荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中猪源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法 本研究以猪线粒体12S rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立猪源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。     

聚合酶链式反应快速检测畜肉食品中鸭源性成分

目的：建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法：以鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ ）基因序列为靶位点设计引物,进行聚合酶链式反应扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉,包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种进行特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液,对鸭肉DNA进行梯度稀释,检测灵敏度。结果：该方法能够有效的对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高（0.1 μg/kg）,且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响,可以快速、准确检测畜肉食品中掺杂的鸭源性成分。     

实时荧光PCR法鉴定野生食用菌中白牛肝菌成分

目的建立野生食用菌中白牛肝菌(Boletus bainiugan Dentinger)成分的荧光PCR检测方法。方法根据白牛肝菌的内源转录间隔区(internally transcribed spacer,ITS)基因序列设计白牛肝菌物种的特异性引物和探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、稳定性检测、灵敏度检测和实际应用检测。结果通过对供试的24种食用菌、动、植物材料进行检测,只有白牛肝菌出现特异性扩增,说明方法具有物种特异性;方法对白牛肝菌成分的检测灵敏度为1×10~(-4) ng/μL白牛肝菌DNA或0.1%(m/m)白牛肝菌粉。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于野生食用菌和食品中白牛肝菌的成分检测。     

微滴数字PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的利用微滴数字PCR技术,建立鸭源性成分的快速、特异、灵敏检测方法。方法根据鸭线粒体基因全序列设计的引物及探针,利用微滴数字PCR进行扩增,建立鸭源性成分检测方法;以市场中常见畜禽肉为参考物种作微滴数字PCR特异性检测;以羊肉为干扰物观察微滴数字PCR的抗干扰性;将鸭肉DNA进行梯度稀释,对方法灵敏度进行检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行检测,特异性强,灵敏度高,并且其他物种成分的存在对方法灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以实现畜肉食品中的鸭源性成分检测。     

实时荧光PCR技术快速检测莲蓉制品中芸豆成分

目的:建立基于实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测莲蓉制品中芸豆成分的方法。方法:以芸豆pvsbe2基因高度保守区域设计特异性引物和探针,通过对莲子及其他富含淀粉类植物DNA进行扩增,以验证方法的特异性;以1 ng/μL的芸豆DNA进行系列稀释,确定此法检测灵敏度;对含有1%芸豆与莲子的混合样品的DNA模板进行10倍梯度稀释,确定重量检测灵敏度;并应用此方法和PCR方法对市场样品进行了检测,对建立的荧光PCR方法进行验证。结果:该检测方法具有高度特异性,与莲子及其他高淀粉植物无交叉反应;DNA质量浓度的检测灵敏度达到1 pg/μL,重量检测灵敏度可达0.01%。含芸豆成分的莲蓉月饼扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:本研究建立的实时荧光PCR方法具有特异性强、灵敏度高、快速简便的特点,更适合莲蓉制品中芸豆成分的快速检测。     

菠萝成分的实时荧光PCR检测方法的建立

目的本文研究建立食品中菠萝成分的实时荧光PCR检测方法。方法根据菠萝rbcL基因设计菠萝物种特异性检测引物和荧光探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、灵敏度测试和实际应用检测。结果通过对供试的58种动植物材料进行检测,只有菠萝出现特异性扩增,其他物种材料无扩增;对不同浓度菠萝DNA样品和不同含量的菠萝粉样品进行灵敏度测试,该检测方法对菠萝成分的检测灵敏度分别为0.01 ng/μL菠萝DNA和0.1%菠萝粉;对市场销售的实际样品进行检测,能够满足于检测需求。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于食品中菠萝成分检测。     

PCR法检测鱼及其制品中的鱼源性成分

目的:建立一种快速、特异、灵敏的鱼源性成分聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法:根据鱼线粒体基因组12S r RNA中的保守序列设计鱼源性特异性引物,进行PCR扩增,建立鱼源性成分检测方法;对24种鱼及鸡、牛、羊、猪、鸭、虾6种常见的易混于鱼制品的动物源性成分进行特异性检测;将草鱼肉混入其他动物肉中,混合均匀后提取DNA进行PCR扩增,确定肉样水平的检测灵敏度;将草鱼DNA混入其他动物DNA中,以混合后的DNA为模板进行PCR扩增,确定DNA水平的检测灵敏度。结果:该方法能特异性的对鱼源性成分进行快速检测,检测灵敏度达0.5%。结论:该方法能对食品中是否含有鱼源性成分进行初筛,到达快速检测的目的,对防止食品掺假、维护消费者利益、规范市场秩序有重要意义。     

PCR方法快速检测食品中幽门螺杆菌

目的：建立一种快速、特异、灵敏的幽门螺杆菌检测方法。方法：以尿素酶基因序列为靶位点设计引物,进行PCR 扩增,建立幽门螺杆菌PCR 检测方法。以食品中常见致病菌作参考菌株作特异性检测,分别对幽门螺杆菌菌悬液及鲜牛奶中幽门螺杆菌菌悬液进行梯度稀释,提取DNA 后做灵敏度检测。结果：PCR 方法能够有效对幽门螺杆菌进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(8CFU/mL)。结论：该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中污染的幽门螺杆菌。     

荞麦源性成分实时荧光PCR检测方法的建立

为检测荞麦类食品及原料中的荞麦源性成分,根据荞麦品种DW-1核酸序列信息(KY945277.1)设计了荞麦品种特异性引物;以苦荞和甜荞品种基因组为模板,建立了荞麦源性成分的实时荧光PCR(qPCR)的检测方法,并对购自市场的多个粮食产品进行检测,检测结果与商品标识相符方法特异性强、灵敏度高,为食品中荞麦源性成分的检测提供了新思路。     

A novel PCR method for quantification of buckwheat by using a unique internal standard material

A novel quantitative and specific method for detection of buckwheat, a known food allergen, in diverse food materials was developed by using a unique internal standard to compensate for the variability in DNA extraction and amplification efficiencies. The method was based on a real-time PCR targeting the internal transcribed spacer region of Fagopyrum spp. and was designed to detect both cultivated and wild buckwheat, because wild buckwheat might be potentially allergenic. As the internal standard material, ground seeds of statice (Limonium sinuatum) were added to food samples prior to DNA extraction, and the amount of statice DNA measured by real-time PCR was used to standardize the buckwheat content. Statice, an ornamental plant, was chosen as the internal standard material because it was readily available and was inferred to be least likely to be commingled in foods. The specificity of the PCR system was tested against commonly used food materials of plant origin. Quantitative results expressed in buckwheat protein concentrations (mean +/- standard deviation) for various food samples prepared to contain 10 ppm (wt/wt) of buckwheat flour (corresponding to 1.2-microg/g [ppm] buckwheat protein) ranged from 0.7 +/- 0.2 (rice) to 0.9 +/- 0.4 (wheat) and for 100-ppm (wt/wt) samples (12-microg/g [ppm] buckwheat protein) from 7.7 +/- 1.0 (pepper) to 9.8 +/- 0.5 (wheat) microg/g (ppm). The method's accuracy, sensitivity, and specificity were considered sufficient for detection of buckwheat contamination at the level required for compliance with the Japanese Food Allergen Labeling Regulation.     

In vitro DNA damage protection and anti‐inflammatory effects of Tartary buckwheats (Fagopyrum tataricum L. Gaertn) fermented by filamentous fungi

The present work was designed to investigate the phenolic profiles, DNA damage protection and anti‐inflammatory effects of Tartary buckwheat fermented by Rhizopus oryzae 40469, Rhizopus oryzae 40503 and Rhizopus oligosporus 3152. Six phenolic compounds were characterised and quantified. Regardless of fermentation, rutin was the dominant phenolic substance in Tartary buckwheat. Fermentation significantly enhanced total phenolic and flavonoid contents, as well as DNA scission protection. Rhizopus oryzae 40469‐fermented sample had the highest content of phenolics, while R. oligosporus 3152‐fermented sample had the strongest inhibitory effect on DNA scission. Tartary buckwheat, regardless of fermentation, inhibited nitric oxide (NO) production and inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA levels in LPS‐induced RAW 264.7 cells. Moreover, the sample fermented with R. oryzae 40503 had the strongest inhibitory activity. Those results indicated that fermented Tartary buckwheat has potential applications as a novel nutraceutical or functional food for preventing DNA damage‐induced disease and inflammation.     

可可粉中常见谷物成分的PCR检测技术研究

实验利用PCR方法检测可能掺入可可粉中的谷物成分。通过比较6种可可粉DNA的提取方法,建立了一种可靠、快速的方法,提出的DNA能够用于后续PCR反应。同时设计并验证了谷物通用引物的特异性和通用性,包括水稻、小麦、玉米、高粱米、荞麦、燕麦等常见谷物可通过1次PCR扩增筛选出来。模拟可可粉样品中谷物成分检出限达到0.1%。使用该方法检测了市场上购买的14个样品,均未检出常见谷物成分。为可可粉中可能添加的外源性物种检测提供了快速有效检测的方法和思路。     

不同熟化方式下荞麦蛋白质含量及氨基酸组成的比较分析

为提高荞麦蛋白营养与氨基酸的综合利用价值,采用3种熟化方式处理甜荞,在测定熟化前后荞麦蛋白等电点及电泳分析的基础上,采用考马斯亮蓝法对熟化前后荞麦蛋白进行分析,采用茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪法对氨基酸组成进行营养价值评价。结果表明,未加工荞麦蛋白质量分数为12.30%,蒸制后荞麦蛋白质量分数为11.5%,炒制后荞麦蛋白质量分数9.70%,煮制后荞麦蛋白质量分数最高,为14.80%。不同熟化方式的氨基酸总量差异不大,3种熟化方式中均含有人体必需的7种氨基酸,炒制后氨基酸的总量最高,为10.30 g/100 g,煮制后最低,含量为9.43 g/100 g;蒸制、炒制后除Tyr外,剩余氨基酸含量均升高;煮制后,Thr、Ser、Gly、Ala及Lle含量均没有发生变化,Val、Met、Tyr、Lys、His、及Arg含量均降低。熟化方式对荞麦蛋白及氨基酸含量影响的研究可为荞麦应用提供理论基础。     

碳酸钠和盐酸法提取荞麦壳中水不可溶性膳食纤维的对比研究

为提高荞麦壳利用率并且探究最佳的提取条件及增加其利用形式,本文以荞麦壳为原料,分别采用碳酸钠浸泡法和盐酸酸提法对荞麦壳中的水不可溶性膳食纤维(IDF)进行提取。结果表明,碳酸钠提取荞麦壳IDF的最佳工艺为碱解温度60 ℃,Na₂CO₃质量分数为10%,碱解时间40 min,料液比为1:13 g/mL,荞麦壳IDF的得率为82.75%,膨胀力为6.87 mL/g,持水力为379.18%。HCl酸提法提取荞麦壳IDF的最佳工艺条件为pH为2,酸浸温度为60 ℃,酸提时间为100 min,料液比为1:15 g/mL。荞麦壳IDF的得率为86.00%,膨胀力5.92 mL/g,持水力为365.31%。在最佳工艺条件下,盐酸法提取的IDF得率略高于碳酸钠法,但碳酸钠法提取的IDF具有更好的膨胀力和持水力等水合性能。     

基于图像处理的苦荞品种判别

为了建立不同品种苦荞种子的正确分类方法,以11个不同品种的苦荞种子为研究材料,使用扫描仪获取种子彩色图像,通过图像处理软件提取每个种子的特征变量28个,建立了一个包含11个品种440个苦荞种子,12 320个数据的矩阵。通过逐步法筛选有效特征变量,并利用有效变量构建判别模型。结果表明,筛选出的18个变量中,颜色变量为苦荞品种判别的主要变量。颜色变量和形态变量相结合,构建的贝叶斯判别模型,回判正确率达到了96.8%,交互验证正确率达到了94.7%。利用计算机图像处理技术和现代统计方法,能有效地对苦荞种子的颜色与形态特征进行精确量化和快速分析,可作为不同品种苦荞种子分类鉴别的一种客观,准确、有效的方法。     

3种干燥方法对荞麦干燥特性及品质的影响

以振动远红外干燥、烘箱干燥、薄层干燥3种干燥方法荞麦进行干燥,对比3种干燥方法对荞麦干燥特性及干燥后品质产生的影响。结果表明,在干燥特性方面,振动远红外干燥达到安全水分时间最短,干燥速率最大;薄层干燥所需时间最长,干燥速率最小。在品质分析方面,振动远红外干燥工艺对荞麦的外观品质影响较小,干燥后的荞麦面积收缩率最小,同时蛋白质含量最高(17.02%),但发芽率相较薄层干燥工艺略低;经烘箱干燥后的荞麦样品蛋白质含量最低;其发芽率也最低。薄层干燥后的荞麦面积收缩率最大。在实际生产中,可根据具体情况选择适合的干燥方法。     

苦荞芦丁水解酶序列鉴定及在昆虫系统中的表达

为获得苦荞麦中芦丁水解酶基因（Fagopyrum tartaricum rutin-hydrolyzing enzyme gene,FtRHE）,以云荞1号苦荞种子为材料,制备获得天然芦丁水解酶（rutin-hydrolyzing enzyme,RHE）,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定天然RHE序列信息,结合转录组数据,筛选苦荞RHE基因FtRHE。结果显示,纯化的天然RHE,分子质量约为62?kDa,肽质量指纹图谱证明其为一种β-葡萄糖苷酶,质荷比为914.428?6的肽段FSISWSR为其特征肽段。在苦荞种子转录组数据中筛选获得FtRHE基因序列基础上,通过反转录聚合酶链式反应获得了苦荞FtRHE基因。FtRHE开放阅读框由1?539?个碱基组成,编码512 个氨基酸,1～29位氨基酸为其信号肽。多重序列比对发现RHE与不同物种来源的β-葡萄糖苷酶氨基酸保守性不高,同源性普遍集中在54%～62%之间。构建Bacmid-FtRHE杆粒,转染昆虫细胞Sf9后,成功表达了具有较高活性的重组RHE。结果表明,获得的FtRHE即为苦荞中RHE基因。该研究为高含量芦丁及无苦涩味荞麦育种以及由芦丁生物转化生产槲皮素等的应用提供了理论支持。     

荞麦面包保水性影响因素研究

以陕北甜荞为原料生产荞麦面包,以荞麦面包贮存过程中失水量为主要指标,研究了影响荞麦面包保水性的因素。结果表明,荞麦粉添加量、面团加水量、改良剂的用量以及发酵方法和焙烤湿度等因素对荞麦面包保水性有不同程度的影响,而焙烤方法对荞麦面包保水性的影响较小。     

荞麦的热分析研究

用差热-热重分析(TG-DTA)对荞麦进行热分析研究,目的在于研究加热对荞麦的影响。结果表明,荞麦开始分解的温度为231.23℃,荞麦皮开始分解的温度为267.34℃,荞麦粉开始分解的温度为281.77℃。荞麦在静态空气气氛下的热分析实验条件为:升温速率为15℃/min,样品质量1 mg～2 mg;加工、炮制温度应控制在250℃以下。