一种核酸适配体高敏检测方法的建立及应用评价

本文建立一种基于免疫印迹的核酸适配体高敏定量分析的检测方法,并探讨其在适配体药物靶向性研究中的应用价值。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸适配体的分离,然后利用电转的方法将凝胶上的核酸适配体转移至PVDF膜上,先后孵育Rabbit Anti-Biotin和HRP-Streptavidin抗体,最后利用化学发光仪进行成像。结果显示核酸适配体可以通过该方法进行定量检测分析,且该方法检测灵敏度高,能够识别荧光染料法检测不到的浓度范围。此外,该方法只识别被生物素修饰的核酸适配体,特异性强。结果提示,核酸免疫印记法可以作为核酸适配体药物靶向性研究的一个定量检测手段。     

基于二硫化钼交流阻抗适体传感器对三磷酸腺苷的无标记检测

为了实现对三磷酸腺苷(ATP)无标记、高灵敏地检测,构建了基于二硫化钼的交流阻抗适体传感器。利用二硫化钼自身的还原性成功合成了金纳米颗粒功能化二硫化钼(AuNPs@MoS2)纳米复合材料,并通过Au-S键将ATP核酸适体组装到AuNPs@MoS2修饰电极表面。当核酸适体与ATP结合后,其构型发生变化,将会阻碍电化学信号分子K3Fe(CN)6和K4Fe(CN)6与修饰电极间的电子传递,使该适体传感器的电阻变大。在最优条件下,该传感器检测ATP的线性范围为10nmol/L~1mmol/L,检出限为1nmol/L,并能很好地区分ATP与CTP、GTP和UTP,表明该传感器具有较高的检测灵敏度和良好的特异性。该传感器的成功构建,为其他生物分子的检测提供了新的思路。     

四环素核酸适配体电化学生物传感器的研制

农产品抗生素残留是目前动物性食品安全中的突出问题。四环素的简便、快速检测方法是食品安全控制中十分重要的技术。本研究利用等温滴定量热法筛选到的四环素核酸适配体做识别分子制作生物传感器,用电化学方法研究了该生物传感器检测四环素的电化学行为。结果:等温滴定量热法筛选出一条对四环素有高亲和力的适配体,解离平衡常数Kd=51.8μmol/L。差分脉冲伏安分析,在5.0⁵.0×103μg/L浓度范围内,峰电流值的变化△Ip与四环素浓度的对数呈现良好的线性关系,相关系数R2=0.987 6,检测限为1.0μg/L,反应时间为15min。该检测限明显低于目前国家限定的四环素残留量(6.0×102μg/L),也低于目前其他报道的四环素适配体传感器的检测限。     

氧化石墨烯生物传感器应用研究进展

氧化石墨烯是石墨烯的衍生物,因其比表面积大、生物相容性较好、光学性质优良和活性位点丰富,在生物传感器方面具有广阔的应用前景。本文综述了近年来氧化石墨烯在荧光生物传感器、SPR生物传感器、SERS生物传感器、电化学生物传感器及比色生物传感器中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。     

基于G四联体的检测汞和铅的适配体传感器

汞和铅污染对人体健康和生态环境造成严重危害.基于汞离子和铅离子诱导G四联体构型改变,建立了一种简单、快速、灵敏的传感器以定量检测汞和铅.通过优化荧光染料浓度、反应时间进一步优化体系检测灵敏度.在最佳实验条件下,适配体对Hg~(2+)的检出限为1.57μM,荧光信号比与Hg~(2+)浓度在0.5～4.0μM范围内呈现良好的线性关系,回归方程为F_0/F=0.56+0.51C_(Hg),相关系数R=0.9975;适配体对Pb~(2+)的检出限为0.51μM,荧光信号比与Pb~(2+)浓度在0.5～4.0μM范围内呈现良好的线性关系,回归方程为F_0/F=-3.37+9.00C_(Pb),相关系数R=0.9976.在自来水的Hg~(2+)和Pb~(2+)加标回收实验中,回收率分别在87.3%～104.5%和88.1%～94.2%.该荧光传感器设计简单方便,且具有较高灵敏度和选择性,为Hg~(2+)和Pb~(2+)的快速检测提供了一种新思路和新方法.     

氧化锆/聚亚甲基蓝修饰电极检测CaMV35S启动子基因

制备了基于氧化锆(ZrO_2)/聚亚甲基蓝(PMB)修饰电极的无标记DNA传感器,用于转基因植物CaMV35S启动子基因的检测。探针DNA(ssDNA)通过ZrO_2和DNA的磷酸基的相互作用修饰到电极表面,以PMB氧化峰的示差脉冲伏安响应为检测信号,传感器和完全互补的DNA片段杂交后,PMB的氧化峰电流明显降低,当和完全不匹配的DNA片段杂交时,峰电流无明显变化。对于完全互补的DNA片段,在2.0×10~(-12)~2.0×10~(-8) mol/L浓度范围内峰电流的变化值和浓度的对数成良好的线性关系,检测限为4.1×10~(-13) mol/L(S/N=3)。所制备的传感器具有良好的稳定性、再生性和重现性,用于样品检测,结果令人满意。     

富T-DNA-纳米氧化石墨烯荧光探针检测乳制品中的三聚氰胺

为了检测乳制品中的三聚氰胺,使用T-DNA-纳米氧化石墨烯荧光探针的方法。该方法灵敏度高,选择性好,检出浓度范围为50～1 000 nM,回收率76%～119%。该方法也可用于其他食品中三聚氰胺的测定。     

离子液体-石墨烯修饰碳纤维微电极电化学性能研究

本实验制备了离子液体-石墨烯修饰碳纤维微电极,采用循环伏安法和差分脉冲伏安法测定多巴胺(DA)在该修饰电极上的电化学行为。实验结果显示,修饰后电极的稳定性和重现性明显增加,DA在修饰电极上的氧化过程受扩散控制。在5×10-7-1×10-4mol/L浓度范围内,DA在修饰电极上的氧化峰电流与其浓度呈现良好的线性关系。     

化学修饰电极对乙基麦芽酚的测定

通过循环伏安法将氧化石墨烯和L-谷氨酸混合液修饰在玻碳电极表面,制备了聚L-谷氨酸/石墨烯修饰电极。通过循环伏安法及差分脉冲伏安法,研究乙基麦芽酚的电化学性质。实验结果表明:最佳条件下,乙基麦芽酚分别在0.951 V和0.852 V处出现氧化峰。其浓度分别在6.00×10-6～1.00×10-4 mol/L及4.00×10-6～4.00×10-4 mol/L范围内呈现良好的线性关系,检出限为4.0×10-7 mol/L。用于检测食品中的乙基麦芽酚,结果满意。     

基于DNA杂交耦合的仿生嗅觉传感器研究

基于DNA杂交耦合技术,研究以嗅觉受体蛋白作为敏感材料,利用声表面波(surface acoustic wave,SAW)器件检测敏感材料对特异性气味分子的响应特性,开发了1种新型仿生嗅觉受体传感器。首先,采用分子克隆技术获得嗅觉受体蛋白;其次,利用一对序列互补的DNA单链分别共价连接到嗅觉受体蛋白和SAW器件的敏感区域;最后,基于互补单链DNA杂交的原理将嗅觉受体蛋白与SAW器件相耦合,并检测传感器对不同气味分子的响应。结果表明,该传感器可以特异性地识别嗅觉受体蛋白的天然配体,而对其他被检测的气味分子没有明显的响应。由于采用了DNA杂交耦合技术固定嗅觉受体蛋白,与直接涂覆嗅觉受体蛋白的耦合方法相比,传感器的灵敏度提高了大约1.5倍。这些结果说明DNA杂交耦合技术可以有效提高嗅觉受体传感器的性能。