分步酶解法制备菜籽肽及其分子量分布与抑制ACE活性关系研究

选取胰蛋白酶和Flavourzyme风味蛋白酶,采用超声波辅助分步酶解法制备菜籽肽;测试不同条件下的水解度、混合肽分子量分布和ACE活性抑制率。结果显示随着酶解液的水解度提高,混合肽中小分子量(3ku以下)的可溶性肽含量不断提高,ACE活性抑制率也不断升高,也说明使用该方法制备的菜籽肽具有ACE活性抑制作用。同时,这一结果有助于菜籽蛋白的开发将更加广泛。     

分步酶解法制备菜籽降血压肽

以菜籽蛋白为原料,用两种蛋白酶将其分步水解制备降血压肽。从4种酶的两两组合中筛选出了最佳酶组合碱性蛋白酶和中性蛋白酶,采用紫外检测法对酶解产物中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性进行测定。对酶解工艺进行优化,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计试验,运用Design-Expert软件处理,建立制备菜籽降血压肽的三元二次回归正交模型。结果确定最佳酶解条件为:碱性蛋白酶和中性蛋白酶为分步水解的酶、底物的质量浓度5.65g/100mL、加酶量6.5%、酶解温度54.9℃,ACE抑制率理论值为50.303%,在此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为50.12%的菜籽降血压肽。     

分步酶解法制备黄浆水活性肽

黄浆水是传统豆制品点脑成型过程压榨出的废弃物,富含低聚糖、蛋白质等营养成分。该研究通过比较酶种类及用量、酶解温度、酶解时间对黄浆水蛋白质水解度的影响,采用正交试验优化获得黄浆水短肽最佳分步酶解工艺：（1）酸性蛋白酶加酶量2 000 U/g,pH 4.0,温度55 ℃,水解2 h;（2）中性蛋白酶8 000 U/g,pH 6.0,温度50 ℃,水解6 h。在此条件下进行验证,水解度可达25.95%,血管紧张素转化酶体外抑制活性达92.0%。采用酸性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解黄浆水制备短肽,制备条件温和,水解度高,可为豆制品加工废弃物的高值化利用奠定基础。     

超声波辅助酶解法制备豆粕ACE抑制肽的工艺优化

该试验采用超声波辅助酶解法,研究豆粕血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备工艺条件,并通过响应面优化单因素试验结果。选用5种蛋白酶分别水解豆粕,以ACE抑制率为指标,挑选出最适蛋白酶,结果表明：碱性蛋白酶的ACE抑制率最大,所以选择碱性蛋白酶进行酶解。为提高ACE抑制率,加入超声波预处理,最终确定最佳工艺条件为在超声温度73℃、超声时间39 min、料液比1∶6(g/mL)条件下,再加入7.20%碱性蛋白酶水解3.6 h,在此条件下所制备的豆粕ACE抑制肽的ACE抑制率为61.02%。     

超声波辅助酶解制备猪肩胛骨降血压肽的工艺及酶解效果比较

采用超声波辅助风味蛋白酶酶解制备猪肩胛骨降血压肽并与常规酶解(未经超声处理的酶解)所得酶解液做比较。以酶解液的血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为主要指标,考察超声功率、超声时间、超声温度、超声工作间隙、超声后酶解时间对酶解液ACE抑制率的影响,并在此基础上进行响应面优化实验。通过实验,获得的最佳超声条件为:超声时间25min,超声功率717W,超声温度40℃,超声工作间隙比1∶1.5(s/s),酶解时间3h,在该条件下,得到的酶解液ACE抑制率理论值为75.29%。此条件下制备出ACE抑制率为75.58%的猪肩胛骨降血压肽,比常规酶解提高了10.27%。半数抑制浓度(IC50)值下降32.8%,酶解时间缩短1.5h。      

超声波辅助酶解制备猪肩胛骨降血压肽的工艺及酶解效果比较

采用超声波辅助风味蛋白酶酶解制备猪肩胛骨降血压肽并与常规酶解(未经超声处理的酶解)所得酶解液做比较。以酶解液的血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为主要指标,考察超声功率、超声时间、超声温度、超声工作间隙、超声后酶解时间对酶解液ACE抑制率的影响,并在此基础上进行响应面优化实验。通过实验,获得的最佳超声条件为:超声时间25min,超声功率717W,超声温度40℃,超声工作间隙比1∶1.5(s/s),酶解时间3h,在该条件下,得到的酶解液ACE抑制率理论值为75.29%。此条件下制备出ACE抑制率为75.58%的猪肩胛骨降血压肽,比常规酶解提高了10.27%。半数抑制浓度(IC50)值下降32.8%,酶解时间缩短1.5h。     

微波辅助分步酶解紫苏饼粕蛋白制备鲜味肽

在微波辅助的条件下,利用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步对紫苏饼粕蛋白进行水解,应用正交试验确定了最佳的酶解条件。通过Sephadex G-15凝胶层析、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法和电子舌技术对酶解液成分与鲜味的变化进行了表征。结果表明,在微波功率400 W条件下,第1步碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、p H 10.0、微波温度60℃、微波时间35 min;第2步风味蛋白酶的最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、p H 6.5、微波温度65℃、微波时间40 min,分步酶解最终水解度为44.86%。最后通过凝胶层析、RP-HPLC与电子舌表征,证明微波辅助分步酶解法快速、高效,且与单独酶解所得产物相比,其产物鲜味改善明显。     

分步酶解制备鲢鱼抗氧化肽的工艺研究

用分步酶解法制备鲢鱼抗氧化肽,首先从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶中筛选出碱性蛋白酶作为第一步酶解用酶,以水解度作评价指标,并得到酶解工艺条件:底物浓度15%,pH9.0,温度50℃,加酶量为24AU/kg。再从剩下的三种酶中筛选出胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配,作为第二步酶解用酶,用响应面法进一步优化酶解工艺,考虑到成本和工艺的要求,最终确定的酶解工艺为:碱性蛋白酶水解时间为59.12min,胰蛋白酶水解时间为82.24min,两种酶的添加比例为1:1.48,即碱性蛋白酶添加量为24AU/kg,胰蛋白酶的添加量为35.5AU/kg。最终得到的鲢鱼抗氧化肽可溶性氮70.84%,多肽69.38%,水分4.21%,灰分25.67%;多肽浓度为2mg/mL时对DPPH自由基清除率为19.33%。      

菜籽肽制备工艺的研究

采用脱脂菜籽饼为原料,分别在碱性蛋白酶、中性蛋白酶、Flavourzyme、Protamex、Alcalase最适条件下进行单因素水解试验,以辅助TCA法测定多肽得率,并利用L9(33)正交试验,探讨了菜籽饼水解温度、加酶量和料液比对多肽得率的影响。结果表明,单因素试验得到多肽得率最高的酶为Alcalase;影响Alcalase水解菜籽饼多肽得率的因素主次顺序为:加酶量>水解温度>料液比;最佳水解条件为:温度60℃,加酶量3 000 U/g,料液比3%。在最佳条件下多肽得率为53.19%。     

液态发酵法制备菜籽ACE抑制肽菌种的筛选

采用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、黑曲霉、白地霉、产朊假丝酵母、宇佐美曲霉、雅致放射毛霉对菜籽粕进行液态发酵,以氮溶解指数、SN-TCA、氨基酸态氮、肽得率和ACE 抑制活性为评价指标,对液态发酵生产菜籽ACE 抑制肽的菌种进行筛选。结果表明：在上述菌种中枯草芽孢杆菌液态发酵所得肽得率最高,并且具有最高的ACE 抑制活性,菌种优势明显,是液态发酵菜籽粕生产ACE 抑制肽的优势菌种。     

酶解菜籽粕制备多肽的研究

本试验以菜籽粕为原料,从四种蛋白酶中挑选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶对菜籽粕进行同步复合酶解。分别考察了不同的加酶量、酶比、料液比和时间对多肽得率的影响,并利用响应面分析法对混合蛋白酶水解菜籽粕的条件进行了优化。结果表明,在加酶量固定为4500 U/g,温度50℃,pH为8.0,料液比1:8及碱性蛋白酶:中性蛋白酶为3:1条件下酶解6.5 h,可使多肽得率达到54.89%。     

菜籽粕分步酶解制备水解产物的研究

以脱脂菜籽粕为原料,水解度为考察指标,采用碱性蛋白酶与中性蛋白酶分步酶解法制备复合氨基酸及小肽等水解产物。通过正交试验确定碱性蛋白酶的最佳酶解工艺参数为：温度50℃、pH10.5、加酶量3250U/g、液料比15:1、时间1.5h;中性蛋白酶的最佳酶解工艺参数为：温度45℃、pH9、加酶量4500U/g、时间2h。制备的复合氨基酸及小肽等水解产物总水解度和氮收率可达25.66% 和86.8%;水解产物在pH3～7 范围内,氮溶解指数高于72.19％。三氯乙酸氮溶解指数达85.67%,且产物中植酸、单宁等主要的抗营养因子的含量明显降低。     

超声波辅助酶法水解玉米蛋白的研究

本实验对玉米蛋白在碱性条件下的酶解工艺进行研究,提出一种超声波预处理和碱性蛋白酶酶解相结合的方法,可在短时间内提高产品得率。通过单因素试验及正交试验的考察,超声波辅助酶法水解玉米蛋白的最佳工艺为：超声波预处理时间4min、底物浓度2%、酶浓度5%、pH10.5、温度55℃。在此条件下,玉米蛋白的水解度为61.47%。     

水相酶解法同时提取菜籽油与菜籽蛋白研究--菜籽蛋白质酶水解的工艺过程及动力学

以Alcalase蛋白酶在温度50％、pH8．0条件下，对以水剂法从菜籽中提取的含油菜籽蛋白酶解处理，研究表明：含油菜籽蛋白乳液的固形物颗粒度对酶反应速率有明显影响，总的趋势是颗粒度越小，酶促反应速率越大；酶催化水解速率随水解进程呈指数下降，在反应过程中过高的底物浓度会引起酶的抑制失活，在此基础上由实验数据推导出描述催化水解含油菜籽蛋白的动力学方程，由此通过控制酶与底物浓度之比、反应时间，可以控制水解作用的程度，指导和优化酶促反应。     

酶水解和碱提取相结合制取弱酸性pH下可溶菜籽蛋白水解物

采用碱性蛋白酶Alcalase水解菜籽粕并结合pH 8~10的碱液进一步提取,制取弱酸性pH下可溶菜籽蛋白水解物。研究结果表明,菜籽蛋白水解后的灭酶方法将影响蛋白水解物的提取率,使用降低pH灭酶法的提取率大于加热灭酶法。当菜籽蛋白酶解水解度为10%及碱提取的pH为9时,得到的水解物的蛋白提取率为73.4%,该水解物可在弱酸性pH下溶解,经过膜分离等进一步处理除去硫甙等抗营养因子和无机盐后,有望作为碳酸饮料等酸性食品的营养强化剂使用。     

脱脂菜籽粕中蛋白质的分步酶水解研究

以脱脂菜籽粕为原料，对碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解其中的蛋白质进行了研究。结果表明，在碱性蛋白酶和风味蛋白酶的最适作用温度和起始pH值下，先用3000U／g碱性蛋白酶水解4h后，再用3000U／g的风味蛋白酶水解4h，水解产物的水解度和氮收率分别为10％和91．14％。水解产物的口味平淡，三氯乙酸氮溶解指数为90．18％。     

复合酶水解菜籽清蛋白的研究

以菜籽清蛋白为原料，选择碱性蛋白(Alcalase)和复合风味酶(Flavourzyme)分步水解制备菜籽清蛋白水解物。通过单因素实验和响应面法分析，确定了碱性蛋白酶(Alcalase)酶解菜籽清蛋白的最佳水解条件为：pH8．0、反应温度50．1℃、酶用量0．38AU／g、底物浓度4．87％。在此条件下水解1h，水解度为14．72％。分步酶解的工艺条件为：Alcalase酶反应1h后，加入50LAPU／g Flavourzyme酶，50℃下酶解2h，酶解液水解度可达28％。氨基酸分析结果表明，菜籽清蛋白水解物可作为优质食品添加剂用于食品工业。     

高压均质对菜籽蛋白功能性质和酶解效果的影响

为了了解高压均质技术对菜籽蛋白的影响,采用不同压力(306、0、901、201、50 MPa)对菜籽蛋白溶液进行均质处理,并分析了处理前后菜籽蛋白功能性质和水解度的变化。结果表明:高压均质可提高菜籽蛋白的溶解度、乳化性、起泡性和泡沫稳定性等功能性质,且随着均质压力的升高其乳化性、起泡性和泡沫稳定性均增强;同时高压均质对蛋白质的氮溶指数、乳化稳定性也有显著的影响;此外,高压均质对菜籽蛋白的酶解也起到了促进作用,且随着压力的增大作用效果越明显。