苯丙氨酸添加下酪蛋白类蛋白反应修饰物的抗氧化性质

采用木瓜蛋白酶水解酪蛋白制备水解度为9．6％、DPPH·清除率为38．7％的水解物,添加苯丙氨酸于水解物并利用响应面法优化木瓜蛋白酶催化的类蛋白反应条件。在反应时间固定为5h下得到适宜的条件为：温度30℃、底物浓度50％（w／v）、酶添加量3kU／g蛋白质、氨基酸添加量0．74mol／mol水解物游离氨基。此条件下分别制备出5个修饰产物．以不添加苯丙氨酸的修饰产物或水解物和苯丙氨酸混合物为对照,评价它们的抗氧化活性。结果表明．与酪蛋白水解物或混合物或不添加苯丙氨酸的修饰产物相比,添加苯丙氨酸的修饰产物的DPPH·清除能力、还原能力和．OH清除能力显著提高;但是抗氧化性质与所采用的氨基酸添加量、反应时间之间的关系不显著。     

酪蛋白抗氧化肽的胃肠消化稳定性研究

目的:研究酪蛋白抗氧化肽的活性在模拟胃肠消化过程中的稳定性。方法:采用脱脂乳粉为原料提取酪蛋白,经酶解,初步分离得到酪蛋白抗氧化肽。以氧自由基清除能力(ORAC)和2,2′-联氮-双-(3-乙基苯并噻错啉-6-磺酸)(ABTS)自由基清除率为抗氧化指标,采取单因素试验,体外模拟胃肠消化模型研究酪蛋白抗氧化肽的胃肠消化稳定性。结果:酪蛋白抗氧化肽经胃蛋白酶消化后其抗氧化活性显著降低,而在随后的模拟肠消化中抗氧化活性逐渐回升至消化前的水平。在模拟胃消化阶段,胃液pH对于酪蛋白抗氧化肽的抗氧化活性没有显著影响,酶与底物比(E/S)越小,酪蛋白抗氧化肽活性保留得越多;在模拟肠消化阶段,底物浓度越大,其活性恢复得越缓慢。结论:酪蛋白抗氧化肽在模拟胃肠消化过程中的稳定性研究,为日常膳食中生物活性肽的合理搭配提供了理论依据。     

酪蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

采用凝乳酶对牛乳酪蛋白酶解,以水解液对DPPH的清除率为指标,进行了酶解工艺优化。酶解液经超滤,Sephadex G-15凝胶层析柱和DEAE-52离子交换层析分离,得到了初步纯化。     

毛细管区带电泳测定酪蛋白磷酸肽方法的研究

用毛细管区带电泳(CZE)对酪蛋白磷酸肽(CPP)进行了分离和测定。研究出的适宜电泳操作条件为:工作电压30KV、柱温25℃、毛细管长度50cm、内径70μm、进样量5sec(气压进样)、紫外检测波长200nm、缓冲液pH值9.2测定不同N/P样品的CPP含量分别为42.2％、50.0％、51.0％。     

酪蛋白水解肽对家兔细胞因子的影响

为了探索酪蛋白水解肽对家兔血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的影响,采用胰蛋白酶水解得到酪蛋白水解物溶液,经超滤后得酪蛋白水解肽。将所得水解多肽以3种方式(口服、腹腔注射、耳静脉注射)对家兔给药,分别在给药3、2、2h后,用ELISA试剂盒测定血清中IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-1ra、IL-4、IL-10、TGF-β细胞因子的浓度。结果表明,各种作用方式IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β在家兔体内的含量都明显上升,但腹腔注射酪蛋白水解多肽较其他方式作用明显,而IL-1β、IL-1ra、IL-12、IFN-γ的含量降低,最明显的作用方式为腹腔注射,说明酪蛋白水解肽通过肠黏膜系统对细胞因子网络起着重要的调节作用。从给药途径看,腹腔注射的作用效果最为显著,其次是静脉注射,口服灌胃虽达到显著水平,但变化相对较小。说明酪蛋白水解肽主要是通过肠黏膜发挥作用,可通过制备肠溶性保健食品调节人体亚健康,同时为营养组学得研究奠定基础。     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源.通过单因素和响应面回归分析.得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2.酶底比为2%(w/w),温度为50℃.优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC50为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能.高效液相排阻色谱(HPSEC)分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽.     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2,酶底比为2%（w/w）,温度为50℃。优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC₅₀为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能。高效液相排阻色谱（HPSEC）分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽。      

不同分子量水牛乳酪蛋白酶解肽抗氧化活性的研究

通过超滤分离得到不同分子量范围的水牛乳酪蛋白酶解肽组分,对比不同组分的抗氧化活性,结果表明:分子量范围小于1 ku的组分,其DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子清除能力以及还原能力均高于分子量范围在大于1 ku(1~3 ku)的组分,且二者均显著高于(P0.05)酶解前的底物酪蛋白。     

超声波辅助酶法制备大豆蛋白抗氧化肽的研究

采用超声波辅助木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的方法制备抗氧化肽。结果表明,大豆蛋白的最佳水解条件如下:90℃预处理15min,pH6.5,[E]/[S]为7%,超声波处理30min,65℃水解3h,水解度可达19.2%。大豆蛋白肽抗氧化性的高低和水解度的大小没有直接的线性关系,采用此法制备大豆蛋白抗氧化肽的效果较好,具有良好的应用前景。     

高活性抗氧化肽的体外胃肠耐受性研究

研究了高活性抗氧化肽在体外模拟胃肠消化吸收过程中的耐受性。以6条抗氧化合成肽为研究对象,采用体外胃肠消化模型和Caco-2细胞单层模型,模拟其胃肠消化吸收过程,分别测定抗氧化肽在胃肠消化中的降解与转化、含量变化及以TEAC活性和ORAC活性为指标的抗氧化活性变化。结果表明,6条抗氧化肽均耐受胃消化,不耐受肠的消化,但是经胃肠消化吸收后仍具有很强的抗氧化活性,分别高于阳性对照还原型GSH和Vc;YPWY、GWEW和YEW在肠阶段发生C端氨基酸降解,生成短肽YPW、GWE和YE,而且可以完整地透过Caco-2细胞。这项研究为这些抗氧化肽作为功能配料进行开发利用提供了理论依据。     

山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究

以自由基清除能力、金属离子螯合能力和抗脂质过氧化能力为指标,采用均匀试验研究山羊乳酪蛋白酶解物的制备及其体外抗氧化活性,并且比较自由基清除能力的方法。结果表明：山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺为在60g/kg的底物浓度下,中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为4000U/g和250U/g,45℃、pH7.5条件下酶解24h。山羊乳酪蛋白经酶解后其体外抗氧化活性显著增强。山羊乳酪蛋白酶解物 ·OH清除率的EC50值是其蛋白的3.59倍,ABTS＋ ·的清除能力是其蛋白的158.72倍,螯合Fe2＋的能力是其蛋白的5.44倍;在亚油酸体系中抗脂质过氧化能力强于TBHQ,与VE相当。清除 ·OH、DPPH自由基、O2－ ·和ABTS＋ ·的方法不能相互替代。     

牛乳酪蛋白抗氧化乳基料的制备及其分离纯化

为制备具有低过敏性和抗氧化作用的牛乳酪蛋白活性肽乳基料,以水解度和·OH清除率为指标,先后采用大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化酪蛋白酶解物。结果表明：胰蛋白酶和中性蛋白酶组合酶解牛乳蛋白6h,其产物具有较高的水解度(36.80%)和较好的抗氧化活性,·OH清除率的半抑制浓度(IC50)值为3.12mg/mL;酶解物通过LS106大孔吸附树脂分离、纯化后,体积分数为75%的乙醇洗脱液具有较高的抗氧化活性,其·OH清除率的IC50值为0.14mg/mL;体积分数75%的乙醇洗脱组分经凝胶过滤色谱分离、纯化后,得到4个不同相对分子质量肽段,其中抗氧化活性较强肽段的相对分子质量为355.38～854.89,其·OH清除率的IC50值为0.09219mg/mL,与酶解物相比其抗氧化活性扩大33.84倍;相对分子质量小于3238.05的多肽占纯化后多肽总量的60.32%,30.09%多肽是由2～8个氨基酸组成的寡肽。牛乳酪蛋白经复合酶酶解后其抗氧化活性明显提高,过敏性明显降低,喷雾干燥后可以直接制备乳基料。     

具有抗疲劳作用酪蛋白多肽水解条件的优化

用胃蛋白酶水解酪蛋白制备具有抗疲劳作用的多肽。以小鼠负重游泳时间为指标,对底物质量浓度、酶底比、酶解pH值和酶解温度等酶解参数进行优化,以获得具有最佳抗疲劳作用的酪蛋白水解物,并用毛细管电泳对各条件下水解产物进行肽谱分析。结果表明：在底物质量浓度5g/100mL、酶与底物比1:30、pH 2.5,酶解温度43℃的条件下胃蛋白酶水解酪蛋白所得水解产物,以0.048、0.24、2.4g/(kg ·d) 3个剂量灌胃小鼠28d后负重游泳,其耐受时间与同剂量的其他水解产物灌胃组相比均有显著差异(P＜0.05)。通过毛细管电泳进行肽谱分析表明,该水解条件下所得水解产物与其他各水解条件的产物相比具有明显差异,最大峰出现时间与其他各组也不同,同时在17～18min时出现其他各组未出现的峰值。     

酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究

采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件。试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p>0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%。试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%。     

具有免疫调节作用的酪蛋白水解产物制备条件的确定

以酪蛋白为原料,利用酶解法制备具有免疫调节作用的水解产物。用MTT 法测定不同水解条件下胰蛋白酶水解酪蛋白的水解产物对小鼠脾脏细胞免疫刺激指数,并以免疫刺激指数作为指标,确定出最佳的水解条件。结果表明,酪蛋白在不同水解条件下的水解产物,用1640 培养液配成浓度为10μg/ml,采用MTT 法测定小鼠脾脏淋巴细胞免疫刺激指数最大值为2.77,其水解条件为底物浓度4%、酶与底物比为1:90。     

黄鳝鱼骨多肽制备及其抗氧化活性

以黄鳝鱼骨为原料,选用不同蛋白酶对其进行酶解,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,得到了具有较高抗氧化活性的黄鳝鱼骨多肽。通过单因素试验和响应面分析优化得到酶解黄鳝鱼骨制备多肽的最佳工艺条件为：选用木瓜蛋白酶,底物质量浓度40 mg/mL、酶添加量8 000 U/g、酶解温度59.2 ℃、pH 5.8、酶解时间4.1 h,在此条件下得到的黄鳝鱼骨多肽DPPH自由基清除率为90.85%。通过不同的体外抗氧化指标对黄鳝鱼骨多肽的抗氧化活性进行测定,结果发现黄鳝鱼骨多肽具有良好的抗氧化活性,随着多肽质量浓度的升高,其抗氧化活性不断增强,表现出良好的量效关系。     

2种蛋白酶酶解曲拉干酪素条件优化及抗氧化性比较

以曲拉干酪素为原料、水解度为指标,在酶解时间、酶解温度、pH值、曲拉干酪素质量浓度、酶添加量单因素试验基础上,采用响应面试验对碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解工艺条件进行优化,并对2 种酶解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除率,Fe2＋、Cu2＋螯合能力和还原力等抗氧化性指标进行比较。结果表明,碱性蛋白酶和胰蛋白酶分别在酶解时间3.8、2.5 h,酶解温度49.8、47.8 ℃,曲拉干酪素质量浓度60、35 g/L,pH 8.5、7.5,酶添加量140、2 900 U/g时水解度最大,为24.25%和13.57%。碱性蛋白酶解液超氧阴离子自由基清除率、Fe2＋螯合能力显著低于胰蛋白酶解液（P＜0.01）;羟自由基清除能力高于胰蛋白酶解液（P＞0.05）;2 种蛋白酶酶解液在酶解液质量浓度1～5 mg/mL时,Cu2＋螯合能力、DPPH自由基清除率和还原力随质量浓度均呈上升趋势,Cu2＋螯合能力低于Fe2＋螯合能力（P＞0.05）,DPPH自由基清除率和还原力二者差异显著（P＜0.01）。2 种蛋白酶对酶解物抗氧化性指标影响不同,碱性蛋白酶酶解物抗氧化性相对较优。