发菜多糖的提取及性质研究

采用热水浸提法提取发菜多糖,确定发菜多糖的最佳提取工艺条件为：提取温度80℃,水料比为90：1,浸提时间为70min,浸提次数为3次。采用乙醇沉淀法得到发菜多糖。紫外扫描显示发菜多糖不含核酸及蛋白质,红外光谱分析其具有多糖的特征吸收峰,为一种非硫酸化的以β-糖苷键为主的多糖,热重分析表明多糖的热降解温度为256.8℃。     

多糖添加对固体基质培养发菜细胞生物量的影响

选用粗沙、细沙和PA6三种固体材料作为培养基质,以BG110为培养液,研究了不同浓度的阿拉伯胶、海藻酸钠和果胶对发菜细胞生物量的影响情况。实验结果表明,添加多糖有利于发菜细胞的生长,其中以细沙为固培基质,在培养液中添加0.3%的果胶,发菜细胞生物量最大,生长速率最快。     

发菜多糖的提取、纯化鉴定及理化特性研究

对发菜胞外多糖和发菜荚膜多糖分别进行提取研究,获得了2种多糖的理想提取工艺。分别将胞外粗多糖和荚膜粗多糖采用Sevag法脱蛋白,透析去除小分子杂质,DEAE-52柱层析分离纯化后,前者得到1种酸性糖(EPS),后者得到1种中性糖和2种酸性糖(CPSA、CPSB和CPSC),最后通过Sephadex G-100柱层析和紫外扫描检测,EPS、CPSA和CPSB均为单一多糖。     

发菜多糖啤酒的研制

发菜多糖具有抗病毒、抗肿瘤的作用。在啤酒生产过程的不同阶段将经过提取的发菜多糖提取液添加到麦汁或成熟啤酒中，在保证传统啤酒风味和营养成分的基础上，初步确定了发菜多糖啤酒的工艺路线。     

发菜细胞培养液中多糖含量测定方法的比较研究

采用苯酚-硫酸法及蒽酮-硫酸法测定发菜细胞培养液中水溶性多糖含量,分别对两种测定方法的稳定性、重复性、回收性及培养基中离子对测定结果的干扰程度进行比较。实验结果表明,两种方法的测定精度、稳定性、重复性等较好。培养基中的离子对两种方法的测定结果均有显著影响,因此待测样品应先去除离子后再进行测定。在测定多糖含量较少的样品时,苯酚-硫酸法更为适用。      

发菜多糖的提取、纯化及生物活性研究进展

发菜（Nostoc flagelliforme）是一种药食两用的陆生念珠藻（Nostoc）,含有发菜多糖、多种氨基酸和微量元素、维生素、海胆酮以及藻蓝叶黄素、藻蓝素、别藻蓝素等功能性成分。发菜细胞能够合成一种胶状物,其主要的功能性成分就是发菜多糖。研究表明,发菜多糖具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抑菌抗炎以及免疫调节等多种活性功能,因此,在食品、医药等方面极具开发潜力。本文主要针对发菜多糖的提取、分离纯化和结构特征三个方面进行综述,并概括总结了发菜多糖的生物合成和生物活性研究进展,以期为发菜多糖的进一步研究和开发应用提供理论依据。     

不同型式和洗脱剂对离子交换树脂纯化发菜多糖的影响

采用离子交换色谱对发菜多糖进行分离纯化,对OH-型和Cl-型交换色谱对发菜多糖分离纯化效果进行初步的比较。离子交换色谱柱（Ф2.6×30）,采用DEAE-Cellulose离子交换树脂和NaCl梯度洗脱对发菜多糖进行纯化。使用PeakFit4.12对色谱峰的峰高、峰宽、保留体积、对称因子各参数进行比较。选择一种分离纯化效果较好的离子交换色谱类型,使用上样浓度为1mg/mL（上样体积50mL）,分别采用0～1mol/LNaCl、CH3COONa、NH4Cl溶液为洗脱剂,洗脱流速为1.0mL/min,比较三者洗脱效果,进而确定其最佳洗脱剂和洗脱浓度。结果表明,OH-型离子交换色谱对发菜多糖有更好的分离纯化效果,NaCl的洗脱效果更好,最佳洗脱浓度为0.2mol/L。      

发菜多糖对小鼠血清中细胞因子及抗氧化能力的影响

研究了野生发菜多糖（EPSA）和人工培养发菜多糖（EPSB）对小鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-12（IL-12）的影响并且测定了谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）,过氧化氢酶（CAT）,超氧化物岐化酶（SOD）,丙二醛（MDA）的活性。实验表明,EPSA和EPSB对血清中IL-1的含量几乎没影响。EPSA高剂量组（100mg/kg·d）和EPSB高剂量组（100mg/kg·d）均能提高小鼠血清中IL-6的含量,其中EPSB高剂量组与空白组比较,差异显著（p<0.05）。而且,不同剂量的EPSA和EPSB均极显著的提高了血清中IL-12的含量（p<0.01）。此外,在高剂量条件下,EPSA和EPSB与空白组相比,均能显著性地提高血清中TNF-α含量（p<0.05）。同时,研究发现,高剂量（100mg/kg·d）EPSA与低剂量（50mg/kg·d）EPSB的CAT活性均极显著的高于对照组（p<0.01）。高剂量（100mg/kg·d）EPSA与对照组相比,可以极显著的提高小鼠血清中的谷胱甘肽氧化物酶（GSH-PX）的含量（p<0.01）。两种多糖对MAD含量影响不显著（p>0.05）。EPSA能够显著（p<0.05）提高小鼠血清中SOD的含量,此外,低剂量的EPSB能极显著（p<0.01）提高小鼠血清中SOD的的含量。      

发菜多糖对小鼠血清中细胞因子及抗氧化能力的影响

研究了野生发菜多糖(EPSA)和人工培养发菜多糖(EPSB)对小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)的影响并且测定了谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX),过氧化氢酶(CAT),超氧化物岐化酶(SOD),丙二醛(MDA)的活性。实验表明,EPSA和EPSB对血清中IL-1的含量几乎没影响。EPSA高剂量组(100mg/kg·d)和EPSB高剂量组(100mg/kg·d)均能提高小鼠血清中IL-6的含量,其中EPSB高剂量组与空白组比较,差异显著(p0.05)。而且,不同剂量的EPSA和EPSB均极显著的提高了血清中IL-12的含量(p0.01)。此外,在高剂量条件下,EPSA和EPSB与空白组相比,均能显著性地提高血清中TNF-α含量(p0.05)。同时,研究发现,高剂量(100mg/kg·d)EPSA与低剂量(50mg/kg·d)EPSB的CAT活性均极显著的高于对照组(p0.01)。高剂量(100mg/kg·d)EPSA与对照组相比,可以极显著的提高小鼠血清中的谷胱甘肽氧化物酶(GSH-PX)的含量(p0.01)。两种多糖对MAD含量影响不显著(p0.05)。EPSA能够显著(p0.05)提高小鼠血清中SOD的含量,此外,低剂量的EPSB能极显著(p0.01)提高小鼠血清中SOD的的含量。     

不同型式和洗脱剂对离子交换树脂纯化发菜多糖的影响

采用离子交换色谱对发菜多糖进行分离纯化,对OH-型和Cl-型交换色谱对发菜多糖分离纯化效果进行初步的比较。离子交换色谱柱(Ф2.6×30),采用DEAE-Cellulose离子交换树脂和NaCl梯度洗脱对发菜多糖进行纯化。使用PeakFit4.12对色谱峰的峰高、峰宽、保留体积、对称因子各参数进行比较。选择一种分离纯化效果较好的离子交换色谱类型,使用上样浓度为1mg/mL(上样体积50mL),分别采用0～1mol/LNaCl、CH3COONa、NH4Cl溶液为洗脱剂,洗脱流速为1.0mL/min,比较三者洗脱效果,进而确定其最佳洗脱剂和洗脱浓度。结果表明,OH-型离子交换色谱对发菜多糖有更好的分离纯化效果,NaCl的洗脱效果更好,最佳洗脱浓度为0.2mol/L。     

发状念珠藻(Nostoc flagelliforme)多糖的抗氧化与抗突变性质分析

以野生发状念珠藻为试验材料,通过热水浸提、乙醇沉淀以及氯仿-异戊醇除蛋白质等步骤提取粗多糖,并进行凝胶过滤纯化,得到单一组分.对该组分进行抗氧活性、抗突变能力以及对抗氧化酶活性影响分析,结果显示:多糖具有较强的直接清除·O2-的能力,清除能力随多糖浓度增加而增强,低浓度下(<0.075 g/L)二者呈线性关系(y=2.991 x-0.003,R2=0.998);多糖具有显著的抗突变能力,可有效抑制丝裂霉素诱导的微核产生,试验中抑制率最高可达68.4%,且随多糖浓度升高而增强;多糖对SOD酶和POD酶的活性则有抑制作用,对SOD的抑制强于POD.     

发菜胞外多糖硫酸化条件的优化及红外光谱分析

液体培养发菜细胞,发菜细胞经去藻体、浓缩、透析、脱蛋白、醇沉、DEAE-52离子交换柱层析分级、Sephadex-100葡聚糖凝胶柱分级处理得到发菜胞外精多糖。以硫酸根的取代度为指标,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验,建立因素与响应值之间的数学模型,确定适宜的发菜胞外多糖硫酸化条件。结果表明,发菜胞外多糖硫酸化修饰最佳条件为反应温度71 ℃、反应时间3 h、氯磺酸-吡啶体积比1∶7,在此条件下,硫酸化取代度为5.05。红外光谱检测表明,硫酸基团已与多糖分子结合。     

硝酸钠对发状念珠蓝细菌CO2间断通气培养的影响

研究了不同浓度NaNO3对CO2间断通气培养与NaHCO3添加培养条件下发状念珠蓝细菌生长、光合速率、胞外多糖积累、蛋白质含量、色素含量、磷酸根与硝酸根消耗、细胞固碳率以及光合效率的影响。结果表明,在CO2通气条件下添加NaNO3能够显著促进发状念珠蓝细菌的生长。2.0 g/L的NaNO3为最佳浓度,干重达到1.56 g/L,为对照的2.29倍,呼吸与净光合速率达到最大。当NaNO3浓度达到2.5 g/L时,藻细胞干重停止增加。细胞叶绿素含量随着NaNO3浓度的增加而增加。硝酸钠添加组胞外多糖的含量相比不添加组均下降,但添加组的多糖含量随NaNO3浓度的增加而增加。细胞蛋白质含量随NaNO3浓度的增加而增加,在2.0 g/L时达到最高。与生物量的增加相对应,细胞对两种盐分的利用率在NaNO3为2.0 g/L时达到最大。CO2通气培养时添加NaHCO3可进一步促进细胞的生长。在两种碳源同时存在时,NaNO3对细胞的生长促进作用与单一碳源存在培养时类似。     

硝酸钠对发状念珠蓝细菌生长的促进作用

研究了添加不同浓度的藻类培养常用无机氮源NaNO,对发状念珠蓝细菌生长、光合速率、胞外多糖积累、蛋白质含量、色素含量以及磷酸根与硝酸根消耗的影响。结果表明,添加NaNO3对发状念珠蓝细菌的生长具有促进作用,2．0g／L的NaNO3对细胞生长的促进作用最大,藻细胞干重达到0．83g／L,净光合速率最大,随着添加浓度的继续增加,细胞干重达到平衡。细胞呼吸作用在NaNO3为2．5g／L时最大。细胞蛋白质含量随NaNO3浓度的增大逐渐升高,与此相应,细胞对NO3^-与PO43^-的利用率也逐渐增高。在不同NaNO3浓度下,培养15d后的培养液的pH值差异不显著,但是添加组的最终pH值明显比不加硝酸钠的空白对照要小。     

发状念珠藻不同细胞破碎方法的研究

为了获得野生发状念珠藻和液态培养发状念珠藻细胞破碎和提取藻蓝蛋白的最佳方法,进行了发状念珠藻细胞破碎方法的研究.采用液氮研磨、反复冻融,超声破碎,高压均质和玻璃珠破碎这几种方法对野生和液态培养发状念珠藻进行破碎研究.通过测定破碎率、藻蓝蛋白提取得率和纯度,对几种细胞破碎效果和藻蓝蛋白提取方法进行比较.结果表明,采用高压均质方法能获得最佳的破碎效果,当野生发状念珠藻和液态培养发状念珠藻细胞密度为10mg/mL时,破碎率分别达到96.45%和97.06%.反复冻融法为提取液态培养发状念珠藻藻蓝蛋白最理想的方法,其藻蓝蛋白的纯度和提取得率分别为0.468和1.28%;高压均质为提取藻蓝蛋白的最理想方法,其藻蓝蛋白纯度和提取得率分别为0.153和1.43%.     

盐胁迫环境下发菜胞外多糖抗氧化作用及镇痛抗炎活性

为研究NaCl（0.3 mol/L）胁迫条件下发菜胞外多糖体外抗氧化作用与体内镇痛抗炎活性,本实验通过体外自由基（羟自由基、O2－·、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH）自由基）清除能力实验评价盐胁迫发菜胞外多糖的抗氧化作用;采取小鼠温浴甩尾法镇痛实验并结合皮下注射及腹腔注射两种给药方式分析盐胁迫发菜胞外多糖的镇痛作用;通过观察二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制效果分析盐胁迫发菜胞外多糖的抗炎作用。结果表明：相比于无盐胁迫的发菜胞外多糖,盐胁迫发菜胞外多糖对羟自由基、O2－·、DPPH自由基3 种不同类型的自由基清除能力均有提高;盐胁迫发菜胞外多糖镇痛活性优于无盐胁迫发菜胞外多糖,痛阈值显著提高（P＜0.05）,腹腔注射比皮下注射多糖吸收速率更快,腹腔注射后20 min药效达到峰值,皮下注射后30 min药效达到峰值;盐胁迫发菜胞外多糖有更好的抗炎效果,且盐胁迫发菜胞外多糖的抗炎作用呈现出一定的量效关系,高剂量（30 mg/kg mb）对耳肿胀治疗效果最佳。综上所述,相较于无盐胁迫发菜胞外多糖,盐胁迫发菜胞外多糖具有更好的体外抗氧化与抗炎镇痛活性。