同时检测伐地那非及其类似物的免疫学方法

伐地那非是用于治疗阳痿的磷酸二酯酶(phosphodiesterase type-5,PDE-5)抑制剂药物。违法添加到保健品和中成药的伐地那非及其结构类似物对公众健康构成了威胁。单克隆抗体4B9被鉴别为能够同时检测伐地那非及其类似物。以这株抗体建立的间接竞争ELISA方法,对伐地那非的检测限为5.0 ng/mL,线性范围为5.0~40 ng/mL(R2=0.952),IC50值为18.2 ng/mL。对20个中成药进行检测没有发现假阳性,伐地那非最低检出浓度为0.08 mg/g;添加回收率76%~116%,批内差异为9.7%~16.2%。     

液相色谱-质谱联用法检测保健品中非法掺入的硫代伐地那非

目的：建立了保健品中非法掺入的硫代伐地那非HPLC-MS专属检测方法。方法：保健品样品经甲醇超声提取得提取液,再通过液相色谱-串联四级杆质谱进行分析,根据相对分子量、液相色谱保留时间等,对保健品中非法掺入的硫代伐地那非进行定性以及定量分析。 结果表明：硫代伐地那非在浓度为10ug/mL~200ug/mL范围内,呈良好线性关系,R2=0.998,精密度和稳定性良好,加样平均回收率为99.9%,RSD为0.613%,方法准确可靠,专属性强,并测得某市售保健品中硫代伐地那非的含量为0.34%。结论：液相色谱-质谱联用法专属性强,灵敏度高,可作为检测保健品中非法掺入硫代伐地那非的有效方法。     

食品中新型那非衍生物丙氧苯基羟基伐地那非的筛查和定量测定

目的 对在食品中发现的一种新型伐地那非衍生物进行筛查,并建立定量测定方法。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱在食品中发现一种与伐地那非结构类似的化合物。通过高分辨质谱碎片离子推测该伐地那非结构类似物的分子结构及裂解规律,与定制合成的对照品比较,确定物质名称。采用高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法的多反应监测模式进行扫描,外标法定量测定。结果 在食品中筛查出新型那非衍生物丙氧苯基羟基伐地那非,丙氧苯基羟基伐地那非在2.0~50.0 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,方法检出限为0.02 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg,在咖啡、压片糖果、果冻及植物饮料基质中3个加标水平下的平均回收率为87.6%~102.6%,相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.5%~6.3%,方法重现性和稳定性良好,RSD＜5%。采用该方法对实际样品进行测定,发现34个阳性样品,含量范围为1.60×103~8.10×103 mg/kg。结论 该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点,可用于食品中那非衍生物丙氧苯基羟基伐地那非的筛查和定量测定,为打击非法添加伐地那非衍生物的监管提供技术支持。     

食品中一种新型非法添加物O-丙基伐地那非的快速筛查和定量测定

摘要：目的对食品中发现的一种非法添加的新型PDE-5抑制剂进行结构解析并建立定量测定方法。方法采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC-DAD）发现了一种未知的新型伐地那非类似物,采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱（UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）对其结构进行质谱解析,并依据解析的化学结构购买对照品,确定该物质为O-丙基伐地那非。采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)建立典型食品中O-丙基伐地那非的定量测定方法。结果O-丙基伐地那非在0.5025~50.25ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数（r）为0.9998,方法检出限为0.025mg/kg,方法的定量限为0.05mg/kg,在咖啡、压片糖果、保健酒基质中3个水平加样回收率分别为92.5%、86.3％、98.6%,RSD均小于4.6％。采用该方法对市场监管部门送检的93批样品进行测定,结果其中17批检出O-丙基伐地那非,其含量为28.3~359mg/kg。结论所建立的方法快速、灵敏、准确,可用于O-丙基伐地那非的筛查和定量。研究思路可给其他非法添加未知物的鉴定提供参考。     

检测伐地那非的单克隆抗体制备方法

为了能够获得检测伐地那非的单克隆抗体,采用戊二醛作为连接剂,将伐地那非连接到载体蛋白上,使伐地那非药效必需基团暴露在人工抗原表面作为主要抗原决定簇。经条件优化,偶联比为6.8:1的抗原免疫小鼠后产生的抗体滴度最高。通过杂交瘤技术获得了4株能够同时识别伐地那非及其类似物Piperidenafil的单克隆抗体。     

保健酒中舒林酸免疫学检测方法的建立

舒林酸是常用非甾体抗炎药物,近期常发现不法生产者在保健酒中添加舒林酸增加治疗效果,这种现象对消费者健康构成威胁。为了建立快速检测舒林酸的免疫学方法,本文以活泼酯法将舒林酸分别连接到BSA制备免疫抗原,连接到OVA上制备检测抗原。用免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体,配合检测抗原经条件优化建立竞争抑制酶联免疫吸附检测方法。实验结果表明,检测体系IC50值为18.1 ng/mL,最低检测限为3.5 ng/mL,检测保健酒中舒林酸加标回收率在82.1-94.2%,变异系数小于7.6%。与8种相关药物交叉反应率都小于0.05%。与用ELISA方法与HPLC检测市售保健酒,2例阳性和28例阴性结果全部吻合。因此,本文所建立的舒林酸免疫学检测方法具有灵敏度高和特异性强的特点,能够满足保健酒中快速筛选舒林酸的需要。     

磷酸二酯酶-5抑制剂检测方法研究进展

3种获准上市的磷酸二酯酶-5抑制剂药物(西地那非、伐地那非和他达那非)在市场上获得了巨大成功。不法商人把这些药品违法添加到植物保健品和药品中谋取利益,对公众的健康构成了威胁。不断出现的PDE-5抑制剂的结构类似物导致问题变得更加复杂。目前,在标准品的参照下,TLC、HPLC、LC-MS和MECC等检测方法可以实现对已知PDE-5药物的检测。只有液相/离子阱串联质谱能够同时检测合法的药物和未知的PDE-5抑制剂类似物。免疫学检测方法正成为快速、灵敏、高效检测PDE-5药物的新方法。     

保健酒中萘普生免疫学检测方法的建立

萘普生是疗效显著但有一定副作用的非甾体抗炎药物,近期频繁发现不法生产者在抗风湿保健酒中添加萘普生增加治疗效果,这种现象对消费者健康构成威胁。为了究建立快速检测萘普生的免疫学方法, 本文以活泼酯法将萘普生分别连接到BSA制备免疫抗原,连接到OVA上制备检测抗原。用免疫抗原免疫家兔制备多克隆抗体,配合检测抗原经条件优化建立竞争抑制酶联免疫吸附检测方法。实验结果表明,检测体系IC50值为23.0 ng/mL,最低检测限为3.1 ng/mL,检测保健酒中萘普生加标回收率在87.3~102.1%,变异系数小于8.9%,与8种相关药物交叉反应率都小于0.05%。且与用ELISA方法与HPLC检测市售保健酒,1例阳性和19例阴性结果全部吻合。因此,本文所建立的免疫学检测萘普生的实验方法,具有高灵敏度和特异性,能够满足保健酒萘普生快速筛选的需要。     

保健食品中O-丙基羟基伐地那非的快速筛查、确证和定量测定

目的 利用高分辨质谱仪快速筛查壮阳类保健食品中的磷酸二酯酶5型抑制剂(phosphodiesterase type 5 inhibitors, PDE-5i), 确证其中发现的新型非法添加物并建立定量检测方法。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪(ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry, UPLC-Q-TOF/MS)对20批次保健食品中的非法添加物进行日常非靶向筛查, 在2批次压片糖果中鉴别出一种新型伐地那非类似物。结合化合物的质谱裂解规律及核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectrometry, NMR)对未知物结构进行确证。采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(ultra performance liquid chromatography-coupled triple quadrupole mass spectrometry, UPLC-MS/MS)建立了典型食品基质中未知物的定量检测方法。结果 未知物被确证为O-丙基羟基伐地那非。该物质溶剂校准和基质匹配曲线在2~100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好, 相关系数(r2)大于0.995, 检出限为0.05 mg/kg, 定量限为0.10 mg/kg。在固体饮料、压片糖果、果冻基质中3个水平加标回收率为94.45%~104.16%, 相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为0.70%~4.02%。采用该方法测得2批次阳性样品中O-丙基羟基伐地那非的含量分别为22.0 mg/kg、13.8 g/kg。结论 本方法适用于食品中那非类似物的快速筛查, 用于O-丙基羟基伐地那非的定量检测高效、灵敏、准确。本研究为食品基质中非法添加物的系统性确证和定量研究提供了可供借鉴的参考模型。     

纸喷雾离子化质谱法快速筛查保健食品中违禁添加的磷酸二酯酶5抑制剂

目的建立纸喷雾离子化质谱(PSI-MS)法快速检测保健食品中3种非法添加的磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂(西地那非、伐地那非和他达拉非)的方法。方法利用PSI-MS法对样品中非法添加物进行初步定性鉴别,并通过内标法进行半定量分析。结果 24种包括胶囊、片剂、丸剂、粉末、酒剂、糖浆及口服液等剂型在内的待测市售保健品的PSI-MS检测结果与HPLC-UV检测结果基本一致。各目标物在一定范围内线性关系良好,相关系数r~2均0.99,检出限均在1.0 mg/L以下,相对标准偏差为20%~24%。结论本方法快速、准确、专属性强,适用于大批量复杂基质样品中PDE5抑制剂的快速筛查。     

表面增强拉曼光谱在食品添加剂和违法添加物检测中的应用

食品安全问题一直是广大人民群众关注的热点,现有的检测技术多限于实验室内部,具有专业性强、成本高、耗时长等缺点.表面增强拉曼光谱技术作为一种新兴的分析检测技术,具有操作简便、耗时短、消耗少、无损害、灵敏度高等优势,在食品快速检测行业具有广阔的应用前景.本文简述了表面增强拉曼光谱技术在食品添加剂及违法添加物快速检测中的最新...     

保健食品违法经营行为法律责任探究

近年来我国保健食品行业快速发展、市场不断扩大, 但同时暴露的问题也越来越多。保健食品虚假宣传的屡禁不止、保健食品冒充药品欺骗消费者、在涉及疾病治疗功能方面与药品相混淆、在保健食品中非法添加违禁药物等违法行为, 不仅侵害了消费者身心健康, 对整个保健食品产业都造成了负面影响。本文从刑事责任、行政责任、民事责任等方面分析了保健食品违法经营应承担的法律后果。对市场监管部门查处涉及保健食品违法经营案件、消费者维护自身权益、保健食品经营者规范经营行为, 具有一定的现实意义。     

食品多组分添加剂及非法添加物的HPLC—HRMS广谱筛查

采用离子阱飞行时间串联质谱(LCMS-IT-TOF)技术对葡萄酒、果汁等饮料中多组分添加剂和禁用染料进行快速筛查和确证。构建了合成色素、甜味剂、禁用染料等41种化合物的精确分子质量数和多级质谱碎片离子数据库。样品经甲醇—水(体积比1;1)稀释后,以C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)分离,甲醇和2mmol/L乙酸铵为流动相梯度洗脱。筛查检出限为0.005~1.000 mg/kg。在3个添加浓度下平均回收率41.2%~114.1%,相对标准偏差(RSD)为4.3%~16.4%。利用精确质量数和数据库中质谱图的检索匹配度实现快速筛查;结合保留时间、同位素丰度和多级特征碎片离子对目标化合物进行确证。该方法具有简便快速、准确、灵敏度高等优点,同时可实现无标准物质的情况下,较短时间内完成对食品中可能存在的添加剂和非法添物进行筛查检测,缩短检测时间,提高检测效率。     

保健食品非法添加物检测技术研究进展

保健食品是适用于特定人群食用,具有调节作用,不以治疗疾病为目的的食品。本文对近年来我国保健食品中非法添加物现状、安全性和具体的检测技术加以系统整理、分析和总结,为规范保健食品技术评审和探索快速、有效的检测方法提供参考。      

拉曼光谱快速检测减肥保健品中非法添加酚酞的研究

目的:采用拉曼光谱法快速检测减肥保健品中非法添加的酚酞。方法:采用拉曼光谱对减肥保健品中的非法添加物质酚酞进行快速检测,首先使用适当的溶剂对减肥保健品进行提取,然后对提取液进行过滤,最后直接进行拉曼光谱的测试。结果:建立了酚酞-甲醇溶液的标准曲线,并且对添加不同浓度酚酞的减肥保健品进行拉曼光谱检测,所得结果与酚酞实际添加量一致。结论:结合简单的前处理方法,拉曼光谱法可对减肥保健品中非法添加的酚酞进行快速检测,并可进行定量分析;该方法快速、简便、成本低、可同时得到定性与定量结果,该方法的检测限为1%。      

高效液相色谱法检测白酒中非法添加头痛粉

采用高效液相色谱（HPLC）法建立白酒中非法添加物头痛粉的检测方法。采用Shim-paek CLC-ODS柱分离头痛粉,二极管阵列检测器（DAD）进行检测,外标法定量。该方法的线性相关系数R2＞0.999,相对标准偏差（RSD）＜5%,平均回收率为91.7%～100.6%,阿司匹林、对乙酰氨基酚方法检出限为1.0 μg/mL,定量限为3.0 μg/mL;咖啡因检出限为1.5 μg/mL,定量限为4.5 μg/mL。该方法准确、灵敏度高、分离度好,适用于白酒中非法添加物头痛粉的检测。     

高效液相色谱—串联飞行时间质谱法检测安神类保健食品中非法添加物

建立了安神类保健食品中的5种非法添加物(青藤碱、罗通定、扎来普隆、文拉法辛、褪黑素)的高效液相色谱—串联飞行时间质谱LC-Q-TOF/MS)的检测方法。用甲醇超声提取试样中5种违法添加物,以20mmol/L乙酸铵+0.1%(体积分数)甲酸溶液/甲醇溶液进行梯度洗脱,选用飞行时间质谱仪,采用电喷雾电离方式(ESI+),通过多反应监测(MRM)定量。结果表明:5种非法添加物在10～1 000μg/L时线性关系良好,相关系数0.99;且空白样品的平均回收率为92.8%～110.1%,精密度为0.9%～1.8%。采用建立的方法对6种市售保健食品(胶囊、茶、口服液)进行检测,结果表明其中一种胶囊中含有非法添加物青藤碱,含量为1.656mg/kg。该方法选择性强、灵敏度高、处理方法简单、测定速度快。