凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

凡纳滨对虾过敏原结构与性质的研究进展

凡纳滨对虾是一种营养价值高且具有致敏性的水产品,其引发的过敏反应逐渐引起研究者的重视。本文综述了凡纳滨对虾中4 种分子质量在20～80 ku范围的过敏原蛋白（即原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌球蛋白轻链以及肌浆结合蛋白）的性质、分子组成、空间结构及其各蛋白的致敏表位等诸多方面,这些将十分有益于更好了解这些过敏原蛋白的致敏机理以及降低过敏原性。     

凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究

目的：鉴定凡纳滨对虾分子质量40 kD过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法：运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪（matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS）鉴定凡纳滨对虾40 kD过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17 种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果：凡纳滨对虾40 kD过敏原为精氨酸激酶（arginine kinase,AK）;其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类（96%～100%）、蟹类（91%～93%）、贝类（49%～52%）、蟑螂（83%）中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17 种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论：精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。     

凡纳滨对虾酶解产物过敏原消减效果的评价

采用木瓜蛋白酶分解凡纳滨对虾的蛋白质,以消减其中的蛋白质过敏原;应用豚鼠全身过敏反应和离体回肠平滑肌过敏性收缩实验模型,对该蛋白酶酶解产物的致敏性进行评价。结果显示,虾蛋白和虾肉经木瓜蛋白酶水解后,其酶解产物所致的全身过敏反应明显减轻(与虾蛋白组和虾肉组比较,0.01相似文献   

凡纳滨对虾原肌球蛋白的纯化鉴定及生物信息学分析

原肌球蛋白(tropomyosin,TM)是凡纳滨对虾中最主要的过敏原,为获得高纯度TM,该文以凡纳滨对虾为原料,采用丙酮去脂、PBS粗提、热处理除杂、硫酸铵沉淀和柱层析法进行提取纯化虾肉中TM.经SDS-PAGE确定其分子质量,通过Western blot和液质联用进行鉴定,同时利用生物信息学方法分析TM的理化性质并...     

凡纳滨对虾蛋白体外降脂作用分析

为了考察凡纳滨对虾蛋白的体外降脂作用,以胆酸盐吸附能力、胰脂肪酶抑制率、降胆固醇作用、胆固醇酯酶反应作用等为研究指标,对凡纳滨对虾蛋白不同pH沉淀组分降脂特征进行研究。结果表明,凡纳滨对虾蛋白含量为18.40%,不同分离组分蛋白对胆酸盐有很好的吸附能力,其中对牛磺胆酸钠吸附能力最强的是pH6组分(91.3%),对甘氨胆酸钠吸附能力最强的是pH6组分(75.1%),对脱氧胆酸钠吸附能力最强的是pH4组分(63%);pH7组分对胰脂肪酶的抑制率高达76.8%;降胆固醇作用最高是pH9组分(83.9%),最低为pH7组分(67.3%);而不同组分对胆固醇酯酶的抑制率存在较大差异,最高为pH10组分(83%),最低为pH4组分(23%)。综上,凡纳滨对虾蛋白有一定的体外降脂功效。     

凡纳滨对虾肌肉盐溶蛋白提取工艺研究

本实验以凡纳滨对虾肌肉为原料,盐溶蛋白得率为指标,研究盐溶蛋白最佳提取工艺参数,得到其最佳提取条件:NaC1浓度0.6 mol/L;抽提时间25 h;料液比1∶4; pH值7.此条件下盐溶蛋白含量为105.73 mg/g,提取率为83.34％.     

凡纳滨对虾微波熟制工艺条件的研究

以模糊感官评定结果为考察指标,研究了凡纳滨对虾微波熟制的工艺条件;对不同微波条件下熟制虾的持水力、失重率、水分含量、色差、质构以及虾体的温度进行了系统分析。结果表明,微波熟制工艺参数为加热功率240W,加热时间120s,保温2min,处理量(50±5)g/16L(虾体质量/微波炉有效腔体体积)。不同微波处理的凡纳滨对虾熟制品的持水力、水分含量、质量损失、色差、温度和质构特性差异显著性规律不明显。其中,微波240W,处理120s的处理组失重率最小,弹性最大,咀嚼性最好。微生物检验结果表明,微波熟制的凡纳滨对虾细菌总数符合食品安全卫生标准。     

凡纳滨对虾养成的生命周期成本分析研究

对于凡纳滨对虾养成(繁殖和养殖)中所追求的经济性能,本文从传统的技术经济入手,结合生命周期成本分析(LCCA)的理念进行拓展,以养成1000kg凡纳滨对虾为成本计算单元,把凡纳滨对虾养成成本分为繁殖成本和养殖成本,并对各个阶段成本单独分析。结果表明,该阶段所需总成本为10882.5元。     

凡纳滨对虾肉糜凝胶动力学模型研究

为了研究虾肉糜的凝胶特性,改善虾肉肠的品质,研究了凡纳滨对虾肉糜在低温凝胶化后,高温加热过程中虾肉糜的凝胶强度、失水率、白度及蛋白质组成变化,并在此基础上探索蛋白质组成和虾肉糜凝胶强度度之间的关系,绘制了升温曲线,建立了虾肉糜凝胶一级反应动力学模型。结果表明,升温的过程中,凝胶的强度和白度有不同程度的提高,失水率呈先降低后升高的趋势,盐溶性蛋白质和水溶性蛋白质含量降低,而不溶性蛋白质的含量升高;虾肉糜的实际升温曲线和用公式预测的升温曲线有很高的拟合度;凝胶率在80%之前,符合一级动力学方程,但凝胶形成约80%后,形成速率明显减小,不再符合一级动力学方程。     

超高压结合酶法消减南美白对虾蛋白过敏原研究

以南美白对虾为研究对象,提取水溶性虾蛋白,采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压下直接酶解等方法消减其过敏原蛋白,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为压力150MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.1997;高压结合木瓜蛋白酶水解法最佳条件为：350MPa、温度45℃、保压时间20min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.0492;超高压下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.05。由此可见,高压对过敏原蛋白有消减作用,先高压再水解和超高压下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究超高压结合酶法对虾仁致敏性的消减效果。将南美白对虾去头、尾、壳、肠线后,采用超高压法和超高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理最佳条件为压力600 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min,此条件下消减率为45.66%;超高压结合胰蛋白酶法最佳条件为压力200 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min、胰蛋白酶加酶量3 000 U/mg,此条件下消减率为95.27%。由此可见,超高压法对虾仁致敏性有消减作用,超高压结合酶法对虾仁致敏性消减的效果更好。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾肉中的过敏原

以虾肉为原料,研究超高压对酶法消减南美白对虾虾肉过敏原的强化作用。将南美白对虾去头、去尾、去壳、去肠线后用匀浆机匀浆,制成虾肉酱,分别采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压条件下直接酶解的方法消减其过敏原,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为：压力200Mpa、温度40℃、保压时间35min,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.1986;先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解,其水解的最佳条件为：底物质量浓度10g/100mL、温度60℃、酶与底物质量比1:200,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.0487;超高压条件下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300Mpa、温度40℃、保压时间35min,产物与抗体反应的OD492nm值为0.0516。由此可见,超高压处理对南美白对虾过敏原有消减作用,先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解和超高压条件下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

凡纳对虾原肌球蛋白硫酸铵沉淀分离纯化方法的优化

虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)食物过敏是一种全球性的食品安全问题,研究发现TM的分离纯化对于系统准确地鉴定和控制过敏具有重要的意义,鉴于此,本研究以南美白对虾(Litopenaeus vannamei)为对象,改进了TM分离纯化的方法。结果表明,抽提液p H 6.5~7.5、硫酸铵饱和度30%时,可以有效分离纯化TM;经喹啉酸法测定其质量浓度最高可达43μg/μL。该方法省去了高效液相色谱、层析技术等对TM的进一步纯化,减少了纯化步骤,避免了在这些纯化步骤中出现的蛋白损失及蛋白稀释;高质量浓度的TM溶液可无须经过冷冻干燥,直接用于对其理化性质及过敏原性的研究。     

凡纳滨对虾的加工利用和产业发展概述

凡纳滨对虾是当今高产的三大养殖对虾品种之一,具有广温广盐杂食性、生长速度快、抗病抗逆力高、适应性能强、营养需求低等突出特点,是一种营养均衡的食源性高蛋白佳品。凡纳滨对虾从1988年引进中国后,90年代初养殖获得成功,2000年后进行了规模化推广,2019年养殖总产量为181.6万吨t,逐步成为我国对虾养殖的主要品种和渔业经济的重要支柱产业,并且形成了从引种、繁苗、养殖、加工、销售等环节的庞大产业链,产生了巨大的经济效益、社会效益、生态效益以及文化效益。目前我国对虾加工产业处于结构简单、粗放加工的初级阶段,加上国际贸易壁垒、国内外市场低迷、成本过高等诸多因素,进行虾类高值化产品研究、加工技术研究、延长虾类加工产业链等已成为产业发展方向,这对开辟凡纳滨对虾加工食品新途径、促进虾产业的可持续发展具有重要意义。     

基于高通量测序技术分析凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冷藏过程菌群结构变化

目的揭示凡纳滨对虾(4±1)℃条件下贮藏过程中菌群结构的变化规律,为其贮运保鲜提供参考。方法采用高通量测序技术对不同冷藏期凡纳滨对虾中的细菌种类及其丰度迚行分析。结果凡纳滨对虾初始菌群以鞘脂杆菌属(Sphingobacterium)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为主;冷藏过程中,Sphingobacterium、Chryseobacterium、Stenotrophomonas比例迅速减少,系统迚化关系上比较接近的交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)、希瓦氏菌属(Shewanella)和别弧菌属(Aliivibrio)成为优势菌,其中Aliivibrio的比例相对稳定,Shewanella比例呈先增加后减少的趋势,Pseudoalteromonas比例不断增加,可能在凡纳滨对虾腐败过程中起重要作用。结论高通量测序可以更加全面反映凡纳滨对虾中菌群的组成及其丰度信息,Pseudoalteromonas是凡纳滨对虾冷藏过程的优势腐败菌。