瑞士乳杆菌和嗜酸乳杆菌的益生免疫特性的研究

以瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1、KLDS AD2为研究对象,详细研究了它们对体外模拟人工胃肠道的耐受性,并评估了三株乳杆菌对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,初步探讨了三株乳杆菌的免疫活性。结果表明,三株乳杆菌对人工胃液、人工肠液、胆汁盐环境具有很好的耐受性,瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1较强于嗜酸乳杆菌KLDS AD2。乳杆菌对脾淋巴细胞增殖活性的作用表现出明显的量效关系,活菌数为107CFU/mL时,对脾淋巴细胞活性影响大小为KLDS AD1>KLDS 1.8701>KLDS AD2;KLDS 1.8701对脾淋巴细胞的增殖具有很好的促进作用,只有当KLDS AD1的活菌数达到107CFU/mL时才具有促进作用,而KLDS AD2没有促进作用。      

含乳铁素的酸乳制品对淋巴细胞增殖的影响

本研究采用MTT法分别测定了含乳铁蛋白水解物的酸乳制品、乳铁蛋白水解物以及乳铁素对小鼠外周血单核细胞以及脾细胞的增殖影响。结果显示,含乳铁蛋白水解物的酸乳制品、乳铁蛋白水解物以及乳铁素都有不同程度的免疫刺激作用,其中乳铁素的免疫刺激作用最强。     

乳铁蛋白及其多肽对淋巴细胞增殖活性的影响

乳铁蛋白及其多肽具有很多生物活性,但不同来源的乳铁蛋白及其多肽在很多活性方面表现很大的差异。实验比较研究了4种乳铁蛋白及其胃蛋白酶水解产物对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响,为乳铁蛋白及其多肽的开发应用提供科学依据。实验结果表明:4种乳铁蛋白对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖均有抑制作用,其中驼乳铁蛋白抑制作用最强;而4种乳铁蛋白多肽对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖在一定浓度范围内具有促进作用,而超出这个浓度范围,就起到抑制作用,但4种乳铁蛋白多肽对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖的影响组间比较没有显著差异。     

瑞士乳杆菌发酵乳中多肽的分离对小鼠体外淋巴细胞增殖的影响

目的:分离瑞士乳杆菌发酵乳中多肽片段,并对分离片段的的免疫调节作用进行研究。方法:利用瑞士乳杆菌LH0906发酵牛乳获得多肽样品,采用离心、超滤的方法对所得多肽进行粗提,利用凝胶层析色谱和反相层析色谱进一步分离发酵乳中的多肽,使用Folin-Lowry法测定发酵后样品中多肽含量,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测发酵乳中的多肽对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响。结果:牛乳发酵液其对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效果显著高于未发酵牛乳,并经过凝胶层析色谱和反相层析色谱分离发酵乳得到的峰S12-A对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖效果十分显著(P<0.01),峰S12-C对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖效果显著(P<0.05)。结论:牛乳经瑞士乳杆菌LH0906发酵后,分离得到的多肽片段对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖具有显著的增强作用。     

鼠李糖乳杆菌LT22对小鼠免疫功能的影响

取SPF小鼠120只,分成3批,每批分为4个组。对照组小鼠灌服灭菌水;实验1组灌服自制发酵培养基;实验2组灌服鼠李糖乳杆菌LT2237℃、48h培养物;实验3组灌服灭活的鼠李糖乳杆菌LT22培养物。所有小鼠均采用口腔灌服,0.5mL/只/d,连续接种7d或13d。通过测定巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞数量、血清溶血素含量及器官指数来反映鼠李糖乳杆菌LT22对小鼠免疫功能的影响。结果表明:所有实验组均能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,均能促进IgM的生成及脾脏和胸腺的发育;实验2组能显著增加T淋巴细胞的数量及血清溶血素的含量。     

体外评估十株乳杆菌对免疫细胞活性的影响

针对传统的两种糖基化接枝方法和改进方法从糖基化反应程度进行系统比较,并对产物氨基酸组成进行分析,以期进一步揭示蛋白质糖基化方法对于糖基化反应过程及产物的影响机制。本文利用干热法、湿热法和加压辅助湿热三种糖基化方法,对大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化产物从反应程度、氨基酸组成等方面进行研究发现,结果表明:三种制备方法的反应程度高低顺序依次为:湿热法>加压辅助湿热法>干热法,说明压力能够对Maillard反应的进行具有一定的抑制作用,可以控制反应向理想阶段进行。大豆7S球蛋白和葡聚糖的糖基化主要发生在蛋白质肽链上的赖氨酸和精氨酸侧链上的自由氨基,干热法与其它两种方法相比糖链更有易于和精氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联,而湿热法和加压辅助湿热法相比糖链更易于和赖氨酸侧链上的自由氨基发生共价交联。     

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

水苏糖-植物乳杆菌合生元对小鼠免疫功能的影响

以免疫力低下的小鼠为研究对象,研究水苏糖-植物乳杆菌合生元对小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能,绵羊红细胞所致小鼠迟发型超敏反应(DTH),血清溶血素(HC),免疫器官指数(脾脏、胸腺),血清中IL-10、IL-12、IgG及TNF-α水平等免疫指标的影响。试验结果表明,合生元能显著提高小鼠单核巨噬细胞吞噬功能,增强迟发型超敏反应,显著增加脾脏和胸腺指数和血清中IL-10、TNF-α、IgG的含量,对血清中IL-12含量没有显著影响。水苏糖-植物乳杆菌合生元能显著改善免疫力低下小鼠的特异性细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫功能,提高血清中部分免疫因子水平,增强免疫力低下小鼠的免疫功能。     

副干酪乳杆菌VL8胞外多糖协同ConA对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

本研究以前期从viili中分离得到的一株副干酪乳杆菌VL8为基础,对其胞外多糖（VL8-EPS）的免疫活性进行了初步探究。首先分离制备小鼠脾淋巴细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度的VL8-EPS对小鼠脾淋巴细胞增殖及在其与有丝分裂原共同作用下对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测细胞因子白介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）的含量。结果表明,VL8-EPS在浓度12.5⁸00μg/m L范围内,能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖;VL8-EPS协同刀豆蛋白（Con A）也显著地增强了脾淋巴细胞的增殖作用,且诱导效果高于单独施用VL8-EPS;并能显著促进协同Con A诱导的细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6的分泌水平。综上,VL8-EPS显著地促进了脾淋巴细胞的增殖,并对Con A诱导的脾淋巴细胞的增殖有协同促进作用,还通过促进细胞因子的分泌发挥了免疫增强作用,说明VL8-EPS在一定程度上对免疫机制进行了调控。      

NaCl对保加利亚乳杆菌抗氧化活性的影响

研究NaCl对保加利亚乳杆菌耐氧化胁迫能力及糖代谢生成乳酸的影响。利用平板菌落计数法检测不同浓度H2O2对保加利亚乳杆菌活菌数的影响,利用DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力、还原活性作为体外抗氧化能力评价指标,对比添加不同量氯化钠孵育的菌株的抗氧化活性的差别,得到最适浓度NaCl处理后的优化菌。结果表明,H2O2亚致死值为1 mmol/L,致死值为2 mmol/L。在1 mmol/L H2O2胁迫条件下,0.1%～0.3%NaCl对保加利亚乳杆菌存活率及抗氧化活性明显提高,其中0.2%NaCl处理后的保加利亚乳杆菌存活率提升最高是对照组的3倍,抗氧化活性最大。DPPH清除率上升1倍,羟自由基清除率及还原性均增加(P0.05)。结论:NaCl能够提高保加利亚乳杆菌自身的抗氧化能力,这为提高保加利亚乳杆菌抗氧化性提供理论支持,为综合利用保加利亚乳杆菌提供有力依据。     

不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较

以牛乳清乳铁蛋白（bovine whey lactoferrin,LFW）、牛初乳乳铁蛋白（bovine colostrum lactoferrin, LFC）、人乳铁蛋白（human lactoferrin,LFH）、牛乳铁蛋白素（bovine lactoferricin,LfcinB）和人乳铁蛋白 素（human lactoferricin,LfcinH）为研究对象,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响并比较不同来源乳铁蛋白 （lactoferrin,LF）及乳铁蛋白素（lactoferricin,Lfcin）作用效果的差异性。采用CCK-8法检测不同来源的LF与 Lfcin作用小鼠脾淋巴细胞24、48、72 h后,及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响。结果显 示：LF与Lfcin均在48 h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好,且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升 高而加强;LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞 的增殖。结果表明：两种牛乳铁蛋白（bovine lactoferrin,LFB）及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提 高婴幼儿免疫能力,LFB推荐添加质量浓度为0.50～2.00 mg/mL,Lfcin推荐添加质量浓度为75～125 μg/mL。     

蛹虫草多糖的提取及对小鼠脾细胞增殖的影响

采用超声波-微波协同法提取蛹虫草多糖,并研究其对小鼠脾细胞增殖的影响,初步评价其免疫活性。通过单因素和L18(37)正交试验研究了物料粒度、料液比、超声波功率、超声波时间、超声提取次数、提取温度、乙醇与浓缩液之比对蛹虫草多糖提取率的影响。正交试验结果表明,超声波功率、物料粒度对蛹虫草多糖的得率均呈现出显著的影响,进而确定蛹虫草多糖提取最优工艺参数:物料粒度0.150 mm,提取次数为3次,微波功率400 W,超声波功率300 W,超声波处理时间30 min,提取温度70℃,料液比1∶40(g/mL),乙醇与浓缩液之比4∶1(体积比)。在最佳条件下,可得到多糖提取率为6.28%。小鼠脾细胞增殖试验表明,在一定的剂量内,提取到的蛹虫草多糖能明显促进小鼠脾细胞的增殖,表明蛹虫草多糖具有免疫调节活性。     

山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用

为研究山楂黄酮对小鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用,将小鼠分为空白组、左旋咪唑组和不同浓度山楂黄酮处理组(100、200、400和800 μg/mL)。利用MTT法检测山楂黄酮对淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测山楂黄酮对淋巴细胞白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的影响,流式细胞术检测山楂黄酮对淋巴细胞膜表面标志物(CD4⁺和CD8⁺)的影响。结果表明,山楂黄酮在100~400 μg/mL对淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子的分泌具有浓度依赖性,IL-6和IFN-γ的分泌极显著高于空白组(P<0.01),IL-4的分泌极显著低于空白组(P<0.01),且400 μg/mL处理组与左旋咪唑组无统计学意义(P>0.05);对淋巴细胞亚群CD4⁺CD8^-、CD4^-CD8⁺具有浓度依赖性的促进作用,且极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01);对淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺百分比极显著高于空白组、左旋咪唑组(P<0.01),200 μg/mL浓度组CD4⁺/CD8⁺的比值极显著高于其它浓度组(P<0.01)。100~400 μg/mL山楂黄酮通过诱导淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子IL-6、IL-4和IFN-γ的分泌,提高淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比值,从而发挥免疫调节作用。     

活性乳酸菌乳饮品对免疫调节功能的影响

为探讨活性乳酸菌乳饮品对小鼠免疫系统功能的影响,将该饮品按 6.67 ～ 26.66ml/kg BW( 2.5 倍浓缩液)剂量给小鼠灌胃 30 天后,分别检测脾淋巴细胞增殖转化功能( MTT 法),迟发型变态反应性,血清溶血素滴度,碳廓清能力及自然杀伤细胞( NK )杀伤活性.结果表明该乳饮品可明显提高小鼠脾淋巴细胞增殖转化能力,溶血素血清滴度有统计学意义的增加,变态反应性增强,碳廓清能力增强.而 NK 细胞杀伤活性增加不明显,各组间无统计学意义的差异.提示该活性乳酸菌乳饮品具有增强机体免疫功能的作用.     

不同来源Lfcin对小鼠脾淋巴细胞增殖及分泌细胞因子影响的对比研究

本文以牛乳铁蛋白素Lfcin B和人乳铁蛋白素Lfcin H为研究对象,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖及分泌细胞因子的影响并比较两者的差异及相关性。采用CCK-8法检测不同浓度的Lfcin单独作用对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及不同质量浓度Lfcin与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响;ELISA法测定IL-2、IL-4和TNF-α的含量。结果显示:Lfcin B和Lfcin H能显著促进脾淋巴细胞增殖及增强Con A诱导的T淋巴细胞的增殖和LPS诱导的B淋巴细胞的增殖,并且能显著促进脾淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、TNF-α(P0.01)。研究结果表明:Lfcin能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A、LPS对T、B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用,其机制可能是通过促进细胞因子的分泌发挥免疫增强作用。     

黑灵芝多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的：研究黑灵芝多糖(PSG-1)对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测PSG-1 在不同质量浓度、不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,检测不同质量浓度PSG-1 单独作用及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B 淋巴细胞增殖作用的影响;用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果：PSG-1 在20～160μg/mL 质量浓度范围能显著促进脾细胞的增殖,且48h 效果最佳;PSG-1 能显著增强刀豆蛋白A (Con A)诱导的T 淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B 淋巴细胞的增殖作用;并且能显著诱导脾淋巴细胞分泌IL-2 和TNF- α。结论：PSG-1 能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与Con A、LPS 对T、B 淋巴细胞的增殖有协同刺激作用,还可以通过IL-2 和TNF-α发挥免疫增强作用。     

川皮苷体外抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用

目的：研究川皮苷的抗氧化活性及对肿瘤细胞生长抑制作用。方法：在体外测定川皮苷对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）和超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力;通过四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法筛选对川皮苷作用敏感的肿瘤细胞株,并用倒置显微镜和透射电镜观察敏感细胞株在川皮苷作用之后细胞结构的变化。结果：川皮苷在体外对DPPH自由基、•OH和O2－•都具有清除能力,其中对•OH的清除能力突出。同时,人胰腺癌细胞株PANC-1对川皮苷作用敏感,即川皮苷可抑制PANC-1细胞的生长;透射电镜观察发现川皮苷可使PANC-1细胞的细胞核膜破裂,胞质溶出,形成凋亡小体。结论：川皮苷具有显著的体外抗氧化活性,并且可以抑制PANC-1细胞的增殖,在功能食品等领域具有良好的应用前景。