豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

实时荧光PCR定性定量检测混合食用油脂中的花生油成分

为鉴别鉴定花生油在食用油脂中的存在与否及其含量,研究了定性定量检测花生特异性基因片段的分子生物学检测方法。结果表明,生花生需加热处理后再提取DNA才能作为PCR扩增的模板,食用油脂中可提取出用于定性定量PCR的DNA,花生的Arah1基因是具有花生种属特异性的基因,采用实时荧光PCR方法检测Arah1基因片段可定性定量检测混合食用油脂中的花生油成分。     

实时荧光PCR技术快速检测奶制品中掺入的大米源性成分

目的:建立基于实时荧光PCR技术的奶制品中掺入大米源性成分的快速检测方法。方法:以水稻的根部表达基因(gos9)为靶基因设计特异性引物和探针,经特异性实验和灵敏度实验验证引物探针可行性,并经模拟含大米奶粉及市售奶类制品检测验证其实际检测能力。结果:该引物探针体系只针对大米DNA进行扩增,与奶类主成分牛、羊及其它谷类和植物性食物DNA均无交叉扩增;最低能检测到0.1ng的大米DNA,对含大米粉的模拟混合奶粉样品,检出限可达0.1%(W/W)。将其应用于21份市售奶制品样品检测,对含大米源性成分的奶制品扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:该实时荧光PCR检测体系具有快速、特异、灵敏的优点,可以准确鉴定出奶制品中大米成分,适用于奶类中掺加大米源性成分的检测。     

实时荧光PCR在鉴别鸡精中鸡源性成分的应用研究

文章利用实时荧光PCR方法,以鸡的cytb基因为目的基因,设计了一套特异性的引物和探针,对鸡精中的鸡源性成分进行定性、定量分析研究.结果表明,该套引物和探针能特异性的检测鸡精中鸡源性成分;荧光PCR检测的灵敏度为0.002％ (W/W),检测时间为3h.此方法具有准确、快速、高效的特点,为食品中鸡源性成分的检测提供了新方法.     

羊乳制品中牛乳成分的荧光定量PCR检测方法研究

选取牛、羊线粒体12S rRNA基因的特异性引物,以新鲜牛、羊乳样品提取模板DNA,建立了基于DNA结合染料(SYBR Green I)的实时荧光定量PCR方法,用于羊乳制品中牛乳成分的掺假鉴别检测。结果表明,该方法最低可检出新鲜羊奶中掺入2.5%的牛乳成分,并应用于11份市售羊乳制品样本中的牛、羊源性成分的鉴别。基于DNA结合染料的定量PCR检测无需电泳分离和设计标记DNA探针,具有快速、灵敏、低成本和高通量等优点,可以作为羊乳及其深加工制品中牛乳源性成分掺入检测的有效手段之一。     

植物油DNA的高效提取方法研究

针对植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA的方法。实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S启动子进行PCR、LAMP和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。结果表明:该方法提取的DNA质量可靠,采用PCR、LAMP和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S启动子。因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。     

进口玉米酒糟粕中转基因品系检测方法的比较研究

以美国进口玉米酒糟粕(DDGS)中转基因玉米品系MIR162的实时荧光PCR检测方法为研究内容,分别采用3种常见商业化试剂盒提取基因组DNA,采用3个检测标准中规定的实时荧光PCR方法进行MIR162定性检测,比较了9种方法组合在检测玉米酒糟粕中转基因成分的检测技术性能。结果表明,使用TIANGEN?植物基因组DNA提取试剂盒和《SN/T 1196—2012转基因成分检测玉米检测方法》规定的荧光PCR方法,检测灵敏度最高,符合现行检验监管法规要求。考虑到大宗农产品及其加工产品的国际贸易普遍存在转基因成分低水平混杂的情况,进一步探讨了进口农产品转基因成分检验监管分类管理的必要性,提出针对不同风险级别的进口农产品采用灵敏度相适宜的检测方法。     

腊肠中的植物成份的PCR检测方法研究

本文建立了应用PCR技术鉴别腊肠中植物成分的方法.通过前处理与酚仿抽提DNA的方法相结合,建立了一种快速简便的从腊肠中提取DNA的方法,整个DNA提取的过程时间为2 h左右,提取的DNA浓度和A260/A280均达到了PCR的要求.通过PCR分析,发现从腊肠中提取DNA完全可以进行PCR检测,并且该方法可定性检测腊肠中的植物成分.     

大豆粉转基因成分能力验证样品的检测分析

目的 提高实验室对转基因大豆定性检测的准确性和检测人员专业技术水平, 增强实验室竞争力。方法 通过核酸蛋白仪器分析法和单重实时荧光PCR (simplex real-time fluorescence PCR)法对样品内源基因扩增的循环阈值的影响来比较2种方法, 分析2种DNA提取试剂盒的提取质量。对标准SN/T 1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》扩增反应体系中DNA模板量进行优化后, 对样品进行检测。再依据标准SN/T 1202-2010《食品中转基因植物成分定性PCR检测方法》的要求, 对样品进行检测。最后对2个标准的检测结果进行比对。结果 通过内源基因扩增循环阈值的数据确认, 更能准确反映试剂盒提取的DNA是否满足后续外源基因的分析检测要求。2种标准方法对19-N578和19-M913 2个待测样品的检测显示3种外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS均为阴性, 19-N578和19-M913待测样品均为非转基因大豆。结论 本次能力验证获得满意评价。DNA提取质量的评估, 体系中DNA模板量的优化, 检测方法的选择和实验的质量控制都是影响能力验证结果的重要因素。     

太平洋无须鳕鱼及其制品的PCR鉴定

目的建立一种SYBR Green荧光PCR法定性检测太平洋无须鳕鱼成分的分析SYBR Green荧光PCR定性检测方法。方法根据太平洋无须鳕鱼线粒体细胞色素氧化酶CoxⅠ基因中的保守基因序列设计一对太平洋无须鳕鱼特异性引物,通过SYBR Green荧光PCR法进行PCR扩增反应,可对DNA提取试剂盒提取的太平洋无须鳕鱼成分DNA进行特异性检测。结果该SYBR Green荧光PCR定性检测方法的引物对于太平洋无须鳕鱼成分的检测特异性良好;方法的灵敏度分别为0.06 ng/μL太平洋无须鳕鱼DNA和质量分数为0.01%太平洋无须鳕鱼肉粉。通过对市售太平洋无须鳕鱼片、太平洋鳕鱼片和太平洋无须鳕鱼肝油的检测,该方法可检测出鱼片中的太平洋无须鳕成分。结论该检测方法特异性强,灵敏度高,能够用于食品中太平洋无须鳕鱼成分的真实性鉴别。     

近红外光谱法检测奶粉掺假

目的建立近红外光谱法结合Adulterant Screen算法快速鉴别奶粉中大豆蛋白和尿素掺假的方法。方法采用近红外光谱仪获得奶粉未知样的光谱曲线,再用Adulterant Screen算法以及全数据库奶粉分类模型和既定类型的掺假物模型对曲线主要成分和掺假成分进行分析。结果该方法对一定浓度大豆蛋白和尿素掺假奶粉样可以实现掺假鉴别,大豆蛋白和尿素掺假奶粉样的掺假判别限分别为0.3 g/100g和0.2 g/100g,掺假物正确识别限分别为0.5 g/100g和0.8 g/100g。结论利用近红外光谱法结合Adulterant Screen算法可以快速鉴别奶粉中大豆蛋白和尿素的掺假。     

Qualitative and quantitative identification of adulteration of milk powder using DNA extracted with a novel method

The extraction of high-quality DNA from processed dairy products is often the crucial step in an authentication process by PCR-based methods. In this study, we optimized a novel DNA extraction method for milk powder and used the extracted DNA for identification of milk powder based on PCR analysis. The DNA quality was assessed by amplifying target sequences from mitochondrial genes, as well as by monitoring the yield, purity, and integrity of the extracted DNA. In addition, a laboratory adulteration model of milk powder was detected by PCR-based methods (PCR and real-time PCR) using primers targeting the mitochondrial 12S rRNA gene. Results showed that a sufficient amount and quality of DNA could be isolated from milk powder with this method. Both PCR and real-time PCR detection of cow milk compositions in goat milk powder further confirmed the DNA extracted with this extraction method could be widely used in addressing milk powder adulterant by a PCR-based method.     

DNA-based qualitative and quantitative identification of bovine whey powder in goat dairy products

As one of the main ingredients in some milk powders, whey powder is sometimes added to pure goat milk products, which can cause health risks, economic fraud, and unfair competition of food industries. This study is the first to explore qualitative and quantitative methods to identify adulteration of bovine whey powder in goat dairy products based on DNA. We extracted DNA from whey powder using a modified DNA extraction method; this exhibited good quality and integrity, with purity of 1.53 to 1.75 and concentration of 122 to 179 ng/μL. Conventional PCR and real-time PCR were compared for qualitative detection of bovine whey powder; real-time PCR demonstrated sensitivity of 0.01 ng/μL, which was higher than the 0.05 ng/μL detected by the conventional PCR method. Furthermore, real-time PCR was conducted for DNA quantitative detection, with good linearity (R² = 0.9858) obtained for bovine whey powder contents from 0.1% to 30%. Relative error decreased with increase of the mixing proportion of whey powder; the coefficient of variation above 0.1% of the mixing ratio was close to or less than 5%; and the relative standard deviation of repeatability results was less than 5%. Considering the economic costs of testing, conventional PCR could be performed first, and samples with obvious intentional adulteration detected can be further accurately quantified by real-time PCR. Overall, this research provides a realistic and effective method for qualitative and quantitative identification of bovine whey powder in goat dairy products, thus laying a good foundation for verification of goat dairy product label claims and industrial control.     

Bovine milk powder adulteration with vegetable oils or fats revealed by MALDI-QTOF MS

Matrix-assisted laser desorption/ionisation-quadrupole time of flight mass spectrometry (MALDI-QTOF MS) allowed detection of bovine milk powder adulteration with vegetable oils or fats with high speed and reliability, requiring little sample preparation (n-hexane extraction) and no prior separation procedures. This technique was also able to identify the adulterated employed in this fraud. Hydrogenated soybean oil addition in bovine milk powder sample generate a similar TAG profile to that observed on adulterated milk samples apprehended by the Brazilian Federal Police. In this sense, a robust method for high throughput forensic screening of milk powder adulteration by exogenous oils and fats is showed.     

基于乳清蛋白的骆驼乳中掺假牛乳的检测及热处理对方法的影响

利用超高效液相色谱（ultra-high performance liquid chromatography,UPLC）技术,建立一种以牛β-乳球蛋白为掺假标识物的检测方法,用于定性定量检测骆驼乳中掺假的牛乳,并且探讨不同热处理方式对掺假标识物的影响,以期满足不同商品化驼乳制品的检测需求。结果表明：该方法能有效地检测鲜驼乳、巴氏杀菌驼乳以及驼乳粉中掺假的牛乳,3 种类型掺假乳样本的定量检测回归方程线性良好,线性相关系数（R2）分别为0.997 9、0.996 9和0.997 8;鲜驼乳、巴氏杀菌驼乳和驼乳粉中掺假牛乳的检出限分别为2%、3%和5%,可满足检测需求;利用该方法在10 种不同品牌市售纯驼乳粉中检测出4 种掺假驼乳粉产品。UPLC法可以有效地检测骆驼乳及其制品中掺假的牛乳,为骆驼乳行业的掺假检测提供一定的技术方法支持。     

核磁共振波谱技术在食品掺假鉴别中的应用研究

核磁共振波谱技术具有快速无损、操作简单及重复性好等优点,近年来被广泛应用于食品掺假鉴别领域。利用核磁共振技术中的低场核磁、定量核磁以及杂核核磁等技术能够对掺假不同成分的牛乳(掺水、食盐、尿素、豆浆及复原乳等)、掺假低价值油(大豆油、玉米油等)的橄榄油、掺假的高价值米、蜂蜜、红酒等进行检测,结合统计学分析方法,包括主成分分析法、偏最小二乘判别法和相似分类法等可以实现对这些食品掺假成分的有效鉴别。本文就近年来核磁共振技术在国内外食品掺假鉴别中的应用研究进行综述,以推动核磁共振技术在食品质量安全检测领域的进一步应用,并为其它领域的掺假鉴别提供新的思路和方法。     

基于多重荧光PCR检测的肉及其制品中鸭DNA成分的鉴别方法

针对现有肉制品中鸭DNA成分检测方法不能检测番鸭DNA成分的问题,通过下载番鸭、家鸭及其相近物种的12SrDNA序列,使用CLUSTAL X2进行序列比对,筛选特异性序列,设计了一对通用引物及两条番鸭、家鸭特异性探针,构建了可同时检测番鸭、家鸭DNA成分的实时荧光PCR方法。结果表明:最终构建的检测方法可在掺伪量为0.1%的情况下,检测出样品中的家鸭或番鸭DNA成分。该方法相比普通PCR或单重荧光PCR检测方法节省了劳动力,提高了检测效率,补充了现有检测方法的不足,为更有效地识别掺伪肉类提供技术支持。     

GNM C7-8实时荧光PCR系统对掺假肉制品中多种动物源性成分的同时检测

应用GNM C7-8实时荧光PCR系统,同时快速检测掺假肉制品中多种动物源性成分。将牛肉粉、驴肉粉、鸵鸟肉粉和羊肉粉4组不同肉粉中分别混入猪肉粉、鸭肉粉、马肉粉、鸡肉粉和狐狸肉粉中的2~3种肉粉,制备人工模拟掺假肉制品。通过GNM C7-8实时荧光PCR和ABI7500荧光PCR方法,对上述四种掺假肉制品进行多种动物源性成分检测和比较。结果表明,GNM C7-8实时荧光PCR方法与ABI7500荧光PCR方法从掺假肉制品中检测猪、鸭、马、鸡和狐狸5种成分的循环数一致,分别是31、31、29、32和25,但基于八模块设计的GNM C7-8实时荧光PCR方法能同时检测四种掺假肉制品中不同动物源性成分,检测时间更短。因此,GNM C7-8实时荧光PCR系统的八个模块能够独立运行,互不干扰,无交叉污染,能够实现对掺假肉制品中多种动物源性成分的同时快速检测,为肉制品掺假检测提供强有力的方法支持。     

2种用于检测市售核桃露(乳)饮品中花生、大豆成分方法的比较分析

摘 要: 目的 比较实时荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法在核桃露(乳)饮品中检测花生和大豆成分的灵敏性的差异。方法 应用实时荧光定量PCR方法检测样本DNA的核桃、花生和大豆源性成分, 应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测样本的花生和大豆特征蛋白成分。结果 加热处理对实时荧光PCR和ELISA法检测花生和大豆的结果均有显著性影响。实时荧光定量PCR方法检出2个品牌4批次样本含有花生源性, 3个品牌的6批次样本含有大豆源性; ELISA方法除检出这些批次含有花生和大豆源性成分外, 另检出3个品牌5批次样本含有大豆源性成分。ELISA方法与实时荧光定量PCR方法的大豆检测结果差异主要集中在低蛋白浓度样品中, 这与2类方法的检出限不同有关。结论 鉴于2类方法检测结果在高浓度水平的高度一致性, 说明实时荧光PCR和ELISA方法对花生和大豆源性成分检测结果均具有很高的可靠性。     

肉制品中羊源性成分的定性和定量检测

通过检测肉制品中DNA的来源进行动物源性检测是打击鲜肉及加工肉制品制假掺假的重要技术手段。依据GB/T 25165—2010《明胶中牛、羊、猪源性成分定性检测方法 实时荧光PCR法》合成用于TaqMan 实时荧光聚合酶链式反应的引物和探针,利用鲜肉及加工肉制品进行羊源性成分定性和定量检测方法研究。首先利用12 种不同动物鲜肉组织的DNA检测方法的特异性,然后以羊源DNA梯度稀释液为模板进行灵敏度实验,最后在加工肉制品中检测方法的适用性和定量检测能力。结果表明：此方法具有羊源性成分检测特异性,对其他动物来源的鲜肉DNA均无扩增信号,可以检出羊肉和猪肉混合样品中0.1%的羊肉;方法灵敏度高,可以检出10 pg的羊源DNA;方法适用性广,可以对加工肉制品（羊肉干）进行羊源性成分的定性和定量检测。