副溶血性弧菌微滴数字PCR定量方法的建立

目的:采用微滴式数字PCR技术(Droplet digital PCR,ddPCR),建立副溶血性弧菌快速定量检测。方法:以副溶血性弧菌TLH基因为靶基因,验证确定ddPCR方法的特异性及定量检测的线性范围,以常检出副溶血性弧菌的海产品鳕鱼为样品进行阳性添加,确定方法的可行性。结果:本试验中采用ddPCR检测得到副溶血性弧菌特异性好,有效基因组DNA浓度范围为2~19440拷贝/20μL,分析得菌悬液浓度为50~4.86×105 CFU/mL,与3M测试片所得菌悬液浓度无显著性差异(p>0.05),与荧光PCR相比,可以进行更低浓度检测且能准确定量。结论:副溶血性弧菌ddPCR定量检测技术特异性良好、灵敏度高、结果准确,具有实际应用价值。     

纳米免疫磁分离-实时荧光聚合酶链式反应快速检测海产品中副溶血性弧菌

采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术,结合实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法,建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为103 CFU/mL水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下,该方法检测灵敏度达到140 CFU/mL;通过134 株副溶血性弧菌和74 株非目标菌的测试,实时荧光PCR技术具有良好的特异性;在食品基质添加实验中,其检测限为2 CFU/25 g样品,增菌时间缩短到8 h。     

茶多酚对泥蚶中副溶血性弧菌的抑制效果

为了降低食用泥蚶引起的副溶血性弧菌食源性疾病的风险,研究了天然抑菌剂茶多酚对泥蚶中副溶血性弧菌的抑制作用并做出感官评价。副溶血性弧菌的定量采用三管最大可能值法(MPN法)。研究结果表明,茶多酚对副溶血性弧菌的最低抑制浓度(MIC)为0.5 g/L;带菌泥蚶经0.5 g/L的茶多酚处理后于0℃,5℃和10℃下贮藏60h,副溶血性弧菌数量分别下降了2.75 Log10 MPN/g,2.59 Log10 MPN/g和2.15 Log10 MPN/g,杀菌率均在99%以上。经感官评定小组评定,茶多酚浓度为0.5 g/L时,对泥蚶的色泽、气味、口感等感官特性不产生负面影响。茶多酚是一种理想的天然抑菌剂。     

戊糖片球菌的抑菌与共凝聚能力及其对水体中副溶血性弧菌的净化效应

研究了7株戊糖片球菌对副溶血性弧菌的抑菌特性和共凝聚能力,探讨了不同抑菌和凝聚特性的戊糖片球菌的细胞形态特征及其对水体中副溶血性弧菌的影响。结果表明7株戊糖片球菌对副溶血性弧菌的抑制作用是同p H值乳酸的1.1~1.3倍,抑菌活性对过氧化氢酶、蛋白酶以及加热处理不敏感。戊糖片球菌对副溶血性弧菌的2 h共凝聚率在14.8~37.6%之间,具有显著菌株差异性,其中菌株F28-8达到37.6%,显著高于其它菌株(P0.01)。扫描电镜结果显示菌株F28-8具有独特的细胞表面结构和粘连模式。戊糖片球菌对水体中副溶血性弧菌具有促凝聚和减菌作用,副溶血性弧菌悬液经过F28-8处理60 h,上层悬液中的可培养细胞浓度比未经处理的对照组降低了3.1 Log10 CFU/m L,显著高于低凝聚性菌株H13(P0.01),而凝聚物中可培养细胞比对照组降低了1.6 Log10CFU/m L,与H13处理无显著差异(P0.05)。     

反式肉桂醛对副溶血性弧菌的抑制作用

本研究通过测定TC对副溶血性弧菌的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)评价其抑菌效果;随后通过测定TC对副溶血性弧菌生长曲线、生长动力模型、细胞膜完整性及细胞形态的影响探究其可能的抑菌机理;最后,构建副溶血型弧菌污染的鲜虾模型,评价TC对鲜虾中副溶血性弧菌的控制作用。结果表明,TC对副溶血性弧菌的MIC为50～70μg/mL;TC可降低副溶血性弧菌最大生长速率、延长其生长延滞期;TC可使副溶血性弧菌细胞膜完整性显著降低,并使副溶血性弧菌细胞形态干瘪、皱缩;在鲜虾模型中,体积分数0.4%的TC在1 h(4℃)使鲜虾中的副溶血性弧菌降低至检出限以下。研究结果表明,TC有潜力作为天然的抗菌物质应用于鲜虾及其他海产品中有效控制副溶血性弧菌。     

副溶血性弧菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立

以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)gyr B基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence single primer isothermal amplification,实时荧光SPIA)检测副溶血性弧菌的方法。实时荧光SPIA在40 min反应时间内,对3株副溶血性弧菌和16株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA检测,结果表明除3株副溶血性弧菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌纯培养DNA的灵敏度为8.2 fg/μL,对副溶血性弧菌菌悬液的检测灵敏度为13.5 CFU/m L;对鳕鱼、海蟹、牡蛎和咸鸭蛋等4种模拟样品中副溶血性弧菌的检出限均为14.7 CFU/g。研究结果表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便。     

2008—2010年上海市夏秋季市售海产品中副溶血性弧菌污染监测结果分析

目的 了解上海市夏秋季节市售海产品中副溶血性弧菌的污染水平和特征.方法 2008-2010年5-10月,采用GB/T 4789.7-2008《食品卫生微生物学检验副溶血性孤菌检验》方法,对上海市批发市场、集贸市场、卖场超市和餐饮单位等污染物监测点的市售海产品进行副溶血性弧菌的定性和定量检测.结果 共监测市售海产品941件,副溶血性弧菌总体检出率为13.2％,不同种类、不同监测月份和不同采样地点的海产品,其副溶血性弧菌检出率和样品几何平均浓度总体上差异有统计学意义(P＜0.05).其中,海产虾类副溶血性弧菌检出率(25.0％)和样品几何平均浓度(5.0 MPN/g)显著高于其他类海产品(P＜0.05);8月份海产品副溶血性弧菌检出率(27.4％)和样品几何平均浓度(3.3 MPN/g)显著高于其他监测月份(P＜0.05);集贸市场副溶血性弧菌检出率(28.5％)和批发市场样品几何平均浓度(3.9 MPN/g)显著高于其他采样地点(P＜0.05).结论 上海市市售海产品中副溶血性孤菌的污聚率较高,应进一步开展海产品中副溶血性弧菌的风险监测和评估,并针对副溶血性弧菌污染的高风险环节开展监管.     

一步发酵法酿造桑椹果醋工艺条件

以含有一定酒精的桑椹汁为原料,采用一步发酵法即直接向原料中接种活化的醋酸菌液进行醋酸发酵酿造桑椹果醋,通过单因素试验和正交试验确定其最佳酿造工艺条件。结果表明,最佳酿造工艺条件为：酒精体积分数6%、搅拌转速130r/min、醋酸菌接种量15%(体积分数)。通过比较3 种单一澄清剂对桑椹果醋的澄清效果,结果表明：1% 壳聚糖溶液对桑椹果醋的澄清效果最佳,其最佳添加量为1.6mL/100mL。采用此工艺可以得到澄清透明、呈浅玫瑰红色、具有醋和桑椹复合风味的桑椹果醋。     

响应面法优化黑加仑果醋的发酵条件

采用响应面分析法(RSM)优化黑加仑果醋发酵的工艺条件。在初始酒精体积分数、pH值、装液量、摇床转速4个因素的单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计,通过响应面分析,对黑加仑果醋的发酵工艺条件进行优化。结果表明：黑加仑果醋发酵的最佳工艺条件为：初始酒精体积分数5.7%、pH4.5、装液量97mL/500mL、摇床转速126r/min,在此条件下的验证实验表明,黑加仑果醋的醋酸转化率为96.78%。黑加仑发酵型果醋呈玫瑰红色,果香浓郁,酸爽柔和。     

槐花醋酿制工艺的研究

以槐花为原料,研究了槐花醋的酿制工艺.用一定浓度的食用酒精浸提槐花中的营养成分和功能成分.然后接种醋酸菌进行醋酸发酵.通过单因素试验和正交试验,优选出最佳工艺条件.最佳浸提条件为食用酒精体积分数45%,浸提温度50℃,浸提时间2.5h,料液比110,在此条件下槐花黄酮浸提量达236mg/L.醋酸发酵的最优条件为醋酸菌接种量15%,糖度7%,酒精度8.0..     

香蕉醋固定化发酵过程中主要成分的变化研究

以酒精度4％vol～5％vol的澄清香蕉酒为原料,采用固定化发酵法制备香蕉醋,对香蕉醋发酵过程中主要成分的变化进行分析.结果表明:香蕉醋发酵过程中,随着发酵时间的增加,pH值和酒精度不断降低;总酸呈上升趋势;透光率在发酵前期迅速升高,后期波动变化后趋于稳定;蛋白质、褐变值先下降后趋于稳定;可溶性固形物呈先上升后趋于稳定...     

Ethanol shock changes the fatty acid profile and survival behavior of Vibrio parahaemolyticus in various stress conditions

Vibrio parahaemolyticus 690, a clinical strain, was subjected to ethanol shock in the presence of 5% ethanol for a period of 30 and 60 min. Survival behaviors of the ethanol shocked and control cells of V. parahaemolyticus in the presence of H(2)O(2) (20 ppm), crystal violet (3 ppm), NaCl (20%), and low pH solution (pH 4.4) containing various organic acids including lactic acid, acetic acid, citric acid and tartaric acid (25 mM) were compared. In addition, the effects of ethanol shock on the fatty acid profile and recovery of V. parahaemolyticus on tryptic soy agar (TSA) plus various amounts of NaCl were also investigated. After ethanol shock, it was found that the proportion of vaccenic acid (18:1) increased, while the proportion of palmitic acid (16:0) and ratio of saturated fatty acid to unsaturated fatty acid decreased in cells of V. parahaemolyticus. The recovery of the ethanol-shocked cells on TSA plus 6.0% or 7.5% NaCl was significantly less than the control cells. Furthermore, ethanol shock increased the survival of V. parahaemolyticus in the presence of H(2)O(2), while made the test organism less resistant to crystal violet, high NaCl and organic acids. The degree of decreased acid tolerance observed on the ethanol-shocked cells of test organism varied with the organic acid examined. Finally, ethanol shock for 60 min exhibited either a higher or similar degree of effect on the test organism (depending on the type of stress encountered) than did ethanol shock for 30 min. Data obtained from the present study does provide useful information that is indispensable when control measure of V. parahaemolyticus is to be performed efficiently and adequately.     

不同储存时间对普洱茶有机溶剂萃取物清除自由基活性的影响

本文以半数抑制浓度IC50的大小研究了十种茶叶（不同年份的生普和熟普）有机溶剂萃取物的体外抗氧化活性。结果表明,生茶有机溶剂萃取层清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基的IC50最小分别可达0.339 mg/mL、0.074 mg/mL、1.206 mg/mL,熟茶清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基的IC50最小分别可达0.554 mg/mL、0.164 mg/mL、1.927 mg/mL,生茶的抗氧化能力明显优于熟茶;各种普洱茶对自由基的清除能力主要取决于各萃取液中的多酚和黄酮含量。生茶乙酸乙酯层的茶多酚萃取量最多,在7.33-9.57%之间,正丁醇层的黄酮类物质的萃取量最多在7.08-10.99%之间,熟茶正丁醇层的茶多酚含量和黄酮类物质的含量在个有机溶剂层中均是最高的,分别在3.62-5.73%之间和4.75-5.83%之间,乙酸乙酯层和正丁醇层的萃取化合物具有较多的羟基,具有较强的清除自由基的能力;茶叶的储存时间对各萃取液的抗氧化能力无显著影响。     

树脂法纯化茶多酚的研究

比较了不同树脂对茶多酚的吸附特性，筛选出适合于茶多酚分离纯化的吸附树脂。结果显示，当初始样品的茶多酚纯度为68．5％，供试液的茶多酚含量为10mg／mL，以80％乙醇作为洗脱剂，洗脱速度为0．8mL／min，茶多酚纯度可达95．8％。     

茶多酚水溶液浸提法生产低咖啡碱茶叶的研究

首次采用茶多酚水溶液浸提法脱除鲜茶叶与干茶叶中的咖啡碱,并保留其中的主要功能性成分茶多酚。鲜茶叶最佳浸提条件为:温度100℃,料液比1:10(g/mL),茶多酚水溶液质量体积分数5%,时间5min。此条件下咖啡碱脱除率达80.61%,比传统热水浸提法提高31.25%,且茶多酚无损失。干茶叶最佳浸提条件为:温度100℃,料液比1:20(g/mL),茶多酚水溶液质量体积分数15%,时间7min。此条件下咖啡碱脱除率达81.61%,且处理后的茶叶中茶多酚含量提高90.02%。研究结果表明,针对鲜茶叶和干茶叶原料,茶多酚水溶液浸提法均能有效脱除其咖啡碱,并有效保留或提高茶叶中的茶多酚,比传统热水浸提法有明显优势,是一种生产低咖啡碱茶叶的新方法。     

花椒籽提取物对副溶血弧菌抑菌作用的研究

目的研究花椒籽提取物对副溶血弧菌的抑制效果。方法采用无水乙醇提取花椒籽,采用牛津杯法,比较不同提取条件下花椒籽提取物对副溶血弧菌的抑制作用。结果 100%的花椒籽提取物抑制副溶血弧菌效果最好;最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为12.50 mg/m L。温度升高不利于花椒籽提取物抑菌效果的发挥,适宜温度范围为20~40℃;酸性及中性环境中抑菌效果明显,p H为7.0时,花椒籽提取物抑菌作用最强;紫外照射可使花椒籽提取物菌能力减弱。结论花椒籽提取物对副溶血弧菌有明显抑制效果,抑菌效果随提取条件的改变而改变。     

Characterization of low salinity stress in Vibrio parahaemolyticus

Vibrio parahaemolyticus is a marine foodborne pathogenic bacterium commonly found in seawater or seafood. This bacterium often encounters low salinity stress when the contaminated seafood is washed with fresh water during food processing. This study was conducted to investigate the response of exponential- and stationary-phase cells of V. parahaemolyticus ST550 to lethal or sublethal low salinity. Tolerance to lethal low salinity (0.25% NaCl) was enhanced in V. parahaemolyticus cells in the exponential phase by previous adaptation in sublethal low salinity (0.6% NaCl). Low salinity-adapted cells in the exponential phase were also cross-protected against the challenge of lethal low pH, indifferent to heat, and sensitized to bile, acetic acid, and lactic acid stress. The adapted cells in the stationary phase were significantly protected against heat treatment at 44°C for 10 and 15 min, sensitized to bile and acetic acid treatment, and indifferent to low pH and lactic acid.     

茶树花中茶多酚和茶皂素综合提取技术研究

为了实现对茶树的综合利用,以茶树的花为实验材料,在单因素实验的基础上,采用正交实验方法对茶树花中茶多酚和茶皂素的综合提取工艺进行优化。分析了浸提时间、料液比、浸提温度、乙醇浓度和超声波功率对浸出率的影响。结果表明,乙醇浓度70%,超声波功率350W,浸提温度60℃,浸提时间10min,料液比1∶30g/mL时,茶多酚和茶皂素的综合得率最高,分别达到了28.38%和23.69%。     

毛茶茶多酚提取工艺优化及其对鲜切苹果品质的影响

以茶多酚的含量为指标,利用响应面试验优化毛茶中茶多酚的最佳提取工艺,用茶多酚含量为0、2、4、8 mg/mL的毛茶提取液浸泡鲜切苹果,从ΔE、失重率、硬度、可滴定酸含量、可溶性固形物及感官评定等方面评价其对鲜切苹果的保鲜效果。实验结果表明,毛茶中提取茶多酚的最佳工艺条件为:提取时间65 min,提取温度55℃,超声频率为65 kHz,该条件下实验所得提取物茶多酚的含量为19.312 mg/g。毛茶茶多酚提取物处理鲜切苹果结果表明,毛茶茶多酚提取物能延缓鲜切苹果失重率及硬度的下降,还能延缓鲜切苹果中可滴定酸及可溶性固形物的含量下降,并且能较好地维持鲜切苹果的感官品质,4 mg/mL的毛茶茶多酚提取物能很好地对鲜切苹果进行保鲜。