细菌胞壁破碎条件优化及高肽酶菌株的筛选

为构建细菌总肽酶活力的测定方法,筛选出肽酶高产的益酵细菌,采用单因素试验和L9(34)正交试验,以反应体系中游离氨基酸总量为肽酶活力指标,对细菌细胞破碎条件进行优化并测定供试菌株的总肽酶活力。结果表明,超声-酶解法破碎细菌细胞的最佳条件为:溶菌酶添加量200μL、超声功率400 W、时间4 min、时间间隔3 s。在此条件下测定153株革兰氏阳性杆菌的总肽酶活力,筛选出肽酶高产革兰氏阳性杆菌11株,分别是DF2-1、ZM1-1、ZM2-1、ZM3-1、DF3-1、DF3-2-1、ZMJ-5、ZMJ-2-6、ZMJ-1-1、DFM-4和WCF-2。     

超声波破碎法提取瑞士乳杆菌氨肽酶条件的优化

目的：确定超声波破碎细胞提取瑞士乳杆菌氨肽酶的最佳条件。方法：采用单因素试验和响应面法对菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间进行研究。结果：菌体浓度、超声波破碎功率、破碎时间对超声波破碎程度都存在一定的影响,其中破碎时间影响最为显著。超声波破碎提取氨肽酶的最适条件为菌体浓度0．0238g／ml,破碎功率300W,破碎总时间26min（超声3s,间隔5s）。破碎后得到粗酶液总酶活力为72．99U。结论：采用超声波破碎方法可以较好地提取氨肽酶,运用响应面分析法优化超声波破碎条件是可行的。     

酵母菌谷胱甘肽合成能力比较及催化条件优化

试验收集培养了9株酵母菌,分别测定他们的细胞生物量和胞内谷胱甘肽(GSH)含量,酿酒酵母SP004细胞干重达到11.39g/L,啤酒酵母TS013胞内GSH含量达到1.5282mg/g湿细胞;验证考察了4种不同提取方法对细胞内GSH含量测定的影响,结果表明,温差破碎法提取效果较好.同时比较9株酵母菌催化合成GSH的能力,结果显示,絮凝酵母SP5 GSH合成酶活力相对较高,酶活达到2.385mg/g湿细胞,每克湿细胞催化前体氨基酸(AA)合成GSH转化率为7.76％.用单因素试验和正交试验分析法研究不同反应液体积与菌体量比、硫酸镁浓度、磷酸钾缓冲液浓度以及葡萄糖浓度对絮凝酵母SP5细胞催化前体AA合成GSH的影响,结果表明,合成GSH的适宜条件为:谷氨酸60mmol/L、半胱氨酸20mmol/L、甘氨酸20mmol/L、七水合硫酸镁20mmol/L、葡萄糖0.5mol/L、pH值为7.0磷酸钾缓冲液100mmol/L,30℃下,160r/min,振荡反应时间6h.在此条件下,絮凝酵母SP5细胞GSH合成酶活力平均达到2.9498mg/g湿细胞,每克絮凝酵母SP5湿细胞催化前体AA合成GSH的转化率平均为9.60％.     

从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化

建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件进行优化。结果表明：在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下,超声破碎条件为超声破碎功率450W、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s),此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/L PMSF,虽对细胞破碎率并无显著影响,但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。     

高产S-腺苷甲硫氨酸酵母菌株的筛选

从土壤和酒曲中对产S-腺苷甲硫氨酸的酵母菌株进行了筛选,通过HPLC外标法测定得到8株产量较高的酵母菌株。对高氯酸细胞破壁和酵母细胞水解作用条件进行优化,确定了高氯酸提取S-腺苷甲硫氨酸的理想条件为2.5mol/L高氯酸10mL,时间为5h,菌体量为0.6g。     

一株高产乙酸乙酯酵母的鉴定及产酯条件的研究

以不同酒曲中筛选出的一株产乙酸乙酯能力较强的酵母Y2为研究对象,利用磷脂脂肪酸分析和分子生物学方法对其进行鉴定,通过单因素试验分别考察培养方式、发酵时间、发酵温度和糖化液糖度4个因素对酵母Y2产酯能力的影响,采用正交试验和验证试验对酵母Y2的产酯条件进行优化。结果表明,酵母Y2为异常毕赤酵母（Pichia anomala）,其脂肪酸成分以18∶1ω9c为主;发酵温度和发酵时间对酵母菌株Y2产酯量具有显著性影响（P＜0.05）,优化后的产酯条件为：发酵温度28 ℃,高粱糖化液糖度12 °Bx,静置培养5 d;在此最优条件下,酵母Y2产乙酸乙酯的量可达到3.47 g/L。     

纯种酵母发酵酿制善酿酒的工艺研究

通过对善酿酒用不同的纯种酵母进行发酵,并以正交试验法对东风黄酒(干型黄酒)、水、纯种酵母的添加量和酵母菌种选择进行研究。结果表明：用纯种酵母发酵酿制善酿酒是可行的,大大缩短了发酵时间;以东风黄酒添加量为112.0%、加水量为25.0%、加纯种酵母量为10.73% 和酵母菌株为1# 最适宜酿制条件。     

YE专用高蛋白高RNA酵母菌株的筛选及鉴定

为筛选适合生产酵母抽提物(Yeast extract,YE)的高蛋白、高RNA酵母菌株,对来自安琪酵母公司野外采集保藏的酵母菌进行摇瓶活化、稀释涂布和划线纯化,获得酵母菌150株。通过摇瓶培养进行初筛,得到5株高蛋白、高RNA酵母。经过30 L小试发酵复筛,获得1株酵母菌株J-5。该酵母菌发酵后蛋白质含量平均达59.4%,RNA含量达9.86%,干重41.58 g/L。并对菌株J-5发酵活力、海藻糖含量测定,结果表明该菌株发酵活力、海藻糖积累量均较低,为酵母抽提物生产优良菌株。通过形态学、生理生化及26S r DNA序列同源性分析,初步鉴定菌株J-5为酵母属酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。     

反复冻融和超声协同作用破碎酵母细胞

利用反复冻融法和超声波技术相结合的方法破碎啤酒酵母细胞壁,研究协同作用对酵母细胞破壁率的影响。研究结果表明:啤酒酵母先经反复冻融处理(加水量为25%、冻融4次),然后经过超声处理(超声功率400 W,每次辐射时间11 s,超声总时间14.5 min,酵母浓度20 mg/mL)进行破碎,破壁率达到了89.31%,且破壁率是反复冻融单独作用的2.4倍,是超声波单独作用的1.5倍。     

面食生产过程中酵母发酵特性对比分析

以面食生产过程中所用到的4种酵母发酵特性为研究对象,通过对面食生产过程中酵母发酵时的产气量、面团体积变化量、蛋白酶活力和淀粉酶活力以及发酵过程中乳酸菌和酵母菌含量进行试验测定,并对试验测定数据进行对比,以此来反映面食生产过程中酵母发酵特性.对比数据表明,不同的酵母菌因酶活力、酵母菌和乳酸菌含量的不同,导致在面食生产发酵...     

粘红酵母胞内L-苯丙氨酸解氨酶释放的研究

分别考察了液氮冷冻法、超声破碎法、甘氨酸与丙氨酸化学渗透法，不同化学渗透剂TritonX-100、Tween80、Span20、溴代十六烷基吡啶，有机溶剂甲苯、脲及EDTA对粘红酵母（Rhodotorula glutinis）胞内苯丙氨酸解氨酶（即PAL酶）释放及活力的影响，比较发现超声破碎与TritonX-100联用酶释放效果显著，先加入10％Triton X-100渗透6h，再在800W超声破碎30min，蛋白释放率达76．7％。总酶活70．3％，为提取胞内PAL酶提供了一种新方法。     

两种乳酸杆菌超声破碎提取亚油酸异构酶条件的研究

本文利用超声波对两种乳酸杆菌细胞进行破碎,以提取细胞中的亚油酸异构酶,并就超声波破碎条件对亚油酸异构酶释放的影响进行了研究。通过单因素试验和正交试验得出嗜酸乳杆菌的最佳超声破碎条件为:间歇破碎次数80次(每次破碎3s,中间间隔4s),破碎菌液体积50ml,菌悬液浓度20g/60ml,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.0,NaCl浓度0.2mol/L;保加利亚乳杆菌的最佳超声破碎条件为:间歇破碎次数80次(每次破碎3s,中间间隔4s),破碎菌液体积60ml,菌悬液浓度15g/50ml,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.8,NaCl浓度0.3mol/L。     

克雷伯杆菌O852产反式二氢香芹酮关键酶转化条件及超声提取工艺优化

本研究以Klebsiella sp. O852为研究对象,使用超声提取的方法对其进行细胞破碎,对其转化柠檬烯生成反式二氢香芹酮的关键酶所在位置及转化条件进行了研究。通过单因素实验研究了超声时间、料液比、振幅对细胞破碎的效果的影响。最终设计Box-Behnken中心组合试验确定了最优提取条件。结果表明,该酶是一种胞内酶。最佳培养时间为8 h,此时为细胞生长的对数中期。转化时间为4 h时,在磷酸盐缓冲液中获得的酶活最高。通过单因素及响应面试验,获得提取该酶的最优条件为,超声时间21 min,料液比1:13,振幅36%,在此条件下,得到的酶活为(40.97±2.02) U/g。本研究为进一步研究该酶的纯化及酶学性质的探究提供了参考。     

破壁方法对嗜热链球菌SP1.1胞内乳糖代谢关键酶活性的影响及其条件优化

通过超声波破壁法、溶菌酶破壁法、反复冻融法和机械破壁法4种不同破壁方式对嗜热链球菌SP1.1进行破壁处理,对菌体的破壁率、提取的β-半乳糖苷酶和乳酸脱氢酶两种胞内酶的活力进行分析比较,以确定适合于嗜热链球菌细胞破壁方法及其最佳条件。结果表明：这4种菌体细胞破壁效果存在很大差异,其中经溶菌酶处理胞内酶提取效果最好,破壁率可达99.87%,β-半乳糖苷酶酶活力为0.387U,乳酸脱氢酶酶活力为2.375U,与其他3种方法的破壁效果差异极显著(P＜0.01)。优化溶菌酶破壁条件,当处理8mL菌浓度为1.3×109CFU/mL的样品时,确定处理最佳温度为37℃,时间为30min,酶(20000U/mL)用量为1mL,此时破壁率可达99.99%,β-半乳糖苷酶酶活力为0.429U,乳酸脱氢酶酶活力为2.431U。     

冰核活性细菌发酵培养基的优化筛选

研究了不同营养构成及添加不同营养物质对冰核细菌生长和冰核活性的影响 ,采用正交试验优化了培养基组成。优化后的培养基最佳配方为 :在MPDA培养基中添加 0 4%半乳糖、1 5 %酵母粉、0 0 1%粗磷脂。在优化后的培养基中培养供试菌 ,菌体收获量 (干重 )比在MPDA培养基中培养增加 2 4g/L ,冰核活性增加 2 4 3 %。     

超声协同等电点沉淀法提取螺旋藻藻胆蛋白工艺的优化

以螺旋藻粉为原料,通过正交试验,对超声波细胞破碎及等电点沉淀提取藻胆蛋白进行研究,并优化其工艺条件。结果表明,在藻液质量分数5%、630W(额定功率为900W)条件下超声20min,效果最佳;而采用冰醋酸作为等电点沉淀介质,在pH4.0 的条件下,从提取液中低温沉淀藻蛋白,其操作较为简便。由于冰醋酸溶液易挥发分离,简化了生产工艺。最后通过冷冻干燥,得到粗蛋白粉末。利用本法优化工艺后,提取液中藻蓝蛋白的含量高达4.36%;而经沉淀干燥得到的粗蛋白粉末得率为52.5%,其中藻蓝蛋白含量为7.7%、别藻蓝蛋白含量为7.9%、藻红蛋白含量为0.8%。     

超声破碎辅助蜗牛酶提取杏鲍菇蛋白工艺优化

为显著提高杏鲍菇子实体蛋白提取率,采用超声波破碎辅助蜗牛酶水解充分破碎菌体细胞壁。综合应用响应面、正交设计与人工神经网络模型相结合的试验设计方法,分别对超声破碎处理和蜗牛酶水解条件进行了优化,同时与直接热水碱提蛋白法进行了比较。结果表明,超声处理条件为超声功率300 W、超声时间26 min、水料比1.95∶5（mL/g）,在此条件下破碎效果最好,提取率达到了48.82%;最佳蜗牛酶水解条件为温度42.8 ℃、pH 4.8、酶用量7%、时间1.5 h,在该条件下蛋白提取率为75.92%,相较热水碱提法提高了33.35%,结果表明利用超声辅助蜗牛酶水解杏鲍菇细胞壁能显著提高蛋白提取率。     

香菇菌丝体多糖的分离纯化和抗氧化作用

采用超声破碎和热水浸提相结合的方法提取香菇菌丝体多糖,通过L9(34)正交试验考察料液比、浸提温度、超声强度和浸提时间对多糖提取的影响,确定香菇菌丝体多糖最佳提取条件。利用D EA E-5 2离子交换和SephadexG100凝胶过滤层析纯化香菇菌丝体多糖,紫外扫描和薄膜电泳方法鉴定多糖的纯度;采用DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基清除实验及血浆丙二醛的生成抑制作用和抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血检测多糖的抗氧化性。结果表明:香菇菌丝体多糖最佳提取条件为料液比1:15、浸提温度90℃、超声波破碎功率400W、浸提时间3h,最适条件下鲜菌丝体的多糖提取量为3.38‰;纯化后的多糖(LMPⅡ)具有清除超氧阴离子自由基和羟自由基活性的能力,能够抑制血浆丙二醛的生成,抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血,且呈现一定效量关系。显示纯化的香菇菌丝体多糖具有较强的抗氧化作用。     

Cell viability and proteins release during ultrasound-assisted yeast lysis of light lees in model wine

Light lees that spent more than one year in barrels were used for ultrasound-assisted yeast lysis (22 W/L, 18 °C) in a model wine. For comparison, a classical yeast autolysis at mild temperature (25 °C) was performed. The effect of ultrasound on lees was evaluated by analysing the release of proteins and polysaccharides to the model wine, and the viability of the yeasts contained in the lees. Under conditions tested, ultrasound-assisted yeast lysis increased the concentrations of proteins and polysaccharides in the model wine due to the release of these compounds from yeasts. Unlike the classical autolysis, ultrasound led to a high cell disruption, and after 20 h of ultrasonic treatment, viable cells were hardly found. Furthermore, the final cell concentration for the ultrasound-assisted yeast lysis was much lower than that for the classical autolysis. The inactivation rate constant of ultrasound-assisted yeast lysis was 2.54 × 10⁻⁵ s⁻¹. Finally, the morphological changes in cells were examined by scanning electron microscopy to verify the effect of ultrasound on yeast cells.