食品中苏丹红Ⅰ间接竞争ELISA方法的研究

目的 建立食品中苏丹红Ⅰ免疫学检测方法.方法 本室自制获得单克隆抗体,优化反应条件,初步建立检测苏丹红Ⅰ的间接竞争ELISA方法,确定抗原包被浓度为1.00 μg/ml,包被温度为4℃过夜37℃1 h,单抗稀释倍数为1:3200,底物作用时间15 min.结果 检测方法的回归方程和相关系数为:y=-38.541x+131.1,r=0.9841;线性范围为0.053～0.92 μg/L,最低检测浓度为0.018μg/L,平均回收率为84.72%.结论 该方法能够检测样品中苏丹红Ⅰ,具有检测限低、耗时短、成本低的特点,有一定的应用前景.     

苏丹红Ⅰ酶联免疫吸附检测方法的建立

应用抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体12D8建立了间接竞争ELISA方法,用于检测辣椒粉中的苏丹红Ⅰ,最低检出限为4.22 ng/mL,检测范围为7.8～125 ng/mL.用体积分数70%甲醇水溶液提取辣椒粉中的苏丹红Ⅰ(80～4 000 ng/g),回收率为52.3%～110%,变异系数为3.2 %～8.9%.     

苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红竞争ELISA检测方法的初步建立

以4-氨基苯甲酸重氮化后与2-萘酚反应,合成苏丹红Ⅰ号的衍生物（CSDI）,以活性脂法将CSDI与蛋白载体偶联,制备CSDI-BSA免疫抗原与CSDI-OVA检测抗原。以CSDI-BSA免疫Balb／c小鼠,适当免疫后取脾细胞与SP2／0融合,筛得抗CSDI的单克隆抗体细胞株5H3。以该细胞株生产抗体与CSDI-OVA建立CSDI的间接竞争ELISA检测方法,该方法对苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的灵敏度约为0．1ng／ml,IC50分别为1．03、1．13、0．89ng／ml,与其他染料交叉反应率低。该ELISA检测方法灵敏、特异,可用于苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红的快速检测。     

苏丹红Ⅰ号的毛细管电泳安培检测

建立了毛细管电泳安培法测定苏丹红Ⅰ号的方法.考察了缓冲液种类、浓度和pH值,分离电压、进样时间、检测电位等因素对分离检测的影响.以10 mmol/L硼砂盐(pH 9.3)为缓冲液,检测电位1.05 V(vs.SCE),分离电压21 kV,电动进样(12 kV)8 s,苏丹红Ⅰ号在1.13×10-9～1.13×10-7mol/L范围内,浓度与峰面积具有良好的线性关系,回收率为93.5%～102.7 %,检测限为1.13×10-9 mol/L.该方法成功应用于辣椒粉样品的检测,结果令人满意.     

苏丹红Ⅰ号及其在食品中的检测方法研究

对苏丹红Ⅰ号的属性、种类、危害及其国内外检测方法的研究进展进行了详细介绍，从而促进对其有效检测和监管。     

苏丹红Ⅰ结构类似物合成及其人工抗原的制备研究

采用重氮法合成苏丹红Ⅰ的结构类似物,通过活性酯法将其偶联到载体蛋白上制备人工抗原,竞争ELISA方法测定人工抗原的免疫原性。紫外可见光谱、红外光谱和核磁共振鉴定成苏丹红Ⅰ类似物合成成功并顺利偶联到载体蛋白上,免疫原性鉴定证明该人工抗原可刺激BALB/c小鼠产生苏丹红Ⅰ的抗体,表明苏丹红Ⅰ人工抗原制备成功。     

苏丹红Ⅰ号残留检测方法研究进展

对苏丹红Ⅰ号药物性质、作用、危害及其检测方法进行了介绍,比较了各种检测方法的优缺点及研究进展状况,对从事相关研究的人员具有参考作用.     

苏丹红Ⅰ胶体金检测试纸条的研制

目的研制苏丹红Ⅰ胶体金快速检测试纸条。方法用柠檬酸三钠法制备20nm胶体金颗粒,以抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体进行标记,组装胶体金试纸条,并进行测试。结果实验室条件下,试纸条能够快速检测到食品中的苏丹红Ⅰ,最低检测浓度为50ng/L。结论与其他检测方法相比,该检测方法快速、简便。     

基于银镜的高灵敏表面增强拉曼光谱基底制备及其用于苏丹红Ⅰ的检测

利用银氨溶液和葡萄糖反应的银镜反应制备了表面增强拉曼散射(SERS)光谱银镜基底。扫描探针显微镜照片显示该基底表面颗粒较均匀,银粒粒径为100 500nm。将此基底插入含微量孔雀石绿水溶液中,测量吸附孔雀石绿分子的拉曼光谱,增强因子可达3.8×105。采用该基底对苏丹红Ⅰ进行了检测,得到了能够表征其毒性的特征拉曼频移。实验表明,利用表面增强拉曼光谱法检测苏丹红Ⅰ,方便快捷,有望成为苏丹红类物质的有效检测方法。     

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

制备抗沙丁胺醇单克隆抗体,鉴定其特异性并建立间接竞争ELISA检测方法。以合成的沙丁胺醇完全抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选克隆得到稳定分泌抗沙丁胺醇抗体的单克隆杂交瘤细胞,命名为4E4和3A2。经鉴定,两个抗体亚类都为IgG1,其腹水纯化后效价分别达到2·56×105和1·28×105。以效价高且特异性较好的4E4细胞株获得的抗体建立间接竞争ELISA方法,经条件优化后得到标准曲线,检测范围为4·76~84·99ng/mL,IC50为20·12ng/mL,检测限为3·25ng/mL,与克伦特罗交叉反应率为253·62%,与其它结构类似物没有明显交叉反应。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接ELISA方法,可用于开发同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的试剂盒。      

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法

以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC 29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256 000,6E3的效价为1∶128 000,5B10的效价为1∶64 000,1E9的效价为1∶32 000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为Ig G1,6E3的亚型为Ig G2b,其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7株抗体进行特异性检测结果显示,2A7能与3株阪崎克罗诺杆菌(ATCC 29004、ATCC 29544、ATCC 12868)都结合,1E9能与其中两株(ATCC 29004、ATCC 12868)结合,且与其他11株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到10~6 CFU/m L。     

抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立

制备全长和截短的弧菌外膜蛋白K（outer membrane protein K,OMPK）,纯化后的OMPK免疫6～8 周雌性BALB/c小鼠,间接夹心酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测小鼠的血清效价,结果表明全长OMPK重组蛋白制备的血清效价是截短OMPK1重组蛋白制备血清效价的128 倍。通过全长的OMPK重组蛋白制备多株用于检测副溶血弧菌的单克隆抗体,用生物素（biotin）和辣根过氧化物酶对单克隆抗体进行标记。间接夹心ELISA实验结果表明：只有VP3-biotin和VP16-biotin与其他单克隆抗体配对检测不同的副溶血弧菌菌株表现出较高的灵敏度及良好的特异性,并且在检测其他种属20 株菌时无交叉反应。VP16(Fab)-biotin/VP3检测副溶血弧菌时较VP16-biotin/VP3具有更高的灵敏度,该方法用于检测海鲜样品时,VP16-biotin/VP3检测三文鱼（5～10 CFU/25 g）和血蚶样品为副溶血弧菌阳性。本研究开发了一种快速、灵敏、简便的副溶血弧菌间接夹心ELISA检测方法。     

基于单克隆抗体的三聚氰胺ELISA检测方法的建立

建立三聚氰胺直接和间接竞争ELISA检测方法.三聚氰胺(melamine)-BSA免疫BALB/c小鼠,通过融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,制备分泌MEL单克隆抗体(monoclonal antibody)的细胞株;体内诱生腹水制备MEL-mAb.用高碘酸钠法制备MEL-OVA-HRP偶联物并对其活性进行鉴定.分别用M...     

酶联免疫法检测呕吐毒素的方法研究

目的:利用抗呕吐毒素的特异性单克隆抗体和包被抗原,建立间接竞争酶联免疫法(ELISA)来检测谷物及其制品中呕吐毒素含量。方法:通过方阵滴定实验确定呕吐毒素最佳抗体浓度和最佳包被抗原浓度,应用酶联免疫测试盒对谷物及其制品中的呕吐毒素进行定量检测的方法学评价,来确立该方法的各项技术指标。结果:方法的最低检测浓度10μg/L;平均RSD为5.8%;回收率平均值为104%;用该方法研制的测试盒在4℃环境下可稳定6个月以上;检测时间小于2h;结论:该方法简便、安全、灵敏度高、重复性好、特异性强、能定性和定量检测谷物及其制品中的呕吐毒素含量。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

芝麻过敏原油质蛋白O leosins单克隆抗体的制备与鉴定

利用细胞融合技术制备小鼠抗油质蛋白杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。获得10株杂交瘤细胞,分别命名为1B2、2D8、2F3、3A4、3D7、3F8、4A10、4F12、6A12、6E7,利用Ig亚类鉴定试剂盒鉴定各单克隆抗体的Ig亚型,除1B2、3D7、3F8为IgG1类外其余均为IgG2a类型。将杂交瘤细胞株注射入小鼠腹腔获取腹水,应用Protein A亲和层析法对腹水进行纯化。单抗效价有9株在2.0×105以上。ELISA和Western blotting分析表明这些单抗均能特异性识别芝麻过敏原油质蛋白。     

日落黄酶联免疫试剂盒的制备及应用

为了快速准确检测食品中的日落黄,本研究通过羰基二咪唑法,将日落黄与载体蛋白偶联,并使用紫外光谱进行鉴定,结果显示日落黄检测抗原和免疫抗原成功合成;通过免疫小鼠制备了效价高达1:64000以上的抗日落黄单克隆抗体,研制了日落黄ELISA检测试剂盒.试剂盒性能检测分析结果显示,试剂盒标准曲线的线性检测范围为62.50～10...     

弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性

制备弧菌外膜蛋白K(outer membrane protein K,Omp K)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的Omp K免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,小鼠体内诱导制备腹水,用饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱纯化抗体。最终获得能稳定分泌抗Omp K的两株单克隆抗体杂交瘤细胞株Omp K-Mab-4B7、Omp K-Mab-3C5,2株杂交瘤细胞系所分泌的Mab亚类均为Ig G1,效价达1∶128 000,抗体3C5、4B7的敏感度IC50分别为2.5、5.0μg/m L。Western blotting结果显示单克隆抗体可以与本实验室12株副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、ATCC17802、ATCC33847)的外膜蛋白有不同程度的结合反应,与4株溶藻弧菌中的3株(V.alginolyticus A、B、C)外膜蛋白能够较好的结合,与1株鳗弧菌(V.anguillarumMVM)外膜蛋白也有轻微的结合反应,实验制备的单克隆抗体可用于弧菌Omp K的基础研究和快速检测。     

Monoclonal Antibodies to Porcine Thermal-Stable Muscle Protein for Detection of Pork in Raw and Cooked Meats

Four hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies (MAbs) specific to porcine thermal-stable muscle proteins (TSMPs) were developed. The MAbs reacted with three protein bands (20.5, 22 and 24 kD) from raw pork extract; the protein band (24 kD) which was also present in cooked pork was identified as porcine-specific TSMP. Epitope analysis indicated four MAbs recognized same or closely located antigenic sites on the pork TSMP. The developed MAb-based indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) enabled the detection of pork in raw and cooked heterogeneous meat mixtures as low as 10 g/kg. The curvilinear relations of second-degree polynomial (r² > 0.995) between pork concentrations and ELISA responses enabled quantifying degree of adulteration of pork in meat products.