不同来源胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达

根据GenBank上报道的两歧双歧杆菌ATCC 29521的胆盐水解酶基因(BSH)序列和嗜酸乳杆菌NCFM的胆盐水解酶基因(BSHA和BSHB)序列,设计引物通过PCR扩增获得BSH基因,将其连接到表达载体pET28a(+),构建pETBSH表达质粒,经IPTG诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明在分子质量大小约40、43、45kD处有预期条带出现,初步表明蛋白表达成功。重组菌产生的胆盐水解酶水解甘氨胆酸钠产生的甘氨酸经茚三酮比色法分析,表明该重组的胆盐水解酶具有水解活性。     

酸乳体系中乳酸菌胞外多糖与蛋白相互作用研究进展

已有国内外大量的研究结果证明:胞外多糖应该在酸乳凝胶化后开始与蛋白发生作用,作用方式主要有静电作用和空间位垒.酸乳中胞外多糖的性质及添加方式、蛋白的构成及浓度等都会对两者的作用产生影响,进而影响酸乳的质构、黏度、粘弹性、持水力、风味等.文章介绍牛奶中蛋白的稳定体系,以及一般情况下蛋白和多糖相互作用的机理,进一步阐述酸乳发酵过程中胞外多糖和蛋白的作用时间、作用方式、影响因素以及对酸乳品质的影响研究进展.     

乳酸菌胞外多糖的研究进展

本文总结了菌种、培养基成分、温度、pH值、发酵时间等因素对乳酸菌EPS产量的影响;探讨了提高乳酸菌EPS的生物合成量的方法,旨在加深乳酸菌EPS的研究和推动其应用.     

乳酸菌胞外多糖的研究进展

介绍了乳酸菌胞外多糖的生物合成、分离、提纯及结构分析,生物功能特性及其应用。     

乳酸菌胞外多糖免疫活性的研究进展

乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的一种天然高分子化合物。由于其能够改善发酵乳制品风味与质地,并具有多种生理活性,近年来受到国内外学者的普遍关注。根据近年来国内外乳酸菌胞外多糖免疫活性的研究现状,综述了产胞外多糖乳酸菌的种类、产量以及乳酸菌胞外多糖对特异性和非特异性免疫方面的影响,并对乳酸菌胞外多糖免疫调节活性及结构性质之间的构效关系进行了总结,旨在为乳酸菌胞外多糖的进一步开发和利用提供一定的理论基础。     

乳酸菌胞外多糖的研究

综述了乳酸菌胞外多糖的研究,主要包括乳酸菌胞外多糖的生物合成及其遗传调控、发酵生产、多糖的分子结构、理化特性及应用。     

乳酸菌胞外多糖的应用

主要归纳和总结了乳酸菌胞外多糖作为食品添加剂在食品中的应用,以及产胞外多糖的乳酸菌作为″粘性″发酵剂在酸奶和干酪生产中的应用。     

乳酸菌胞外多糖的应用

主要归纳和总结了乳酸菌胞外多糖作为食品添加剂在食品中的应用,以及产胞外多糖的乳酸菌作为″粘性″发酵剂在酸奶和干酪生产中的应用。      

乳酸菌胞外多糖的研究

针对由乳酸菌合成的细胞外多糖 (LABEPS) ,文中就其的生产菌的种类、生物合成的途径及其遗传调控、影响合成的因素等进行了概述 ;对LABEPS的分离纯化、结构鉴定、生产能力、生理功能及其有关研究现状和开发前景进行了综述。     

乳酸菌胞外多糖研究进展以及在食品工业中的应用

胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)是乳酸菌的一种代谢产物,分为同聚多糖和杂聚多糖。在食品工业中常被用作增稠剂、稳定剂以及乳化剂。近年来,EPS因其抗氧化、抗肿瘤、抑菌等活性引起了人们越来越多的关注。文中从EPS的类型与结构、影响EPS产量的条件、EPS的鉴定及提取方法、EPS的生物活性以及在食品工业中EPS的应用对其进行综述。     

蛋白酶基因的克隆与表达研究进展

蛋白酶在各领域的应用愈加广泛,但其大规模工业生产受到诸多因素制约。利用基因工程技术对蛋白酶基因进行改良和克隆表达,开发高产量、高纯度、高活力的蛋白酶资源成为研究的热点。本文对蛋白酶的分类、结构与功能、菌种选育等进行了概述,同时分析了蛋白酶基因在原核和真核生物中的克隆与表达研究进展,并对未来蛋白酶基因工程的发展趋势进行了展望。     

耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%~70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65~70℃;在pH6.0~12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%;Cu²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺和Mg²⁺对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。     

圆弧青霉BD26碱性脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以圆弧青霉BD26总RNA为模板,扩增出774 bp cDNA片段,将该基因片段克隆到表达载体pET-28a(+)上并转化Escherichia coil BL21(DE3),得到重组菌株BL21/ Lip PD。经IPTG诱导,菌体在固体琼脂显色平板上形成明显透明圈。SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子质量约为27 ku。表达条件优化结果表明,当工程菌培养至OD_(600)为0.5时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,在32℃诱导培养1 h,比酶活达29.30 U/mg。     

植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因在大肠杆菌中表达

构建乳杆菌亚硝酸盐还原酶基因的重组质粒并表达。以植物乳杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,连接到表达载体pET-32a(+)上,构建的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,菌体总蛋白经SDS-PAGE鉴定显示重组质粒诱导表达产物有特异性蛋白条带。该表达产物经细菌亚硝酸盐还原酶试剂盒测定显示有明显的酶活性。实验结果为深入研究植物乳杆菌亚硝酸盐还原酶提供有益的参考。     

Thermomyces lanuginosus ZJB09222脂肪酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

Thermomyces lanuginosus脂肪酶(简称TLL)是具有重要商业应用价值的脂肪酶之一。运用RT-PCR技术,从Thermomyces lanuginosus ZJB09222基因组中克隆得到885 bp脂肪酶基因cDNA序列,其结构基因编码蛋白包含292个氨基酸。将脂肪酶基因cDNA序列开放阅读框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了基因工程菌E.coli BL21/pET28b-TLL。诱导表达后SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子量约为32 ku。筛选获得廉价重组菌培养基,表达条件优化结果表明,当OD600约为0.6～0.8时,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,在28℃诱导培养7 h,酶活达到41 U/mL。     

植物乳杆菌DMDL 9010中亚硝酸盐还原酶的基因克隆、表达和纯化

研究了植物乳杆菌DMDL 9010亚硝酸盐还原酶基因克隆、表达及表达产物的纯化。首先以植物乳杆菌DMDL 9010的DNA为模板,利用PCR扩增亚硝酸盐还原酶基因,扩增后nir编码序列大小为1638 bp,再将其编码序列克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化到感受态细胞DH5α,成功构建重组质粒p ET-32a(+)-nir。将重组质粒转化到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21中,在IPTG浓度为1 mmol/L和诱导温度为25℃的条件下诱导4 h后诱导表达NIR蛋白,经诱导后的工程菌能将50μg/m L的亚硝酸盐降解90%以上,利用亲和层析柱Ni sepharose 6 Fast flow进行纯化得到重组蛋白,该重组蛋白经SDS-PAGE电泳后的分子量约为60 KDa。总之,经由植物乳杆菌DMDL 9010克隆出亚硝酸还原酶基因,并成功构建了重组质粒p ET-32a(+)-nir,利用基因工程方法得到的工程菌能有效降解亚硝酸盐,并能利用亲和层析得到高纯度的NIR。     

瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒p UCm-T-LAI,将重组质粒p UCm-T-LAI和表达质粒p ET-Dsb A同时进行双酶切,连接得到重组表达载体p ET-Dsb A-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。     

锰超氧化物歧化酶基因的克隆和在保加利亚乳杆菌中的表达

目的：克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶摹因(50dA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达，以提高该菌对氧的耐受性，同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础。方法：PCR扩增大肠杆菌sodA，将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中，并将该重组质粒pMG36e—sod电转入L6032中表达。用SOD测试龠测定SOD的表达活性，同时对L6032及其重组了在MRS平板上的生长情况及其在有氧条件下的存活情况进行比较，初步探讨SOD在L6032中的活性表达对其氧耐受性的影响。结果：构建了重组质粒pMG36e—sod，经酶切和PCR鉴定与预期完全吻合。核酸测序显示插入的sodA片段能正确编码SOD氨基酸序列。利用电转化成功地将重组质粒导入L6032中，SOD的表达活性约590．5NU/mg prot。SOD的活性表达，能增强保加利亚乳杆菌对氧的耐受性，在有氧条件下重组了的生长和存活率都优于原菌。结论：SodA在保加利亚乳杆菌中获得了成功表达，增强了该菌对氧的耐受性，有利于该菌的开发应用。同时也为下一步SOD发酵奶的研制奠定了实验室基础。     

大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质

以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/(L.min)。     

牛链球菌L-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达

利用PCR方法从牛链球菌(Streptococcus bovis)基因组DNA中扩增出了L(+)乳酸脱氢酶基因(ldh),并将其连接到表达载体pSE380上,得到重组质粒pSEldh,将重组质粒转化到大肠杆菌菌株JM109。利用SDS-PAGE分析ldh表达产物的分子量为36KD,重组菌株的乳酸脱氢酶酶活力为168.2U/mL,最适反应温度25℃,最适作用pH为5.0,重组质粒的稳定性达99.9%。