人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22·3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Westernblot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni2+-NTA亲和柱,从1L诱导产物中纯化出约1520mg重组蛋白,纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。     

热休克蛋白90在抗病毒免疫中作用的研究进展

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)指在热应激条件下为保护机体自身合成的蛋白质,具备分子伴侣功能。HSP根据相对分子质量的大小被分为小分子HSP、HSP70、HSP90、HSP110家族。近年来越来越多的研究表明,HSP90与病毒感染有关,在多种病毒的复制中起作用,可与特定病毒的蛋白相互作用来促进病毒复制,也可与其他蛋白相互作用来发挥功能。本文就近年来HSP90在病毒免疫中所起的作用作一综述,为相关药物及抑制剂的研制奠定理论基础。     

多聚嘧啶区结合蛋白1基因及其相关疾病的研究进展

多聚嘧啶区结合蛋白1(polyrimidine tract binding protein 1,PTBP1)是一种选择性剪接蛋白,通过对Pre-mRNA的选择性剪接以产生多样化的mRNA,从而参与多基因表达的转录调控过程,在肿瘤细胞存活、增殖、转移等过程中发挥重要作用。在不同肿瘤中,PTBP1的表达水平及生物学功能不同,机制之一可能在于其结合的相互作用蛋白不同。另外,PTBP1与神经系统退行性病变、高血压的发病有关,还参与机体免疫及细胞衰老。本文就PTBP1的结构、功能及其与疾病的相关性等方面作一综述。     

Septin蛋白功能的研究进展

Septin是一类存在于除高等植物外的真核生物中高度保守的GTP结合蛋白。不同亚型的Septin可通过异源多聚体的形式形成丝状或环状等更高级有序的结构发挥相应功能,可调控酵母出芽、细胞分裂等生理过程,并参与宿主细胞的防御反应。Septin的异常表达或突变与肿瘤和神经系统疾病的发生、发展密切相关。本文就Septin蛋白家族成员的生理功能、Septin对肿瘤和神经系统疾病发生发展的影响以及Septin在宿主免疫应答过程中的作用等作一综述。     

幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆和表达

目的　扩增幽门杆菌热休克蛋白A 35 1bp的DNA片段 ,并将其克隆到pET - 2 8a(+ )质粒中高效表达。方法　用PCR方法扩增的片段经测序后 ,用GoldKey分析软件进行序列分析 ,应用pET - 2 8a(+ )系统在受体菌BL2 1(DE3)pLysS中表达热休克蛋白。结果　该序列表达的蛋白与已报道的热休克蛋白A序列相似。重组菌株用IPTG诱导后 ,经SDS PAGE和薄层扫描分析 ,表达的外源蛋白的相对分子质量为 180 0 0 ,以包涵体的形式存在 ,表达产物占菌体总蛋白的 6 4%。结论　HspA是最有可能做为H .p疫苗中的候选抗原成分     

肠道病毒71型2A、3C、3D蛋白的研究进展

肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)感染是引起神经系统紊乱、肺水肿、肺出血等严重疾病的主要原因。非结构蛋白2A、3C、3D是EV71在宿主细胞内完成复制和存活的基础,具有不同于肠道病毒其他成员的结构和作用机制。2A和3C蛋白可抑制宿主细胞蛋白的表达,从而促进细胞凋亡,3C蛋白还可抑制天然免疫,3D蛋白与病毒的耐高温和高度变异适应性有关。一些小分子物质可在病毒入侵的不同阶段抑制EV71感染。本文就2A、3C、3D蛋白在EV71复制过程中的结构与功能特点以及一些小分子物质在病毒复制中的抑制作用作一综述。     

热休克蛋白70过表达对过氧化氢诱导BRL细胞caspase 3表达的影响

目的探讨热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)70过表达对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导Buffalo大鼠肝细胞(BRL细胞)cleaved caspase 3表达的影响。方法将BRL细胞分为6组:空白对照组、Ad-CMV-Null组、Ad-CMV-Hsp70组、H_2O_2组、Ad-CMV-Null+H_2O_2组和Ad-CMV-Hsp70+H_2O_2组,Ad-CMV-Null、Ad-CMV-Hsp70、AdCMV-Null+H_2O_2、Ad-CMV-Hsp70+H_2O_2组分别加入1×10~7 PFU/ml的Ad-CMV-Null或Ad-CMV-Hsp70培养48 h后,H_2O_2、Ad-CMV-Null+H_2O_2和Ad-CMV-Hsp70+H_2O_2组分别加入150μmol/L H_2O_2处理2 h,空白对照、Ad-CMVNull和Ad-CMV-Hsp70组分别加入培养液培养。分别采用实时荧光定量PCR检测细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中Hsp70及cleaved caspase 3蛋白的表达水平。结果与H_2O_2组相比,Ad-CMVHsp70+H_2O_2组细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著升高(P0.01),cleaved caspase 3蛋白表达水平显著下降(P0.01)。结论Hsp70可抑制caspase 3的激活最终保护BRL细胞,减少凋亡损伤。     

硒蛋白的形态分析

硒是人体内必需微量元素,主要以硒蛋白和硒结合蛋白形式在生命过程中发挥作用。明确硒相关蛋白分子形态与功能的关系,对于深入研究不同形态硒化物的新陈代谢、生物有效利用率及毒理毒性作用等规律,以从分子水平阐明硒同人类健康与疾病的密切关系具有重要意义。本文综述近年来硒蛋白分子的存在与功能、提取与分离、特别是结合多种联用技术进行硒蛋白分子生物与化学形态分析与鉴定等方面的研究进展。     

Exosomes在肿瘤免疫方面的研究进展

Exosomes是由细胞多囊体形成的一种膜性小囊泡,其来源十分广泛。Exosomes的功能最初被认为仅仅是降解内吞物质,但经多年来的研究发现,exosomes的特异功能与其来源细胞密切相关。其携带多种独特的蛋白,如黏附蛋白、热休克蛋白等,它们在信号传导中起重要作用。由于exosomes能够传递抗原给T细胞,使其在免疫系统中也具有重要作用,可作为一种免疫治疗的新手段,应用于肿瘤治疗和免疫耐受等方面。本文主要对exosomes诱导抗肿瘤免疫应答和免疫抑制两方面的功能机制作一综述。     

人HSP70与MAGE-4表位基因原核表达载体的构建及表达

目的构建热休克蛋白70(HSP70)与黑色素瘤抗原-4(MAGE-4)抗原表位基因的原核表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法在热应激条件下,用PCR法从结肠腺癌细胞获取HSP70基因。在线用蛋白质二级结构预测软件分析MAGE-4抗原表位,PCR获取MAGE-4抗原特征表位基因。将二者分别克隆入pGEM-Teasy载体,酶切鉴定后,将HSP70基因亚克隆入pET28a原核表达载体,再将MAGE-4基因克隆入HSP70基因的下游,构建重组质粒pET28a-HSP70-MAGE-4。转化大肠杆菌,IPTG诱导表达并鉴定。结果所构建的HSP70与MAGE-4抗原表位基因表达载体pET28a-HSP70-MAGE-4,经PCR及DNA测序结果表明构建正确。SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带。结论已成功构建了人HSP70与MAGE-4抗原表位基因的原核表达载体,为疫苗研究提供了依据。     

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位基因工程菌的发酵

目的 研究幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）基因工程菌的发酵工艺。方法 通过不同培 养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌热休克蛋白Ａ亚单位基因工程菌的菌体生长与 外源蛋白表达量的影响的比较,确定其较为合适的培养条件。结果 多批实验证明,菌体单产可达４２ｇ／Ｌ,目的蛋 白的表达率为３８．５％。结论 此发酵工艺可以提高ＨｓｐＡ基因工程菌菌体的得率和目的蛋白的表达。     

人热休克蛋白73的基因重组、表达和纯化

目的　用基因重组的方法表达人热休克蛋白７３,并纯化表达产物,用于进一步分析。方法　用人 热休克类似蛋白ＨＳＰ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＰ７３,在大肠杆菌ＢＬ２１中用半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达,用 电泳法和 ＡＴＰ亲和层析法提取 ＨＳＰ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、用３ ａ３抗体 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作 ＥＣＬ检测。结果人 ＨＳＰ７３基因 构建的载体ｐＥＴＨＳＰ７３能很好地在大肠杆菌表达出相对分子质量为７３　０００的蛋白。两种蛋白提取方法均能有效提纯表达的蛋白,该蛋白具有人ＨＳＰ７３抗原特性。所得蛋白质氨基酸测定和Ｎ端测序的结果与有关的报道一致。结 论　ＨＳＰ７３基因重组、表达和纯化方法的建立,为研究ＨＳＰ７３的结构、功能与临床应用提供了必要条件。     

丹参活性化学成分的研究

丹参属于唇形科鼠尾草属植物,是一种传统中药,现代医学认为其主要用于治疗心血管疾病、肝脏及神经系统疾病.它具有扩张血管,增加血流量,保肝护肝及抑制神经系统和消炎杀菌之功效.     

梯度醇沉兰州百合多糖结构及降血糖活性分析

以兰州百合为原料，采用热水提取和不同体积分数乙醇（30%，50%，70%，80% ）醇沉得到4种兰州百合多糖，分别记为BLP-30、BLP-50、BLP-70和BLP-80。测定BLP-30、BLP-50、BLP-70和BLP-80中可溶性总糖质量分数、蛋白质量分数、糖醛酸质量分数、紫外吸收光谱、单糖组成、相对分子质量等结构表征，运用相关性分析比较多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力与结构表征的相关性。结果表明，4种兰州百合多糖均不含或含有极少量糖醛酸和蛋白，可溶性总糖质量分数最高的为BLP-80的30.96%。4种多糖为混合多糖，均由甘露糖、葡萄糖和少量半乳糖组成，相对分子质量从BLP-30-1的645 kDa逐渐减小至BLP-70-4的2.45 kDa。其中BLP-30和BLP-50为葡聚糖，BLP-70为半乳甘露葡聚糖，BLP-80为甘露葡聚糖，BLP-30甘露糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为10.18%、88.67%、1.15%；BLP-50甘露糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为2.49%、97.02%、0.49%；BLP-70甘露糖、葡萄糖、半乳糖摩尔分数分别为26.94%、68.21%、4.85； BLP-80甘露糖和葡萄糖摩尔分数分别为41.56%和58.44%，不含半乳糖。4种多糖均具有一定的体外降血糖活性，且呈量效关系，4种多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力强弱顺序分别为BLP-70＞BLP-80＞BLP-30＞BLP-50和BLP-50＞BLP-70＞BLP-80＞BLP-30。相关性分析显示，4种多糖对α-淀粉酶的抑制能力与甘露糖和半乳糖的摩尔分数呈正相关（P＜0.05），多糖对α-淀粉酶的抑制能力与葡萄糖的摩尔分数呈负相关（P＜0.05）；多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制能力与可溶性总糖质量分数、糖醛酸质量分数、甘露糖摩尔分数呈负相关（P＜0.05），多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制能力与葡萄糖摩尔分数呈正相关（P＜0.05）。4种兰州百合多糖中BLP-70的体外降血糖活性更强，推测兰州百合多糖的相对分子质量在2~3 kDa之间，甘露糖与葡萄糖物质的量比在n（甘露糖）：n（葡萄糖）=1：2.5之间更有利于兰州百合多糖发挥体外降血糖活性。     

探秘喷漆作业转危为安的职业防范措施

正众所周知,常见在喷漆中会有各种溶剂含有苯及苯的化合物,如甲苯、二甲苯等。稀释剂中乙醇、丁醇等常用的工业溶剂也都有毒,甚至有的还有剧毒,如甲醇等。这些有毒物质的存在,对人体的神经系统、呼吸系统和皮肤等有一定的毒害,最常出现的如苯中毒和漆中毒等现象发生。在涂装过程中,经常产生大量的挥发性气体,扩散在空气中。这些大量的有毒的热气体,如果人体吸入,会发生神经系统的疾病,一般出现头晕、心悸和恶心呕吐等反应。手指和     

日本五种农药的工业合成和关键问题

1.优乐得(buprofezin) 该药剂为抑制昆虫蜕皮的杀虫剂,与通常抑制神经系统的杀虫剂具有不同作用特性。这种杀虫剂是在使用具二硫杂环戊烷结构的防治稻瘟病杀菌剂富士一号时,发现其具有抑制昆虫蜕皮(变态)而得以启发。为谋求作用更高的化合物。通过在二硫杂环戊烷上加上各种