冷藏鲈鱼片优势腐败菌的分离鉴定及致腐能力分析

为研究冷藏鲈鱼贮藏末期的优势腐败菌及其致腐能力,采用选择性培养基获得鲈鱼贮藏末期的特定菌落,结合感官分析确定所筛菌株中的优势腐败菌。通过多次划线分离获得纯菌株,结合菌落形态观察、传统生理生化试验与16S rDNA技术,确定所筛菌株属种,并将所鉴定的优势腐败菌接种至无菌鲈鱼样品上,在4℃条件下贮藏,测定不同贮藏时间段的挥发性盐基氮(TVB-N)与菌落总数,以TVB-N产量因子(YTVB-N)衡量各腐败菌的致腐能力。结果得出,筛选获得的5株菌株中,有假单胞菌属P1(WCS374)1株,草莓假单胞菌P2(P121)与P3(B-727)2株、希瓦式菌属S1与S2(OS185)2株。其致腐能力排序为S1S2P2P3P1,其中腐败希瓦式菌属细菌S1的致腐能力最强。由产量因子分析表明,草莓假单胞菌P2的致腐能力强于一般假单胞菌属细菌P1与P3。经综合比较,鲈鱼鱼肉中希瓦式菌属细菌的致腐能力强于假单胞菌属细菌。     

不同选择性培养基中沙门氏菌和干扰菌的分离鉴定

目的提高食品中沙门氏菌的检测水平。方法将4种沙门氏菌(甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门菌双相亚利桑那亚种、沙门氏菌食品分离菌株)和6种干扰菌(铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷氏菌和恶臭假单胞菌)分别接种到不同选择性培养基中,观察菌落形态特征及显色情况,结合生化实验和血清学实验结果比较不同选择性培养基的分离鉴定效果。结果研究发现沙门显色培养基的分离鉴定效果最好,甲型副伤寒沙门氏菌不产H_2S,而弗氏柠檬酸杆菌和奇异变形杆菌这2种干扰菌产H_2S,肠炎沙门菌双相亚利桑那亚种在沙门显色培养基中的菌落形态区别于其他沙门氏菌。结论在实际检测过程中,不能将产H_2S作为判定是否检出沙门氏菌的唯一标准。在挑取和鉴定典型、可疑菌落时必须结合不同的选择性平板和显色平板进行综合分析,不能只从单一平板上的菌落形态下结论。     

原料乳中嗜冷菌的分离鉴定及Nisin,EDTA对其抑制作用

嗜冷菌是引起低温食品多种致害的主要原因之一.选用LA培养基从低温贮藏原料乳中分离出14株具有典型特性的嗜冷菌,并时的嗜冷菌进行了分离鉴定.通过形态学及生理生化特性的研究,对筛选的14株嗜冷菌进行了鉴定.一共得到9种嗜冷菌的菌种,分别是:气单胞菌属(Aeromonas)3株、黄杆菌属(Flavobacterium)1株、巴斯德氏菌属(Pasteurella)2株、节杆菌属(Arthrobacter)3株、短杆菌属(Brevibacterium)1株、片球菌属(Pediococcus)1株、乳球菌属(Lactococcus)1株,明串珠菌属(Trichococcus)1株,微球菌属(Micrococcus)1株.同时研究了不同浓度的Nisin,EDTA协同对牛乳中嗜冷菌的抑制作用,结果表明在牛乳中加入40ms/ks～100mg/kg的Nisin和等量的EDTA,对嗜冷菌有较好的抑制作用.     

信阳黑猪腊肉的微生物多样性分析及优势菌分离鉴定

为全面解析信阳光山自然发酵黑猪腊肉中的微生物菌落结构组成,采用Illumina MiSeq高通量测序和传统选择性培养基分离筛选相结合的方法,分析腊肉中的细菌多样性和真菌多样性并对分离优势细菌和真菌进行16SrDNA和26S rDNA鉴定。结果显示,信阳腊肉优势细菌中厚壁菌门( Firmicutes) 和变形菌门( Proteobacteria)相对丰度占比均值之和达到99.67%,为绝对优势细菌门;优势真菌为酵母,其菌落总数为4.65 lg(cfu/g)低于细菌2个数量级。在属水平上,相对丰度占比前5的优势细菌依次为乳球菌属(Lactococcus)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)。并从腊肉中分离鉴定得到6株优势细菌和2株优势酵母分别为格式乳球菌,清酒乳杆菌,马胃葡萄球菌,广布肉毒杆菌,溶酪巨球菌,孤独四联球菌,胶红酵母和隐球酵母各1株,从而为后续进一步研究优势菌种在发酵过程中的具体作用和演替变化提供了可能,并为发酵肉行业的标准化生产提供理论依据和技术支撑。     

一款10年陈熟普洱茶中可培养微生物的分离鉴定

在贮存过程中微生物的种类和数量对普洱茶的品质有很大影响。本实验用4种不同的选择性培养基对一款10年陈熟普洱茶中的微生物进行选择性培养和计数;不同的微生物菌落被分离,并用显微镜进行形态观察和初步鉴定,根据细菌的16S rRNA进行分类。结果表明：该款普洱茶的细菌总数为4.3×103CFU/g;霉菌数约为20CFU/g,未发现该普洱茶中存在酵母和放线菌;根据菌落形态分离到的7株细菌都是革兰氏阳性菌,分别属于5个种,即枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 2株、解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens) 1株、地衣芽孢杆菌(B. Licheniformis) 2株、嗜热芽孢杆菌(B. sporothermodurans) 1株和 B. shackletonii 1株;用显微镜进行的形态观察鉴定只分离到两种霉菌,即黑曲霉(Aspergillus niger)和产黄青霉(Penicillium chrysogenum)。     

黄酒酒曲中产生物胺细菌的分离鉴定

为探明黄酒酒曲中产生物胺细菌的菌相,深入研究黄酒中的生物胺形成机制,分别以4种黄酒酒曲(麦曲M、麦曲L、小曲Q、红曲H)为研究对象,采用脱羧酶培养基对产生物胺细菌进行初筛,高效液相色谱法复筛,并通过16S rDNA基因序列分析,对分离得到的产生物胺细菌进行鉴定。共筛选出42株产生物胺细菌,包括肠杆菌属(Enterobacter sp.)17株,乳杆菌属(Lactobacillus sp.)6株,克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)5株,沙门氏菌属(Salmonella sp.)4株,肠球菌属(Enterococcus sp.)3株,克罗诺菌属(Cronobacter sp.)3株,埃希菌属(Escherichia sp.)菌株2株,柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.)1株,葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)1株。分离的产生物胺细菌中多数可同时产生多种生物胺,其中产腐胺、尸胺、组胺的菌最多,但未分离到色胺和亚精胺产生菌。     

徽式腊肉刀板香中优势微生物的分离鉴定

刀板香作为一种传统的徽派腌腊肉制品,品质优良、风味独特,但生产工艺相对落后、品质不稳定,因此,刀板香中优势微生物的分离鉴定及相应发酵剂研制的需求迫切。通过低温选择性培养和分子生物学鉴定,共分离得到5株葡萄球菌(4株马胃葡萄球菌和1株木糖葡萄球菌)、6株嗜冷菌(1株小束噬脯氨酸菌、1株沙雷氏菌和4株嗜冷杆菌),进一步测定马胃葡萄球菌(A3)、木糖葡萄球菌(A4)、小束噬脯氨酸菌(L1)和嗜冷杆菌(N17)的温度适应、耐盐和耐乙醇能力。结果表明:菌株A3和A4有较好的耐盐能力,菌株L1和A4对温度的适应能力较好,4株菌对于乙醇的耐受性均较差。因此,筛选得到菌株A3和A4可作为良好的发酵剂,菌株L1和N17有作为低温发酵剂的潜力。     

冬季甜瓜腐烂病原菌的分离与鉴定

从冬季贮存甜瓜的腐烂组织中分离病原菌,并对其类型进行检测分析。利用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和溶菌肉汤(LB)培养基培养,依据微生物形态特性,真菌的26S rRNA 序列和细菌的16S rRNA 序列比对以及系统发育进化分析等分子生物学方法,共分离到22 株菌种,其中真菌13 株：包括青霉2 株、链格孢4 株、白地霉4 株、酵母3 株(梅奇氏酵母2 株、毕赤酵母1 株);细菌9 株：包括沙雷氏菌5 株,丁香菌1 株,克雷伯菌、肠杆菌和芽孢杆菌各1 株。根据26S rRNA D1/D2 区序列比对和系统进化树结果显示,两株酵母菌121 和122 可能是梅奇氏酵母属潜在的新种。青霉和链铬孢是甜瓜腐烂致病菌,白地霉和沙雷氏菌是人体致病菌,表明目前甜瓜贮存方法需要进一步改进和完善。     

花生青枯菌红安分离物的鉴定

从湖北红安发病花生根部分离到一个细菌分离物2C1,对该分离物进行了TZC显色反应,致病力的测定,16S rRNA、23S rRNA和鞭毛蛋白基因filC的PCR扩增,16S rRNA PCR扩增产物的序列分析。结果显示,分离物2C1在TZC培养基上表现出青枯菌的典型菌落形态,对花生具有强致病性,PCR扩增获得与预期大小的产物片段;16S rRNA核苷酸序列具有与其它青枯菌分离物99%左右的一致性。上述结果表明：2C1是具有强致病力的花生青枯菌分离物。     

冷却羊肉中腐败菌的分离、初步鉴定与初始菌相分析

采用选择性培养基从冷却羊肉中分离和初步鉴定出乳杆菌2株、热死环丝菌2株、假单胞菌属和肠杆菌科各3株,葡萄球菌属和酵母菌各1株。假单胞菌属、乳酸菌、葡萄球菌和微球菌、肠杆菌科、热死环丝菌是构成该地区冷却羊肉中主要微生物。假单胞菌属是该地区冷却羊肉中主要优势菌,其数量对数平均值与细菌总数的对数平均值相当。     

传统牦牛酸奶中产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法对来自青海海南藏族自治区、四川阿坝、甘孜理塘的牦牛酸奶样品的菌株进行分离筛选，采用形态学观察和16S rRNA序列分析进行鉴定；测定筛选菌株上清液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）抑菌活性；考察筛选菌株上清液对蛋白酶的耐受性及对抗生素的敏感性，并确定细菌素种类。结果表明，共分离筛选出6株菌（编号为A1～A2及G1～G4），其中菌株A1～A2被鉴定为嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus），菌株G1～G4被鉴定为屎肠球菌（Enterococcus faecium）；菌株G3对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌圈直径＞20 mm，且对蛋白酶不耐受，表明该菌株产细菌素，对常见抗生素敏感，经细菌素基因鉴定证实，该菌株产肠球菌素A和肠球菌素P。综上，菌株G3可作为产细菌素益生菌的候选菌株。     

低盐发酵香肠用优良菌株的分离筛选及鉴定

从10 种我国自然发酵制品中分离纯化得到52 株乳酸菌及56 株过氧化氢酶阳性球菌,首先通过菌株耐受性、发酵特性等指标对菌株进行初步筛选,然后利用抑菌特性和风味特性对菌株进行复筛,选择可能改善低盐发酵香肠安全性和风味的优良菌株,最终筛选得到3 株葡萄球菌Z9、L2和R2,以及4 株乳酸菌P6、P12、X和SN1-3。经由形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选得到的菌株进行鉴定,结果表明,葡萄球菌菌株Z9、L2为腐生葡萄球菌,R2为肉葡萄球菌;乳酸菌菌株P6、P12均为植物乳杆菌,X为干酪乳杆菌,SN1-3为戊糖片球菌。最后测定菌株的生长特性及产酸能力,研究菌株间的拮抗特性,最终筛选得到戊糖片球菌SN1-3与肉葡萄球菌R2作为制作发酵香肠的复配菌株。     

鲊肉粉中乳酸菌和葡萄球菌的筛选及鉴定

从传统发酵鲊肉粉中分离、筛选发酵性能优良的乳酸菌和葡萄球菌,为鲊肉粉接种发酵提供理论依据。按照肉制品发酵菌株的筛选标准,利用形态学特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株,筛选出2株乳酸菌A1、C7和2株葡萄球菌S6、S7。结果表明:乳酸菌菌株A1、C7均为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),能快速产酸,具有较好抑菌特性;葡萄球菌菌株S6为沃氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri),S7为巴氏葡萄球菌(Staphylococcus pasteuri),能产蛋白酶和脂肪酶,具有良好的耐盐性和耐亚硝酸盐性,对不同抗生素有不同的敏感性。筛选得到的4株菌株具有良好的发酵特性,乳酸菌和葡萄球菌之间无拮抗作用,复配后用可于鲊肉粉接种发酵。     

农用抗生素高产菌株的筛选分离及诱变育种

该实验分离得到4株产农用抗生素菌株,编号1#～4#。 以厚垣镰孢霉（Fusarium chlamydosporum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为指示菌,测定其发酵液的抑菌活性,并对抑菌 活性菌株进行诱变育种。 结果表明,菌株1#对枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）抑菌圈直径＞10 mm,抑菌 活性较好。 采用紫外诱变、重金属激活沉默基因复活诱变两种方法诱变菌株1#后,对厚垣镰孢霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄 色葡萄球菌抑菌作用分别增加了25.68%、32.11%、34.85%、28.28%。 形态学观察及生理生化实验结果初步鉴定菌株1#为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

多粮浓香型白酒生产过程中可培养酵母菌多样性分析与优质功能菌筛选

分析多粮浓香型白酒生产过程中可培养酵母菌多样性,基于ITS rDNA序列构建其系统发育树对其进行鉴定,筛选优质酿酒功能酵母菌,并考察其发酵特性。结果表明,共分离出43株酵母菌,分为12种形态类型,编号为WY1～WY12,其中,菌株WY2、WY6、WY9为库德里阿兹威（氏）毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）;菌株WY1、WY3为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）;菌株WY4为海洋嗜杀酵母（Wickerhamomyces anomalus）;菌株WY5为扣囊复膜酵母菌（Saccharomycopsis fibuligera）;菌株WY7为拜氏接合酵母（Zygosaccharomyces bailii）;菌株WY8为葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）;菌株WY10为季也蒙毕赤酵母（Galactomyces geotrichum）;菌株WY11、WY12为罗伦隐球酵母（Cryptococcus laurentii）。功能酵母菌筛选结果表明,扣囊复膜酵母菌（S. fibuligera）WY5-1和酿酒酵母（S. cerevisiae）WY3-2具有良好的产乙醇特性;库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）WY6-3和WY9-2具有良好的产酯特性、温度和pH耐受性,为浓香型白酒的工业生产中菌株的选择提供了更多可能。     

The application of staphylococci with flavour-generating potential is affected by acidification in fermented dry sausages

Differences in the production of bacterial metabolites with potential impact on fermented sausage flavour were found in meat simulation medium when comparing different strains of Staphylococcus xylosus and Staphylococcus carnosus as starter cultures. Overall, higher levels of 3-methyl-1-butanol and acetoin were found for S. xylosus, with some intraspecies variability. In addition, sausage fermentation parameters affected staphylococcal growth and metabolism. Strong acidification, as in Northern-European types of fermented dry sausage, inhibited S. xylosus 3PA6 but not S. carnosus 833. During a milder, Southern-European type of acidification, both strains displayed survival over time. During in situ sausage trials, variations in the degree of acidification and the choice of starter microorganisms were of importance, whereas modifications in fat and salt contents had no effects. Staphylococcus sciuri αSg2, Staphylococcus succinus 4PB1, and S. xylosus 3PA6 were unable to survive the fermentation of a Northern-European type of fermented dry sausage, characterized by low or no 3-methyl-1-butanol and acetoin production. Inoculation with S. sciuri αSg2, S. succinus 4PB1, or S. xylosus 3PA6 led to 3-methyl-1-butanol and acetoin production in Southern-European type of fermented dry sausages, which was not observed with S. carnosus 833.     

饲用屎肠球菌的筛选、鉴定及其生物学特性

分别采用肠球菌选择性培养基(EC)从健康婴儿的粪便、健康仔猪的肠道及粪便中分离筛选了4株屎肠球菌,分别命名为E fB、E f1-2、E f3-4、E f4-1,利用B iolog自动微生物分析系统鉴定结果表明,它们都是屎肠球菌,而且经16S rRNA基因序列测序比较分析,表明这4株菌与数据库中已发表的屎肠球菌16S rRNA序列(AccessionNo.AY675247)同源性均为99%,两者鉴定结果一致。试验表明,所筛得菌株生长速度较快,且对致病型大肠杆菌K88,K99,金黄色葡萄球菌,巴氏杆菌及沙门氏菌都有较强的抑制作用,其中对大肠杆菌K99的抑菌效果最好。屎肠球菌新菌种的鉴定与筛选为开发新型微生态类饲料添加剂提供了帮助。     

青方腐乳中益生乳酸杆菌的筛选鉴定及益生特性研究

该研究从青方腐乳样品中分离具有潜在益生功效的乳酸杆菌,通过形态学观察及分子生物学技术对其进行鉴定。对筛选菌株进行人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定,并对复筛菌株进行清除亚硝酸钠、降胆固醇、乳糖消耗、抑菌和抗氧化等益生特性试验。结果表明,从青方腐乳样品中共分离筛选得到24株菌（编号为S1～S24）,通过人工胃液、胆盐的耐受性及其细胞表面特性测定复筛得到8株菌,分别为菌株S6、S10、S11、S13、S17、S21、S23、S24,其中菌株S6被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）;其降亚硝酸钠、胆固醇及乳糖的能力分别为86.84%、61.22%、29.13%;羟基、DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率分别为79.15%、56.29%、58.14%。综上,菌株S6对所有试验病原菌的拮抗能力最强,可作为潜在的益生菌。     

传统鱼制品中优良葡萄球菌的筛选与鉴定

从盐干鱼及糟腌鱼中分离纯化得到158株葡萄球菌,按照肉制品发酵剂筛选标准,获得3株优良葡萄球菌S8、S61和S92,其具有良好的生长特性及耐盐性。经梅里埃VITEK-2全自动微生物系统鉴定及16SrDNA序列分析,优良葡萄球菌S8、S61和S92分别为沃氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)。     

氨基酸液生产过程中污染茵的鉴定

从氨基酸液中分离出8株菌,命名为ZH．1—zH一8。7株属十细菌,1株属于霉菌。利用16SrDNA区序列分析并结合彤念学、生邪学特征对细菌菌株进行鉴定。其中,ZH-4为Psychrobacter,ZH-5为Lysinibacilus,ZH-6为Acrococcusviridians,ZH-7为Bacilluspumilus;ZH．3与Planococcus citrcus,ZH-2与Kocuriapalustris,ZH-1与Bacilluspumflus可能为近缘种,有待进一步鉴定。牛弹牛化鉴定结粜与模式菌株相吻合的菌株为ZH-2～ZH-7。18SrDNA区序列分析结合形态学特征鉴定ZH一8为Pcnicillium。ZH-1-ZH-8存GcnBank的登录号依次为JQ819720-JQ819726,JX192597。