盐酸克伦特罗时间分辨荧光免疫检测方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速、高灵敏度的盐酸克伦特罗(CLB)全自动检测方法。以CLB-OVA包被96微孔板作为固相抗原,与游离CLB竞争限量的以Eu3+标记的抗CLB单克隆抗体,建立解离增强模式的荧光免疫分析体系检测CLB。该方法的灵敏度为0.03ng/mL,批内和批间变异系数分别为2.0%和8.9%,平均回收率为105.8%,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率分别为0.96%和0.77%,结果表明,用TRFIA法检测CLB,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景。     

盐酸克伦特罗酶标抗原的制备及鉴定

选取辣根过氧化物为抗原标记酶,采用重氮化法将盐酸克伦特罗CLEN分别与牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,合成包被抗原和免疫原,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS聚丙烯酞胺凝胶电泳法验证偶联成功。这为下一步获得针对盐酸克伦特罗类特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。     

浅谈盐酸克伦特罗的危害

20世纪70年代末，美国等发达国家首次将盐酸克伦特罗(CLB)开发研究，80年代被广泛应用到畜禽生产中，近年来畜产品中CLB的残留对人类的健康造成严重的危害，着重从CLB理化特性，对人畜的危害性，检测方法以及治理措施方面作一概述。     

盐酸克伦特罗的AlphaLISA检测方法的建立

目的采用纳米均相时间分辨荧光免疫技术(amplified luminescent proximity homogeneous assay,AlphaLISA)建立高灵敏检测盐酸克伦特罗(clenbuterol,CLB)残留的方法。方法在发光微粒上固定CLB,与游离的CLB共同竞争固定在感光微粒上的CLB单克隆抗体,优化检测条件并进行方法学考核。结果该方法的灵敏度为0.04 ng/mL。猪肉样品回收率在83%~109%之间,牛肉样品回收率在92%~112%之间;猪肉样品检测的批内变异系数CV10%、批间变异系数CV15%。与特布他林、沙丁胺醇的交叉反应率分别为34.5%、25.7%,与莱克多巴胺、妥布特罗、齐帕特罗无交叉反应。结论 CLB-AlphaLISA检测肉类中克伦特罗残留具有简单、快速、灵敏性高、特异性强、稳定等特点,具有广阔的应用前景。     

盐酸克伦特罗及肉品卫生

40余年来,β2-兴奋剂-盐酸克伦特罗,起初作为兽药和饲料添加剂广泛使用,而后由于其在食品中的残留导致多起中毒事件被世界各国禁用.本文阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢、残留和对人畜的危害,比较分析了残留的检测技术,重点阐述了ELISA方法的原理、应用及发展前景,为保证肉品卫生作好监控.     

盐酸克伦特罗完全抗原的制备及其鉴定

利用重氮化法将小分子半抗原盐酸克伦特罗(CL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上制得盐酸克伦特罗完全抗原(CL-BSA).采用紫外分光光度法快速确定了BSA∶CL偶联比为1∶17,并通过SDS-PAGE法验证了CL与BSA偶联;间接ELISA法检测免疫Balh/c小鼠血清.结果显示1∶1000稀释后的血清在中和掉BSA的抗体后呈阳性;最后,通过细胞融合获得了一株能稳定分泌CL-McAb的细胞株4H5,经鉴定为IgG1.说明合成偶联比为1∶17的完全抗原能刺激小鼠产生针对盐酸克伦特罗的单克隆抗体.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧光免疫检测体系适用性评价

目的研究已建立的脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧先兊疫定量检测体系(包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧先兊疫层析检测卡和荧先定量检测仪)的适用性。方法检测20个阴性样本中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量,确定该检测体系的检出限和定量限;对6组含不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的小麦阳性样本和6组含不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的玉米阳性样本进行检测,确定方法的准确性和台间差;重复6次检测含中等浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的阳性样本和连续12 h检测国家检测限浓度的阳性样本,确定系统的重复性和稳定性。结果该体系的检出限为154μg/kg,定量限为414μg/kg,幵且检测结果与液质联用方法定值结果无显著性差异,仪器台间差无显著差异;测值的精密度未超过国家标准规定要求。结论本研究验证的时间分辩荧先定量检测体系能准确检测玉米和小麦样本中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量。     

盐酸克伦特罗的残留与食品安全

十年来,食品动物生产使用违禁药物"瘦肉精"--盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注,食品安全越来越受到人们的重视.本文阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢、残留和对人畜的危害.     

盐酸克伦特罗的残留与食品安全

十年来,食品动物生产使用违禁药物"瘦肉精"——盐酸克仑特罗已受到了社会各个层面的广泛关注,食品安全越来越受到人们的重视。本文阐述了盐酸克伦特罗在机体内的分解代谢、残留和对人畜的危害。     

动物性食品中残留盐酸克伦特罗的研究进展

介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的理化特性,分析了它在动物性食品中残留对人体和国民经济所造成的危害,同时又综述了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精)的各种分析检测方法并作了展望。     

脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫法的建立

目的：利用抗脱氧雪腐镰刀烯醇多克隆抗体及其人工抗原,采用时间分辨免疫荧光技术建立间接竞争脱氧雪腐镰刀烯醇时间分辨免疫检测方法(DON-TRFIA)。方法：以DON人工抗原(DON-BSA)包被微孔板,与DON标准或样品中的DON共同竞争结合抗DON多克隆抗体,然后用稀土离子Eu3+标记羊抗兔抗体进行示踪检测,并对建立DON-TRFIA进行方法学的考核。结果：该方法的灵敏度为0.01ng/ml,检测范围为0.01～100ng/ml,IC50为4.84ng/ml,批内、批间变异率均小于10%。不同样品添加回收实验表明小麦、玉米、啤酒、面包回收率分别为89.41%～123.2%、115.6%～123.6%、80.35%～118%、87%～92.45%。玉米样品检测结果表明DON-TRFIA与商品化DON-ELISA试剂盒结果高度相关,具有较好的一致性。结论：DON-TRFIA是目前已见报道文献中最灵敏的DON免疫检测法,具有很好的应用前景。     

恩诺沙星时间分辨荧光免疫分析方法的建立

目的：采用时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术建立高灵敏的恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)快速检测方法。方法：以包被抗原(ENR-OVA)包被微孔板,与游离的恩诺沙星共同竞争抗恩诺沙星抗体,以铕(Eu3+)标记的羊抗兔抗体进行示踪。结果：方法的批内变异系数小于10%、批间变异系数小于15%,平均回收率为91.62%,灵敏度为5ng/L,可测范围为0.01～100μg/L,ED20、ED50和ED80分别为0.088、3.40μg/L和32.81μg/L。结论：ENR-TRFIA方法稳定性好、可测范围宽,具有很好的应用前景。     

时间分辨荧光免疫分析技术的研究进展

时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技术是新型的以镧系元素螯合物为标记物,测量其发射荧光强度的体外超微量分析技术。因TRFIA法比其他放射免疫分析法具有更高的灵敏度和准确度,近年该技术的应用越来越广泛。现从TRFIA的技术原理、反应模式、分析系统等方面的研究进展作一综述。     

盐酸西布曲明人工抗原的合成与鉴定

目的：建立盐酸西布曲明的免疫分析方法。方法：4-氯苯乙腈和1, 3-二溴丙烷为原料合成与盐酸西布曲明具有相同母核结构的小分子双去甲基西布曲明(M2),以双去甲基西布曲明为半抗原,并分别通过活泼酯法、戊二醛法和混合酸酐法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫原(M2-BSA)和包被抗原(M2-OVA)。结果：紫外光谱扫描证明半抗原M2与载体蛋白偶联比为24.6:1(M2-BSA)和16.2:1(M2-OVA),抗血清ELISA效价均达到1:8000以上,IC50=0.42μg/mL。结论：半抗原M2与载体蛋白均已成功偶联,其中活泼酯法对半抗原活性基团的影响最小,合成人工抗原的特异性最强。     

Simultaneous detection of sulfamethazine and sulfaquinoxaline using a dual-label time-resolved fluorescence immunoassay

A dual-label time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) was introduced for the simultaneous quantification of sulfamethazine (SM₂) and sulfaquinoxaline (SQX). Lanthanide (Eu³⁺ and Sm³⁺)-labelled antibodies were used because lanthanides have higher stabilities and narrower emission spectra than most fluorescent dyes. The sensitivity of the TRFIA for SM₂ was 0.02 ng ml^?1, and the average recoveries and the intra- and inter-assay CVs were 77.2–107.6%, 5.4–10.5%, and 6.0–11.2%, respectively. The sensitivity of the TRFIA for SQX was 0.04 ng ml^?1; and the average recoveries and the intra- and inter-assay CVs were 74.1–102.8%, 4.6–10.9%, and 8.7–11.2%, respectively. The method was used to analyse chicken tissue and egg samples, and the results agreed well with the results of HPLC and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) analyses, with correlation coefficients (R²) of 0.9415–0.9724. The TRFIA developed is a simple, fast and sensitive method for the high-throughput simultaneous screening of SM₂ and SQX in edible animal tissues.     

抗-Cry2Aa单链抗体分子互作及荧光免疫检测研究

Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义。本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键结合位点,以此为基础将单链抗体作为检测抗体,建立了间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法,对大米样品中Cry2Aa毒素进行了检测。利用生物信息学工具模拟获得单链抗体三维结构模型,分子对接结果显示重链可变区81NY82和121SGNY124区域及轻链可变区的245YSSN248氨基酸残基在与毒素结构Ⅱ区识别过程中起关键作用,为建立高效检测方法奠定基础,进一步基于该单链抗体建立的时间分辨检测方法灵敏度(IC10)为0.08 ng/mL,中抑制浓度(IC50)为7.99 ng/mL,线性检测范围(IC20~IC80)为0.24~263.77 ng/mL,且与常规双抗夹心ELISA法检测呈良好线性关系。     

瘦肉精在肉类食品中的残留问题及检测

瘦肉精是一种引起广泛关注的非法饲料添加剂,人食用瘦肉精超标的肉制品后会产生严重的不良反应。本文论述了瘦肉精的药理、毒理作用及检测标准和方法。     

T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法. 采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA.同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核.此方法灵敏度为0.2 μg/L,测量范围0.2～500 μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%.与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应.10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11 μg/L.同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926.