铁皮石斛多糖提取及抗氧化活性研究

从铁皮石斛中提取多糖。以铁皮石斛多糖提取得率为评价指标,在单因素试验的基础上通过正交试验优化提取条件,得到最佳提取条件:提取时间2h,料液比1∶80,提取温度80℃,提取次数3次。此条件下铁皮石斛多糖提取得率为19.01%±0.49%。通过测定铁皮石斛多糖对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、超氧阴离子自由基(O~(2-))和羟基自由基(-OH)的清除能力及铁皮石斛多糖对三价铁的还原能力,对铁皮石斛多糖进行抗氧化活性研究。结果表明,铁皮石斛多糖对三种自由基均有较高的清除能力,且清除能力随多糖浓度的增加而增大,在多糖浓度为3mg/mL时,自由基清除率分别达到38.83%、56.25%、56.58%。同时铁皮石斛多糖具有较高的还原能力。铁皮石斛多糖具有较强的抗氧化活性。     

铁皮石斛多糖提取及对羟自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用

以酶解超声提取法提取铁皮石斛多糖,通过对料液比、超声时间、复合酶质量分数的单因素试验和正交试验,确定铁皮石斛多糖的最佳提取条件;以高效液相色谱法对铁皮石斛多糖进行组成成分分析;以香豆素-3-羧酸荧光法测定铁皮石斛多糖的羟自由基清除能力;以噻唑蓝实验和细胞流式实验研究铁皮石斛多糖提取物对SH-SY5Y细胞的保护作用。结果表明,最优铁皮石斛多糖提取条件为料液比1∶100(g/mL)、超声时间2 h、复合酶(纤维素酶和果胶酶1∶1等质量混合)质量分数50%,最优提取条件下铁皮石斛多糖得率为25.69%,其主要单糖组分为甘露糖和葡萄糖。在质量浓度为20～80μg/mL范围内铁皮石斛多糖提取物能有效清除Cu~(2+)催化H_2O_2产生的羟自由基并有效抑制SH-SY5Y细胞的凋亡(凋亡率从56.97%下降到17.97%),且其作用效果成质量浓度依赖性。因此,铁皮石斛多糖可通过清除羟自由基从而抑制Cu~(2+)催化H_2O_2产生羟自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。     

铁皮石斛多糖调控线虫寿命及抗氧化作用的研究

摘 要: 目的 基于秀丽隐杆线虫自然衰老模型, 探讨铁皮石斛多糖(Dendrobium candidum polysaccharides, DOP)抗衰老作用及其机制。方法 将秀丽隐杆线虫野生型N2随机分为对照组和铁皮石斛多糖组(低、中、高), 观察铁皮石斛多糖对线虫N2寿命、运动能力和咽泵能力的影响; 通过检测氧化应激、抗氧化酶试剂盒以及活性氧评估铁皮石斛多糖对N2线虫抗氧化能力的影响。基于skn-1基因缺陷型突变株(EU1)线虫及带有荧光标记的转基因线虫CL2166分析铁皮石斛多糖延长健康寿限的可能作用途径; 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术测定铁皮石斛多糖作用下线虫抗氧化、胰岛素信号途径相关基因转录水平。结果 铁皮石斛多糖中剂量组(250 μg/mL)可显著延长线虫N2的寿命, 平均延寿率达12.73%, 可显著提高运动、咽泵、抗氧化应激能力; 显著提高过氧化氢酶(catalase, CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide disumutase, SOD)活性和谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量, 降低活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量; 铁皮石斛多糖干预处理对skn-1基因缺陷线虫的延寿效果缺失; 但能够增强CL2166线虫的荧光强度; 同时上调sod-5、sod-3、ctl-1、ctl-2、daf-16和skn-1基因的表达水平, 下调daf-2基因的表达水平。结论 铁皮石斛多糖可能通过激活Nrf2/SKN-1和DAF-16途径拮抗氧化应激从而延缓线虫衰老。     

铁皮石斛茎、叶、花功能性成分、抗氧化活性及其相关性

目的：探索铁皮石斛茎、叶、花主要功能性成分的差异性、抗氧化能力大小及抗氧化活性的主要贡献成分。方法：以铁皮石斛茎、叶、花为试验材料,分别采用苯酚—硫酸法、NaNO₂-Al₃+NaOH法、福林酚法和酸性染料比色法对其多糖、总黄酮、总多酚和总生物碱含量进行测定比较,研究茎、叶、花的抗氧化能力,并通过相关性分析确定其主要抗氧化活性成分。结果：铁皮石斛茎、叶、花中均含有多糖、黄酮、多酚和生物碱类成分,但含量差异极显著（P<0.01）,其中多糖含量为茎（31.00%）＞叶（15.04%）＞花（8.11%）;总黄酮和总多酚含量均以花中最高,分别为2.133%和15.71%,叶中次之;总生物碱含量以花中最高,达0.022 3%,为茎中的近4倍;铁皮石斛茎、叶、花均具有较高抗氧化活性,且随着浓度的增大,其对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力逐渐增强,其中花的水提物和醇提物清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC₅₀均最小,说明其氧化活性最大,较接近于维生素C的。相关性分析发现,铁皮石斛茎、叶、花抗氧化活性与总黄酮、总多酚和总生物碱含量呈正相关,与多糖含量无明显相关性,说明总黄酮和总多酚含量对铁皮石斛茎、叶、花的抗氧化活性贡献最大,总生物碱含量的贡献显著。结论：铁皮石斛叶和花同样具有广阔的应用价值和开发前景。     

铁皮石斛多糖多肽的发酵法提取及其抗氧化活性分析

目的 研究一种有效的铁皮石斛多糖多肽提取方法,并分析其基本性质及体外抗氧化活性。方法 以铁皮石斛为研究对象,采用芽孢杆菌发酵法对铁皮石斛进行提取,用蒽酮-硫酸法和双缩脲法分别测定铁皮石斛提取液的多糖和多肽含量,以传统热水浸提法和超声波辅助提取法为对照,通过提取液对自由基清除能力、螯合金属离子能力、抑制亚油酸自氧化能力、抑制红细胞溶血能力、保湿能力等指标,评价芽孢杆菌发酵提取液的抗氧化活性。结果 芽孢杆菌发酵提取法工艺参数为投料比例1:25(g/mL),发酵pH6,发酵温度33.5 ℃,发酵时间46 h,此时多糖提取率为37.21%,多肽含量高达4.43 mg/ kg,分子量主要分布在2000 Da以下,占84.95 %。提取液对羟基自由基(.OH)、DPPH自由基(DPPH.)和 ABTS自由基(ABTS₊^.)有较强的清除能力,Fe₂₊^螯合能力67%、亚油酸抑制率53%、H₂O₂诱导溶血抑制率64.34%、皮肤含水量提高33.57 %。结论 芽孢杆菌发酵法提取铁皮石斛,提取液多糖多肽含量高,具有较好抗氧化性和保湿性,为铁皮石斛在食品和化妆品领域的开发利用提供了一定的理论指导和实验数据参考。     

铁皮石斛多糖不同分级组分对小鼠免疫调节及肠道健康的影响

目的：研究铁皮石斛多糖不同分级组分对小鼠免疫调节及肠道健康的影响。方法：利用梯度醇沉法对铁皮石斛精多糖进行相对分子质量的分级处理。以环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型,通过灌胃铁皮石斛多糖不同分级组分,比较灌胃前、后小鼠胸腺指数、血清和脾脏细胞因子分泌量的变化,探究铁皮石斛多糖不同分级组分对小鼠的免疫调节作用。同时测定模型组与多糖分级组的粪便含水量、pH值和短链脂肪酸含量水平,研究铁皮石斛多糖分级组分对肠道健康的影响。结果：与模型组相比,DOP组和F50S组均能显著提高小鼠胸腺指数,促进IFN-γ、TNF-α、IL-6的分泌,抑制IgE的分泌,在一定程度上引导免疫类型向Th1型偏移,提高小鼠的免疫功能;并能降低粪便pH,提高粪便含水量和SCFAs含量水平,从而促进肠道健康。结论：铁皮石斛多糖不同分级组分均能有效增强免疫低下小鼠的免疫调节作用,并改善其肠道健康,DOP比各分级组分的作用效果好;各分级组分中,相对分子质量最小的F50S作用效果较其它组分更为明显。     

超高压提取铁皮石斛多糖工艺优化及其抗氧化活性分析

目的:优化超高压提取铁皮石斛多糖工艺条件,并分析其基本性质及体外抗氧化活性。方法:以铁皮石斛干粉为原料,优化超高压技术提取铁皮石斛多糖工艺条件,分析传统热水浸提法、超高压法两种提取方法下的铁皮石斛多糖的相对分子量与单糖组成,并比较其体外抗氧化活性。结果:超高压提取铁皮石斛多糖的最佳工艺条件为超高压压力200 MPa,料液比1:25 (g/mL),保压时间5 min,此时铁皮石斛多糖得率为33.3%,比传统热水浸提法提高了128%,且超高压法提取的多糖蛋白含量和相对分子量下降,甘露糖含量提高,对DPPH自由基的清除能力提高。结论:超高压提取的铁皮石斛多糖得率高,体外抗氧化活性较好。     

铁皮石斛多糖超声-微波协同提取条件优化及其抗氧化活性

以铁皮石斛为原料,采用超声-微波协同法提取铁皮石斛多糖。选择液料比、微波时间、微波功率、超声时间为单因素,以铁皮石斛多糖提取率为评价指标,通过响应面试验对超声-微波协同法提取铁皮石斛多糖进行优化。确定最佳工艺参数为液料比50∶1（mL/g）、微波时间120 s、微波功率370 W、超声时间30 min,在此条件下铁皮石斛多糖提取率为30.56% 。根据体外抗氧化活性评价表明,铁皮石斛多糖对羟自由基的清除能力低于维生素C,对α-葡萄糖苷酶表现出明显的抑制能力,具有较好的体外降血糖作用;另外,铁皮石斛多糖对α-淀粉酶也有一定的抑制作用。     

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。     

组培铁皮石斛多糖对自由基清除作用的研究

采用水提法从组培铁皮石斛中提取出多糖,研究组培铁皮石斛中多糖对自由基的清除作用。结果表明:组培铁皮石斛中多糖具有较强的抗氧化能力,对羟基自由基、超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基(DPPH·)均具有良好的清除作用。当多糖质量达到60μg时,其对羟基自由基清除率能达到91.4%,对超氧阴离子自由基的抑制率最高达47.08%;当多糖质量达到700μg时,对DPPH·的清除率达到51.91%。因此,组培铁皮石斛中多糖具有较强的清除自由基的作用。     

烘干温度对铁皮石斛茎多糖抗氧化活性影响的研究

本实验主要研究了不同烘干温度对铁皮石斛茎多糖得率和抗氧化活性的影响.结果表明:不同温度条件下,40 ℃热风烘干后铁皮石斛茎多糖得率最高,达到45.93％且抗氧化能力最强,当溶液浓度为2.5 mg/mL时,对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的消除率分别为46.88％、56.44％、49.02％.说明烘干温度会...     

铁皮石斛复配花茶制作工艺及其功能性研究

以铁皮石斛花为主要原料,将其与菊花、茉莉花进行复配,采用混料设计,以多糖、黄酮、多酚含量为考察指标,结合感官评价进行权重分析,确定铁皮石斛花复配茶的最佳复配比例并研究其体外抗氧化、降血糖活性。试验结果表明,m(铁皮石斛花)∶m(茉莉花)∶m(菊花)=5∶1∶4为最佳复配比例,多糖、多酚、黄酮含量分别为18.89、30.85、51.27 mg/100mL。铁皮石斛花茶与铁皮石斛复配花茶水提物对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基、ABTS自由基清除率IC 50分别为:石斛花茶0.89、3.51、8.76、1.34 mg/mL,石斛花复配茶0.49、4.20、5.70、0.78 mg/mL;铁还原能力测定最大吸光值分别为0.88、1.28。对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶的抑制活性IC 50值分别为:铁皮石斛花茶4.47、3.26 mg/mL;铁皮石斛花复配茶5.86、5.50 mg/mL,制备得到的铁皮石斛花复配茶具有良好的抗氧化能力及一定的降血糖效果。研究结果为铁皮石斛花资源的有效利用及多元化产品开发提供了理论依据,最终得到兼具口感与功能性的铁皮石斛复配花茶,为铁皮石斛复配花茶的规模标准化加工提供理论支撑。     

3 种木耳多糖的抗氧化活性与抑菌能力比较分析

目的：研究玉木耳、黑木耳与毛木耳3 种木耳多糖的抗氧化活性与抑菌能力。方法：利用水提醇沉法获得了3 种木耳的多糖,并测定了其多糖含量;采用分光光度法分别测定了3 种木耳多糖的总抗氧化能力,羟自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和亚硝酸根离子清除能力;同时进行了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌实验。结果：相同提取条件下,玉木耳、黑木耳与毛木耳的粗多糖提取率分别为13.87%、11.26%、7.91%,其中3 种木耳多糖质量分数分别为49.22%、41.50%和37.97%;总抗氧化活性检测结果显示毛木耳多糖的总抗氧化能力最高,黑木耳多糖与玉木耳多糖抗氧化能力相当;其中玉木耳多糖对羟自由基清除能力略强于黑木耳多糖,且二者的超氧阴离子自由基清除能力相当,均强于毛木耳多糖;3 种木耳多糖对DPPH自由基的清除作用较明显,其中玉木耳多糖相对较优,可达80%;此外,黑木耳多糖对亚硝酸根离子的清除能力最好,略优于其他两种木耳多糖。对常见细菌的抑制作用而言,3 种木耳多糖均对大肠杆菌有一定的抑制作用,但黑木耳多糖和毛木耳多糖对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑制作用较弱;仅玉木耳多糖对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有较好的抑制作用。结论：3 种木耳多糖具备各自不同的抗氧化活性与抑菌能力,且差异较为明显。     

鲍内脏多糖的抗氧化活性

为研究鲍内脏多糖的抗氧化活性,采用体外抗氧化实验,评价不同化学组成的鲍内脏多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和·OH的清除作用,并以人体肝细胞LO2建立过氧化氢损伤模型,探讨鲍内脏多糖在细胞水平的抗氧化能力。结果表明:鲍内脏多糖CAVP、AVP1、AVP2具有良好的清除体外自由基能力。多糖CAVP、AVP1、AVP2清除DPPH自由基的半抑制率浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为1.46、1.74、1.55 mg/m L。其清除·OH的IC50分别为7.14、15.27、8.11 mg/m L。另外,细胞模型法评价结果显示,鲍内脏多糖CAVP、AVP1、AVP2在质量浓度0.5~4.0 mg/m L条件下对肝细胞LO2的H2O2氧化损伤有保护作用,3种多糖样品均能显著提高LO2细胞存活率;CAVP(4.0 mg/m L)、AVP1(0.5 mg/m L)和AVP2(0.5 mg/m L)能极显著降低氧化损伤时乳酸脱氢酶的释放;CAVP能极显著提高LO2细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)(4.0 mg/m L)、过氧化氢酶(catalase,CAT)(0.5 mg/m L)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)(0.5 mg/m L)活力;AVP1质量浓度为4.0 mg/m L时,能极显著提高LO2细胞内GSH-Px、SOD活力,显著提高CAT活力;AVP2分别在质量浓度0.5、4.0 mg/m L时极显著提高LO2细胞内CAT活力;在质量浓度为4.0 mg/m L时,3种多糖样品对降低细胞氧化损伤产生的丙二醛(malondialdehyde,MDA)均有显著作用。因此,鲍内脏多糖是一类潜在的抗氧化物,可用于此类功能食品的开发。     

4株羊肚菌胞外多糖含量及其生物活性的研究

为探讨不同羊肚菌菌株胞外多糖的含量及其抑菌、抗氧化活性和对α-淀粉酶的抑制作用是否有差异,以4株羊肚菌(编号为YS-Y、XH-0、XH-2、XH-4)为材料,利用醇沉法提取羊肚菌胞外多糖,并用Sevag法去除蛋白后,测定其胞外多糖含量及其抑菌活性、抗氧化能力和对α-淀粉酶的抑制作用,并将其结果进行对比。结果表明,YS-Y、XH-0、XH-2、XH-44株羊肚菌胞外多糖的含量分别为10.05%、5.80%、19.89%、8.34%;4株羊肚菌具有一定程度的抑菌能力,菌株XH-2的抑菌效果优于其它3株,且对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果最好;4株羊肚菌的还原力、DPPH自由基、ABTS+自由基以及羟自由基清除率都随着质量浓度的增大而增大,当质量浓度达到1.0 mg/mL时,菌株XH-2的还原能力和ABTS+自由基清除能力优于其他3株,其OD700值和EC50分别为0.136和0.56 mg/mL;菌株XH-4的DPPH和羟自由基清除率优于其它3株,其EC50分别为16.68 mg/mL和1.40 mg/mL,且4株羊肚菌的羟自由基清除率均大于VC;菌株XH-2对α-淀粉酶的抑制作用优于其它3株,其EC50为1.55mg/mL。该研究表明羊肚菌胞外多糖具有一定的生物活性,菌株XH-2和XH-4具有更大的药用潜力,可为羊肚菌资源开发提供一定的参考意义。     

铁皮石斛多糖复合酶法提取工艺及其抗氧化性

探讨复合酶法提取铁皮石斛多糖的最佳工艺以及酶解多糖的抗氧化活性。利用单因素及L₁₈(37)正交实验研究了酶配比、酶浓度、酶解温度、酶解时间、料液比及pH对多糖得率的影响,并通过清除DPPH、ABTS自由基研究酶解多糖的抗氧化活性。结果显示酶解最优条件:中性蛋白酶与纤维素酶比例为2:1,酶浓度为10%,料液比为1:120,酶解温度为55 ℃,pH6.0,酶解时间为3 h,在此条件下多糖得率为43.85%±1.8%;酶解多糖对DPPH、ABTS自由基的IC₅₀分别为1.331、0.467 mg/mL,说明酶解石斛多糖具有较好的抗氧化活性。     

多糖中金属离子对其抗氧化活性及抗肿瘤活性的影响

采用水提醇沉法制备香菇、海带、枸杞多糖粗品,Sevage法除蛋白制得初级纯化多糖。利用EDTA-2Na去除多糖粗品和纯品中的金属离子,比较去除前、后多糖抗氧化活性及抗肿瘤活性的变化。结果表明:3种多糖均含有Al、Ca、Mn等多种金属元素,只是含量各不相同。去除金属离子后,多糖对ABTS自由基、DPPH自由基的清除能力均下降,对羟自由基的清除能力变化不一。其中枸杞多糖质量浓度为600μg/mL时抗氧化活性变化最为显著,ABTS自由基清除率由26.31%降至17.25%,DPPH自由基清除率由59.80%降至38.40%。枸杞多糖纯品在去除金属后对人乳腺癌细胞MCF-7的体外抑制活性呈下降趋势。结论:多糖中的金属元素是多糖活性中心构成的一部分,对其活性具有重要影响。     

果蔬发酵液中3株乳杆菌的体外功能特性研究

以果蔬自然发酵液中分离得到的3株乳杆菌（Lactobacillus）为对象,通过测定表面疏水性、自身凝聚率分析乳杆菌的表面特性;以DPPH自由基、ABTS自由基清除能力和铁还原能力为指标,分析3株乳杆菌的体外抗氧化能力差异;以降解胆固醇及亚硝酸盐为指标,评价乳杆菌的功能活性。结果表明:3株菌中,L3的表面疏水性和自身凝聚力均表现良好,分别为57.7%和95.2%（24 h）;3株菌的上清液具有很强的DPPH自由基清除率（>90%）、羟自由基清除率（>68%）及还原能力（>1.0）,其中L1和L3的上清液具有更强羟自由基清除率,近90%,L2则具有较强的抗脂质过氧化能力（>37%）;乳杆菌在48 h内几乎完全降解200 mg/L NaNO₂;3株菌上清液均有较好的胆固醇降解能力（>19%）,其活性物质主要为蛋白质和多糖类物质。综上所述,果蔬发酵液中分离所得的3株乳杆菌表现出了良好的益生特性,可为开发功能性发酵食品奠定坚实的基础。     

槐角多糖抗氧化活性研究

槐角通过超声-复合酶解法水解醇沉得到粗糖,经Sevage试剂纯化得到槐角多糖(sophorae fructus polysaccharides,SFP),再通过DEAE-52纤维素柱分离纯化得次级多糖SFP-1、SFP-2。以槐角多糖SFP、SFP-1及SFP-2为试验材料,采用自由基评定法,对ABTS+自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基进行抗氧化研究,并探究它们对DNA损伤的抑制作用。结果表明,槐角多糖及分离纯化组分(SFP、SFP-1、SFP-2)对4种自由基的抗氧化活性均呈量效关系。在浓度6.4 mg/mL时,对ABTS+自由基清除率均高于99.73%,对DPPH自由基清除率可达到87.05%,对超氧阴离子自由基清除率可达到50.92%,对羟基自由基清除率最高为96.54%,并有抑制DNA开链、解环作用。槐角多糖有较好的抗氧化作用,具有一定的开发价值。