抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

异丙威单克隆抗体的制备及鉴定

异丙威是我国农业生产中常见的杀虫剂,在果蔬、粮食和烟草等中都有广泛应用,然而这类农药也具有较强生物毒性。为了制备异丙威单克隆抗体,以实现对农药异丙威药物的快速检测。本文以2-异丙基苯酚等为原料,合成异丙威半抗原及人工抗原,并通过免疫小鼠、细胞融合、克隆、筛选获得单克隆抗体细胞株,经腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法制得异丙威单克隆抗体,通过间接竞争ELISA法对抗体的特异性进行鉴定。结果表明,制备的异丙威单克隆抗体检测范围为1.88~82.80 ng/m L,抗体的IC50为11.70ng/m L,最低检测限为0.54 ng/m L,抗体与克百威、西维因、涕灭威、灭多威、2-异丙基苯酚5种异丙威结构类似物均无明显交叉反应,具有高特异性,能够满足农产品中异丙威残留检测的要求。异丙威单克隆抗体的制备为异丙威快速检测产品的开发奠定了基础。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

米酵菌酸单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立鲜湿米粉中米酵菌酸(bongkrekicacid,BA)的免疫学快速检测方法,制备特异性识别BA的单克隆抗体并进行评价。方法 利用碳二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]法将BA半抗原与牛血清白蛋白(bovineserumalbumin, BSA)和卵清蛋白(ovalbumin, OVA)载体偶联,分别合成BA免疫原(BA-BSA)和包被原(BA-OVA),用BA-BSA免疫Balb/C小鼠,取免疫效果好的小鼠脾脏与小鼠NS-1骨髓瘤细胞进行融合。采用间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay, icELISA)进行筛选,筛选出能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞,利用有限稀释法进行亚克隆得到单株能稳定分泌所需抗体的细胞;采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用正辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水型抗体,通过酶联免疫吸附法测定纯化后的抗体效价。结果 成功合成了BA免疫原BA-BSA和BA包被原BA-OV...     

孔雀石绿单克隆抗体的制备及鉴定

以合成的孔雀石绿- 牛血清白蛋白(MG-BSA)为免疫原免疫Balb/c 小鼠,利用杂交瘤细胞技术,建立1 株稳定分泌孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5G6,其分泌的抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。间接ELISA 测定腹水效价达1.28 × 105。间接竞争ELISA(ciELISA)显示其对孔雀石绿的50% 抑制浓度(IC50)为1.36ng/ml,除结晶紫(CV)外,与无色孔雀石绿(LMG)没有交叉反应。     

酚酞单克隆抗体的制备

目的 建立免疫学快速检测减肥类保健食品中非法添加的酚酞, 制备酚酞单克隆抗体并进行评价。方法 利用碳二亚胺(carbodiimide, EDC)法合成免疫原和包被原, 用免疫原免疫Balb/C小鼠, 取小鼠脾脏与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合。采用竞争结合双阳性两步筛选法, 筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞, 利用有限稀释亚克隆方法得到单株细胞; 采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用辛酸-饱和硫酸铵法对腹水型抗体进行纯化, 利用酶联免疫吸附法鉴定纯化后的抗体。结果 成功合成了酚酞-BSA免疫原和酚酞-OVA包被原, 筛选获得酚酞杂交瘤细胞株FT/BSA/2019, 单克隆抗体的效价1×105。结论 本研究初步建立了特异性高的酚酞单克隆抗体的制备方法。     

直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶

建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为：利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。     

磺胺嘧啶分子印迹电化学传感器的制备及其快速检测食品中磺胺嘧啶药物残留

以磺胺嘧啶为模板分子,邻氨基苯酚为功能单体,采用紫外光谱法优化二者比例,以羧基化多壁碳纳米管和纳米金为修饰材料,用滴涂法修饰玻碳电极,在高氯酸-高氯酸钠溶液（pH?5.5）中电聚合形成邻氨基苯酚聚合膜,制备磺胺嘧啶分子印迹电化学传感器。实验选用含0.5?mol/L?KCl及5?mmol/L?K3[Fe(CN)6]-K4[Fe(CN)6]的水溶液为表征溶液,采用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究传感器的电化学响应特性,优化制备条件,研究印迹传感器对模板分子及其结构类似物的选择性响应性能,并将该传感器应用于食品中磺胺嘧啶药物残留的快速检测。在最佳条件下,磺胺嘧啶浓度在1.0×10－8～2.0×10－6?mol/L范围内线性关系良好,检出限为3.3×10－9?mol/L,样品加标平均回收率在83.50%～97.80%之间,相对标准偏差不大于4.0%。该传感器制作成本低、操作简便快速、检测灵敏度高、抗干扰能力强、稳定性好,具有良好的应用前景。     

啤酒中浑浊敏感蛋白单克隆抗体制备及其鉴定

使用已纯化的浑浊敏感蛋白免疫BALB/c小鼠,利用传统杂交瘤技术制备单克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞株,及免疫印迹实验(Western blot)进行单抗特异性鉴定.获得针对浑浊敏感蛋白的特异性单克隆抗体共3株,经鉴定具有较好的反应特异性;有望应用于优化啤酒工艺中.具有潜在的应用价值.     

乳中磺胺甲基嘧啶残留酶联免疫测定

以BSA为载体合成两种不同摩尔比值（1：13和1：42）磺胺甲基嘧啶抗原,并比较其免疫原性;以OA为载体合成一种包被抗原;用过氧化物酶标以鼠抗免IgG;建立乳中磺胺甲基嘧啶残留酶联免疫测定。抗体亲和常数分别为1．28×107（1：42）和3．21×107（1：13）。ELISA测定磺胺甲基嘧啶工作浓度5～220ng／ml（1．87×10－8～8．2×10－7mol／L）,检测限为2．4ng／ml,回收率为88～118％,与磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉反应率分别为6．0％和0．84％,与碘胺二甲氧嘧啶和磺胺咪无交叉反应。     

SM_2单克隆抗体的初步应用研究

以磺胺二甲嘧啶(SM2)-人血清白蛋白(HSA)为免疫抗原和SM2-卵清白蛋白(OVA)为包被抗原。制备SM2单克隆抗体;利用杂交瘤技术和有限稀释法经亚克隆,得到三株特异性稳定分泌SM2抗体的杂交瘤细胞,与其他四种磺胺药和两种载体蛋白HSA、OVA均无交叉反应。利用本试验制备的单克隆抗体初步建立了动物组织中检测SM2的间接竞争ELISA方法。最低检出限为9.95 ng/mL,灵敏度为47.12 ng/mL。     

抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定

采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×106;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛IgG轻链Fab片段,9C6识别牛IgG重链Fab片段;9C6与牛IgG1和牛IgG2反应,与山羊IgG、绵羊IgG、兔IgG、牛IgM、牛乳酪蛋白、牛乳β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、鱼明胶的交叉反应率均小于1%;9C6亲合力常数达牛乳8.92×108?L/mol。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

采用牛血清白蛋白偶联的三聚氰胺( melamine- BSA)完全抗原免疫BALB/C小鼠,应用杂交瘤技术制备抗三聚氰胺的特异性单克隆抗体.所得单克隆抗体效价可达5.0×105,且抗体的亚类类型为IgG1,抗体的亲和常数为3.21×109 L/mol.与三聚氰酸、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺的交叉反应率分别为30％、93％和46％.说明该单抗可用于三聚氰胺类物质的检测,为研制高质量的三聚氰胺ELISA试剂盒和胶体金试纸条奠定了基础.     

环丙沙星单克隆抗体的制备及鉴定

通过改进的碳二亚胺法制备环丙沙星- 牛血清白蛋白偶联物(CIP-BSA),用紫外扫描、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法鉴定偶联物。利用制备的CIP-BSA 偶联物作为免疫原,免疫Balb/c 小鼠,用杂交瘤技术制备环丙沙星单克隆抗体,并对其效价、亲和力和特异性进行鉴定。结果表明：CIP-BSA 的偶联比为30:1。经间接酶联免疫吸附(ELISA)法筛选,共筛出两株敏感、特异的杂交瘤细胞(JY-1、JY-2)。这两株细胞的腹水经纯化后的抗体效价分别为5.12 × 106、2.56 × 106,亲和力常数分别为2.88 × 109、2.46 × 109L/mol,两抗体均为IgG1a,取亲和力高的JY-1 进行竞争抑制测定,IC50 值可以达到9.83ng/mL。该单抗仅与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为95%。通过验证得到的JY-1 细胞株分泌的单克隆抗体可用于水产品中环丙沙星残留的快速检测。     

Development of a Bispecific Monoclonal Antibody to Pesticide Carbofuran and Triazophos Using Hybrid Hybridomas

ABSTRACT:  A mouse hybrid hybridoma (tetradoma) was derived from fusing hybridomas producing monoclonal antibody to N-methylcarbamate pesticide carbofuran with hybridomas producing monoclonal antibody to organophosphorus pesticide Triazophos. The prepared tetradoma line (12C1 to 2H12) secreted hybrid immunoglobulin exhibiting parental and bispecific binding characteristics. The effect of relevant physicochemical factors on the immunoassay based on the 12C1 to 2H12 bispecific monoclonal antibody had been studied to optimize the ELISA performance. The developed immunoassay showed that the detection limit (I₂₀) were 0.36 and 1.89 ng/mL for triazophos and carbofuran, respectively, without obvious cross-reactivity to other related compounds. Water samples spiked with triazophos at 0.5, 1, and 5 ng/mL or carbofuran at 5, 10, and 20 ng/mL were directly analyzed by the developed ELISA format. The mean recovery of triazophos and carbofuran were 108.1% and 107.5%, with variation coefficient of 15.9% and 17.7%, respectively.