细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441 深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441 菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6 种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3 倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7 和9 倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。     

细脚拟青霉甘露醇含量的测定

采用比色法在波长412nm处测定细脚拟青霉菌丝体及固体培养物中甘露醇含量。考察提取溶剂、提取温度、提取时间对甘露醇提取率的影响,得到甘露醇最佳提取条件,以蒸馏水为提取溶剂,菌丝体在60℃时提取60min,固体培养物在100℃时提取60min;对测定方法进行回收率、精密度、稳定性实验,菌丝体中甘露醇回收率为99.94%,相对标准偏差为0.74%,精密度实验相对标准偏差为0.80%,60min内光密度值稳定,固体培养物中甘露醇回收率99.79%,相对标准偏差为1.17%,精密度实验相对标准偏差为1.00%,60min内光密度值稳定。     

溶解氧对细脚拟青霉小试发酵过程及胞内核苷积累的影响

在30L发酵罐中,考察了溶解氧为20%、40%、60%和80%四个水平对细脚拟青霉发酵过程及胞内核苷积累的影响.结果表明,DO控制在20%、40%、60%和80%时,最大生物量分别在发酵的第13、11、7、5d获得,依次为18.3、21.6、24.7、27.3g/L;最大胞内核苷类物质的产量分别在发酵的第13、13、9、7d获得,依次为3.8643、5.7183、5.2311、4.4968mg/g.在此基础上,提出两阶段DO控制策略.较单阶段DO控制时获得的最大胞内核苷类物质产量和生产率分别提高了19.9%和19.2%.     

溶解氧对细脚拟青霉小试发酵过程及胞内核苷积累的影响

在30L发酵罐中,考察了溶解氧为20%、40%、60%和80%四个水平对细脚拟青霉发酵过程及胞内核苷积累的影响,结果表明,DO控制在20%、40%、60%和80%时,最大生物量分别在发酵的第13、11、7、5d获得,依次为18·3、21·6、24·7、27·3g/L;最大胞内核苷类物质的产量分别在发酵的第13、13、9、7d获得,依次为3·8643、5·7183、5·2311、4·4968mg/g。在此基础上,提出两阶段DO控制策略,较单阶段DO控制时获得的最大胞内核苷类物质产量和生产率分别提高了19·9%和19·2%。      

培养条件对细脚拟青霉抑制金黄色葡萄球菌的影响

目的:研究不同培养条件对细脚拟青霉抑制金黄色葡萄球菌的影响,确立最佳摇瓶培养条件。方法:以抑菌圈直径大小为指标,采用单因素实验和L9(34)正交实验,对碳源、氮源、无机盐、培养时间、起始pH、摇瓶装液量以及接种量等培养条件进行研究。结果:细脚拟青霉产抑菌活性物质的最佳培养基为:4%蔗糖、2%酵母浸出粉、0.15%MgSO4.7H2O和0.025%KH2PO4;最佳摇瓶培养条件为:起始pH5.5～6.5,装液量30mL/100mL,接种量5%～7.5%,培养时间6d。结论:在此优化条件下,细脚拟青霉发酵液对金黄色葡萄球的抑菌圈直径可达23.5mm。      

蛹拟青霉代谢产物清除自由基和抑制单胺氧化酶活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)—TLC法和酶标仪法对1株蛹拟青霉RCEF0892摇瓶发酵菌丝体及发酵液甲醇-乙酸乙酯[V(甲醇)∶V(乙酸乙酯)=1∶1]提取物清除自由基活性进行了定性和定量分析,发现该菌株发酵液提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,它对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率可达79.92%。同时,以大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶为靶标的体外实验发现,RCEF0892菌株菌丝体提取物具有较强的抑制单胺氧化酶活性,且其活性和浓度呈量效关系,其对大鼠肝脏线粒体单胺氧化酶的半数抑制浓度IC50为81.39μg/mL。     

初始pH值对细脚拟青霉小试发酵过程及胞内核苷积累的影响

在30L发酵罐中,采用液体深层发酵的方法,考察培养液初始pH7、6.5、6、5.5、5、4.5时对细脚拟青霉菌体生长及胞内核苷类物质积累的影响。结果表明：初始pH6.5时,对菌体生长和胞内核苷的积累最为有利,最大生物量为28.7g/L,最高胞内核苷类物质产量为5.94mg/g;起始pH7、6、5.5、5、4.5时,最大生物量分别在发酵的第9、10、11、11、13天获得,依次为26.4、27.3、23.6、21.2、18.5g/L;最大胞内核苷类物质的产量分别在发酵的第11、11、11、13、13天获得,依次为5.27、5.51、4.89、4.29、4.05mg/g。细脚拟青霉以菌体或者胞内代谢物为发酵目标进行优化控制时,其发酵初始pH值应调节到相应的最佳值。     

金钱草清除自由基活性及其成分研究

用2:1的甲醇:氯仿超声提取金钱草成分,并用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次进行萃取,利用DPPH法、邻二氮菲-Fe2+氧化法和AP-TEMED法进行清除自由基活性实验,同时与合成抗氧化剂BHT进行对照。结果显示乙酸乙酯提取物(EAF)具有最高的清除自由基活性,大于人工合成抗氧化剂BHT。利用硅胶,RP-18和SephadexLH-20对其进行活性追踪分离,得到3种纯的清除自由基活性成分。利用1D、2DNMR和ESI-MS对其结构进行鉴定。结果显示为槲皮素、槲皮素-3-o-葡萄糖甙和山奈酚-3-o-葡萄糖甙。活性大小顺序为槲皮素>槲皮素-3-o-葡萄糖甙>山奈酚-3-o-葡萄糖甙>EAF>BHT。含酚羟基化合物的清除自由基活性与其结构密切相关。活性大小主要取决于酚羟基的数目。     

不同干燥方式对蛹拟青霉发酵豆粉活性成分及品质的影响

为探究蛹拟青霉发酵大豆粉适当的干燥方式,采用热风干燥、微波真空干燥和冷冻真空干燥3种干燥方式对蛹拟青霉发酵豆粉进行了干燥处理,并测定了多糖、蛋白质、虫草素、多酚等主要活性成分和干燥发酵豆粉的堆积密度、复水性、感官指标和微生物数量.结果表明:不同的干燥方式对发酵豆粉的活性成分含量和堆积密度、复水性、微生物数量、感官指标等...     

蛹拟青霉发酵液中抑菌活性成分的分离纯化

以大肠杆菌、白色假丝酵母、黑曲霉为指示菌株,对蛹拟青霉xzcs005菌株液体发酵液乙酸乙酯萃取相中的抑菌活性成分进行分离纯化。乙酸乙酯萃取相经硅胶柱色谱分离后得到组分Ⅴ和组分Ⅶ两个抑菌活性组分。组分Ⅴ利用反相柱分离得到抑菌活性纯品PMBA-1,其在质量浓度为1.0mg/mL时对大肠杆菌、白色假丝酵母和黑曲霉的抑菌圈直径分别为(16.21±0.27)、(23.54±0.35)、(27.33±0.54)mm;组分Ⅶ再次经过硅胶柱色谱分离后得到抑菌活性纯品PMBA-2,其在质量浓度为1.0mg/mL时对大肠杆菌、白色假丝酵母和黑曲霉的抑菌圈直径分别为(21.84±0.28)、(16.33±0.54)、(11.54±0.51)mm。     

古尼拟青霉小孢变种的主要有效成分分析

对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864的深层发酵产物进行了有效成分分析,结果表明,菌丝体和发酵液中氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中粗蛋白、总糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0864深层发酵菌丝体和发酵液中均含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等元素,尤以Ca的含量最高;用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对RCEF0864菌丝体和发酵液冻干粉甲醇提取物中的清除自由基活性物质进行了分析,发现2种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0 mg/mL,37℃下保温10 min时,2种提取物对0.4 mg/mL的DPPH自由基的清除率分别为53.86%和59.66%。     

三种品牌酱油对自由基的清除作用

研究了三种品牌酱油对活性氧类自由基如超氧阴离子自由基(O_2·)和羟自由基(·OH)的清除作用。结果表明,三种品牌酱油对O_2·、·OH都有一定的清除自由基作用,高温加热对O_2·、·OH的清除作用有一定的影响,但浓度越低,影响越小。     

女贞内生真菌清除自由基活性成分的分离纯化

采用组织块分离法对女贞的内生真菌进行分离,对分离到的菌株进行清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基活性研究,并对活性较强菌株代谢产物中的清除自由基成分进行分离纯化。从女贞的叶片、茎、根、枝条等组织共分离出101 株内生真菌,研究发现NZ-18菌株清除自由基活性最强,并采用液相色谱法对NZ-18发酵液中清除自由基活性成分进行制备。分离到一种活性较强的化合物1,经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）法和薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）法纯度验证,发现该化合物为纯品化合物经活性验证发现化合物1在样品质量浓度为0.5 mg/mL时对0.2 mg/mL的DPPH自由基清除率为94.88%。结果表明,女贞内生真菌中存在大量的清除自由基活性菌株。     

大麦叶提取物清除O2·-和·OH的动态研究

本文用氮蓝四唑 (NBT)光化还原法和抗坏血酸 -Cu2 + -H2 O2 体系法 ,对从大麦麦叶中提取的有效活性物质 ,主要是黄酮类化合物清除超氧离子自由基O2 ·- 和羟自由基·OH的效果进行测定。结果表明 ,这类化合物有较强的清除作用。其中 98- 12这一品种的清除率略高于其它三个品种。生长 5～ 10天的麦叶清除效果最好。当黄酮浓度达到 12 μg/mL左右时 ,对O2 ·- 的最大清除率达 95 .5 6 % ,对·OH的最大清除率达94 .12 % ,其清除作用都比竹叶提取物强。     

何首乌中清除自由基活性成分提取工艺

目的：探讨何首乌中各种清除自由基组分的提取工艺。方法：通过单因素和中心组合试验,对影响何首乌中二苯乙烯苷、葸醌类化合物含量的提取因素（温度、酒精浓度、时间、料液比）进行了研究,同时将提取物清除DPPH自由基的能力作为考察指标,运用响应面分析法确定清除自由基组分提取的最优化工艺条件。结果：所得最优工艺条件为：料液比1：10、温度62℃、乙醇浓度81％、提取时间60min、提取次数为两次。在此条件下葸醌类物质的得率为1．06％,二苯乙烯苷得率5．03％,DPPH自由基清除率为58．7％。