凡纳滨对虾主要过敏原鉴定及酶法消减技术的研究

以凡纳滨对虾为研究对象,用免疫印迹法检测其主要过敏原蛋白组分;用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对凡纳滨对虾水溶性蛋白水解,消减过敏原。并且通过间接酶联免疫吸附实验和致敏豚鼠全身免疫实验对过敏原消减情况进行检测,确定酶法消减过敏原条件。结果表明,凡纳滨对虾的主要过敏原为99、33、19kD 以及14kD 的蛋白质组分。胰蛋白酶最佳水解条件为：pH8.0,酶与底物比1:100(m/m,下同),45℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;木瓜蛋白酶最佳水解条件为pH6.5,酶与底物比1:100,60℃,底物质量浓度3g/100mL,水解时间3h;菠萝蛋白酶最佳水解条件：pH7.5,酶与底物比1:100,55℃,底物质量浓度5g/100mL,水解时间3h。并且胰蛋白酶水解产物和木瓜蛋白酶水解产物对致敏豚鼠的全身免疫实验安全性很好。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾肉中的过敏原

以虾肉为原料,研究超高压对酶法消减南美白对虾虾肉过敏原的强化作用。将南美白对虾去头、去尾、去壳、去肠线后用匀浆机匀浆,制成虾肉酱,分别采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压条件下直接酶解的方法消减其过敏原,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为：压力200Mpa、温度40℃、保压时间35min,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.1986;先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解,其水解的最佳条件为：底物质量浓度10g/100mL、温度60℃、酶与底物质量比1:200,此条件下产物与抗体反应的OD492nm值为0.0487;超高压条件下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300Mpa、温度40℃、保压时间35min,产物与抗体反应的OD492nm值为0.0516。由此可见,超高压处理对南美白对虾过敏原有消减作用,先超高压处理再用木瓜蛋白酶水解和超高压条件下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

利用牛奶过敏者血清检验牛奶中过敏原酶解程度的研究

利用对牛奶过敏者和对牛奶不过敏者的血清作为“一抗”,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,检测牛奶水解后对牛奶过敏者血清的结合能力,从而确定牛奶中过敏原蛋白的最佳水解消除条件,降低牛奶及奶制品对牛奶过敏者的致敏性,达到牛奶过敏人群可以饮用的标准。结果表明:胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶共同水解牛奶的最佳条件是酶与底物质量比W(E/S)=4%,pH1.5(胃蛋白酶)和pH8.0(胰蛋白酶和木瓜蛋白酶),温度40℃(胃蛋白酶和胰蛋白酶)和45℃(木瓜蛋白酶),水解时间3h,用酶标仪在492nm测得其水解后奶样与过敏者血清结合的OD值已降到了牛奶不过敏者血清与未水解牛奶结合的OD值水平,达到了消除过敏原的效果。     

酪蛋白水解物对瑞士乳杆菌生长的影响

利用胰蛋白酶水解酪蛋白,以水解物对瑞士乳杆菌增殖效果为指标,优化水解条件,并研究最佳增殖效果。 结果表明：胰蛋白酶水解酪蛋白的最佳水解条件为水解温度37℃、底物质量分数5%、酶与底物质量比1:600、pH8.0,此条件下制备的水解产物添加量为1g/100mL 时对瑞士乳杆菌生长增殖效果最好,而添加量大于4g/100mL 时,对瑞士乳杆菌生长呈现抑制作用。     

酶解猪血红蛋白制备降血压肽工艺参数优化

为获得具有较高降血压活性的降血压肽,选用胰蛋白酶对猪血红蛋白进行水解。以水解物对血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为指标,先进行单因素试验,确定底物质量浓度、水解温度、pH值、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过正交试验对酶解工艺参数进行优化。结果表明胰蛋白酶水解猪血红蛋白制备降血压肽的最佳酶解条件为：底物质量浓度10g/100mL、水解温度45℃、pH8.0、水解时间8h、酶用量2000U/g,此时酶解产物对血管紧张素转化酶的抑制率为68.74%。     

超高压结合酶法消减南美白对虾蛋白过敏原研究

以南美白对虾为研究对象,提取水溶性虾蛋白,采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压下直接酶解等方法消减其过敏原蛋白,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为压力150MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.1997;高压结合木瓜蛋白酶水解法最佳条件为：350MPa、温度45℃、保压时间20min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.0492;超高压下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.05。由此可见,高压对过敏原蛋白有消减作用,先高压再水解和超高压下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

东海海参胶原蛋白酶解工艺研究

主要研究从东海海参中提取胶原蛋白的工艺以及胶原蛋白酶解的条件优化.以干东海海参为原料,采用酸碱溶液浸泡除去东海海参表面的钙质及非胶原物质,然后在酸性条件下用1%胃蛋白酶进行水解,提取胶原蛋白;分别探讨木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白的最佳条件.结果表明:木瓜蛋白酶最适条件:底物含量30 g/g酶.温度40℃,pH 7.5;风味蛋白酶最适条件:底物含量40 g/g酶,温度40℃,pH 7.5;胰蛋白酶最适条件:底物含量40 g/g酶,温度55℃,pH 9.0.复合酶水解的最佳工艺:风味蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比1:1,木瓜蛋白酶与胰蛋白酶的质量比3:1,风味蛋白酶与胰蛋白酶的质量比1:1.     

双酶水解乳清蛋白ACE抑制肽的制备工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解乳清蛋白,通过单因素试验和正交试验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解乳清蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,将水解物以3 kDa超滤膜过滤,研究表明,胃蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解工艺条件为水解温度37℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 728 U/g,此时乳清蛋白ACE抑制率为86%;胰蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 480 U/g,此时ACE抑制率为72%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的乳清蛋白ACE抑制率96%。     

双酶法制备玉米肽酶解条件研究

利用双酶法水解玉米蛋白粉制备玉米肽,探讨各因素对水解度(DH)的影响,旨在确定玉米肽制备的最佳酶解条件。结果表明：最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度5g/100mL、pH8.5,按4% 的酶与底物比加碱性蛋白酶水解1.5h 后,调整pH 值至7.5,之后再按3.5% 的酶与底物比加木瓜蛋白酶水解1.5h。在此条件下,水解液中DH 为80.97%。与单酶法相比,DH 明显提高。     

利用冷榨花生饼制备花生多肽饮料

以冷榨花生饼为原料,采用碱法和酶水解法制备花生蛋白,以蛋白质提取率为指标,确定蛋白提取条件,并利用所提取蛋白或蛋白水解物经乳酸菌发酵制备花生多肽饮料。结果表明NaOH溶液提取花生蛋白的最佳条件为：pH9.0、温度55℃、料液比1:8(g/mL)、浸提2h,蛋白提取率80.68%;胰蛋白酶水解蛋白的最佳条件为：酶与底物比1:50(m/m)、底物质量浓度5g/100mL、pH9.0、水解温度50℃,蛋白提取率96.26%。以花生水解蛋白和脱盐乳清粉为原料,采用直投式乳酸菌为发酵剂,发酵条件为：花生水解蛋白质量浓度2g/100mL、乳清粉加入量1g/100mL、发酵剂与发酵液比1:25(g/kg)、42℃发酵5h、4℃后熟15h、蔗糖质量分数9%时的口感最佳。     

鮰鱼皮明胶抗氧化肽的制备工艺研究

通过测定鮰鱼皮明胶蛋白酶解物对Fenton 体系产生的羟自由基的清除效果,筛选得出胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解物具有较高的清除羟自由基(·OH)的活性;用正交试验L9(34)对胰蛋白酶的水解条件进行优化,确定最佳的水解条件为温度40℃、pH7.5、酶与底物质量浓度比(E/S)3.5%、底物质量浓度2.5g/100mL、酶解时间3h。此外,本研究还采用胰蛋白酶和胃蛋白酶进行了复合酶解试验,确定复合酶解的最佳水解条件为先用胰蛋白酶酶解3h,然后用胃蛋白酶酶解3h,此时得到的酶解液自由基清除率最高,达到47.38%。     

酪蛋白源降胆固醇肽的酶解制备工艺优化

以酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及胰蛋白酶对酪蛋白进行水解,确定制备降胆固醇肽的最佳蛋白酶;通过单因素实验和响应面试验,研究水解pH、水解温度、酶与底物比、底物浓度和水解时间对酪蛋白水解度和胆固醇胶束溶解度抑制率的影响,确定最佳水解条件;而后通过超滤和凝胶过滤层析确定降胆固醇肽的初步分离工艺。结果表明:制备酪蛋白源降胆固醇肽的最佳水解工具酶是中性蛋白酶,其最佳酶解条件为反应温度51.3 ℃,酶与底物浓度比6.47%,pH6.34,底物浓度5 g/100 mL,反应时间3.5 h,胆固醇抑制率为58.25%±0.59%;Sephadex G-10分离酪蛋白降胆固醇肽条件为上样浓度80 mg/mL,上样体积2.5 mL,洗脱速度3.5 mL/min;经酶解、超滤及层析后制备的酪蛋白源降胆固醇肽峰1和峰2样品在100 μg/mL的胆固醇溶解度抑制率为24.2%±0.24%和4.3%±0.16%。经酶解制备分离后,获得具有抑制降固醇胶束溶解活性的降胆固醇肽,为降胆固醇肽的开发提供理论研究基础。     

响应面法优化豆豉蛋白酶解工艺

以豆豉蛋白为原料,选用木瓜蛋白酶与复合风味酶分步水解制备豆豉蛋白水解物。通过单因素试验和响应面分析,确定了木瓜蛋白酶的水解条件为:反应温度62.93℃、pH7.49、酶/底物4.91%、底物浓度5.48%,在此条件下水解5h;木瓜蛋白酶水解液再加入复合风味酶酶解,优化的水解条件为:在pH6.0,酶/底物为3%,55℃条件下反应3h,豆豉蛋白最终水解度达到28.37%。     

响应曲面法优化小黄鱼ACE抑制肽的酶解条件

以小黄鱼为原料,利用酶解技术制备高活性的ACE抑制肽。通过单因素及响应曲面分析,确定胰蛋白酶(PTN6.0S)的酶解工艺,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定酶解产物(0.05g/L)的ACE抑制率,研究pH值、温度、时间、底物质量浓度、酶与底物比等因素对ACE抑制肽活性的影响。结果显示：最佳工艺条件为pH7.0、温度50℃、时间16.5h、底物质量浓度5.6g/100mL、酶与底物比9‰,酶解产物ACE抑制率达87.36%。