酪蛋白双酶水解物ACE抑制肽的分离纯化

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示：双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400～800u。     

酶膜反应器水解酪蛋白连续制备ACE抑制肽的研究

目的:将酶解与膜分离耦合,连续制备ACE抑制肽.方法:通过考察超滤膜包对原料蛋白质及酶的截留、膜通量以及膜包滤出液的ACE抑制活性,确定试验用膜包;通过优化的超滤条件,采用静态间歇式反应、半连续反应和连续反应3种不同的模式制备ACE抑制肽.结果:静态反应的得率、单位时间产量和单位活力酶对应的产量远小于半连续和连续反应,其中连续反应的得率迭43.4%,单位时间产量为6284mg,h,单位活力酶对应的产量为0.23mg/U,产物的ACE抑制率迭81.6%(1mg/mL),整个系统持续稳定反应8 h以上.结论:将醇解反应与膜分离耦合来水解牛乳酪蛋白,制备ACE抑制肽,可实现连续化生产,提高原料和酶的利用率.     

酪蛋白源ACE抑制肽的评价方法和研究进展

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)在血压调节方面起着重要作用。近年来,ACE抑制肽已成为生物活性肽研究领域的热点。文章综述了ACE抑制肽的作用机制、评价方法和酪蛋白源ACE抑制肽的国内外研究进展。     

酪蛋白源ACE抑制肽的评价方法和研究进展

血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)在血压调节方面起着重要作用。近年来,ACE抑制肽已成为生物活性肽研究领域的热点。文章综述了ACE抑制肽的作用机制、评价方法和酪蛋白源ACE抑制肽的国内外研究进展。      

酪蛋白源ACE抑制肽干燥工艺的探讨

喷雾干燥技术和冷冻干燥技术对酪蛋白源ACE抑制肽的抑制活性影响差异不显著(P>0.05),通过比较不同的喷雾干燥工艺条件,确定其进口温度范围为140～160℃,出口温度范围为70～90℃。1L小试和10L小试放大试验结果证实,肽得率稳定,为29%左右,半抑制质量浓度(IC50)为0.53g/L。     

酪蛋白源ACE抑制肽的精制

采用离子交换树脂对酪蛋白源ACE抑制肽进行脱盐处理,结果表明,以10倍柱体积/h流速,经阴阳离子交换树脂后脱盐率达80%左右,氮回收率为83%,脱盐处理前后基本上对其ACE抑制活性和氨基酸含量没有影响。      

酪蛋白源ACE抑制肽的精制

采用离子交换树脂对酪蛋白源ACE抑制肽进行脱盐处理,结果表明,以10倍柱体积/h流速,经阴阳离子交换树脂后脱盐率达80%左右,氮回收率为83%,脱盐处理前后基本上对其ACE抑制活性和氨基酸含量没有影响。     

酪蛋白源ACE抑制肽的分离纯化

采用碱性蛋白酶酶解酪蛋白制备ACE抑制肽.通过正交实验得到最佳酶解条件为:温度50℃,pH值7.5,酶用量5%,底物质量分数5%,在此条件下,ACE抑制活性为47.23%.采用超滤对酶解液进行初步分离,得到分子量小于4 ku的组分,其ACE抑制活性为57.34%.用凝胶柱SephadexG一25进行进一步纯化,纯化后的组分ACE抑制活性最高可达62.78%,比原酶解物的ACE抑制活性高了24.77%,其相对分子质量在1 500 u以下.     

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽

通过模拟胃肠道消化,采用单酶和复合酶分步水解酪蛋白获得小分子的血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。首先通过胃蛋白酶水解条件的优化获得具有高ACE抑制活性肽。然后以此为底物通过胰蛋白酶和胰凝乳蛋白复合酶水解条件优化获得具有高ACE抑制活性的小分子肽。结果表明：第一步的胃蛋白酶水解最优条件为：[E]/[S]=6%、[S]=0.015g/mL、pH=1.8、t=37℃、t=2h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为84.5%,分子质量集中在2000D以下;第二步的复合酶水解最优条件为：m胰蛋白酶(6%):m胰凝乳蛋白酶(3%)=2:1、pH=7.8、t=48℃、t=5h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为85.9%,分子质量集中在500D以下。研究表明,通过分步酶解选择合适的酶解条件可以获具有较高ACE抑制活性的小分子肽。     

两步法制备高活性酪蛋白ACE抑制肽的工艺参数研究

为了制备高活性ACE 抑制肽,研究两步法高活性酪蛋白ACE 抑制肽的制备工艺条件参数。利用枯草杆菌碱性蛋白酶55℃水解酪蛋白6h 制备酪蛋白ACE 抑制肽,IC50 为38.6μg/mL;采用相同的酶进行Plastein 反应来修饰酪蛋白ACE 抑制肽,并应用响应面分析法优化修饰反应条件。固定酪蛋白ACE 抑制肽质量分数为35%,以ACE 抑制肽的游离氨基减少量为指标,优化的修饰反应条件为酶添加量7.7kU/g 蛋白质、温度42.7℃、反应时间6h,在此条件下,酪蛋白ACE 抑制肽的游离氨基减少量达到179.72μmol/g 蛋白质。ACE 抑制活性分析结果表明,修饰后ACE 抑制肽的抑制活性显著提高且与修饰反应程度相关,IC50 可降0.5μg/mL。     

酪蛋白水解物中ACE抑制肽分离及氨基酸序列分析

以牛乳酪蛋白为底物,先经胃蛋白酶水解,再经胰蛋白酶水解,从水解物中分离获得血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽并确定其氨基酸序列。酪蛋白的双酶水解物经超滤和葡聚糖凝胶色谱分离,分离得到3 个组分,收集高ACE活性抑制效果组分Ⅱ和Ⅲ。采用离子色谱法分析水解片段的氨基酸组成,液相色谱-质谱法分析水解片段的氨基酸序列,采用固相合成法制备获得的短肽片段,用分光光度法检测ACE活性抑制效果。结果表明,组分Ⅱ包含缬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、酪氨酸,共8 种氨基酸,组分Ⅲ包含痕量的丝氨酸和酪氨酸;将组分Ⅱ和Ⅲ经液相色谱-质谱分析,获得8 个片段,其中,αs2-f（56～57）∶YS、αs2-f（98～107）∶YQKFPQYLQY和κ-f（52～61）∶INNQFLPYPY具有ACE活性抑制作用,其IC50值分别为11.89、11.75 μg/mL和421 μg/mL。     

瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽的条件优化

本研究以酪蛋白为原料,对瑞士乳杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生血管紧张素转化酶(angiotensin I-convertingenzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素分析和响应面试验设计,确定酪蛋白酶解制备ACE 抑制肽的最佳工艺条件为：底物浓度6%(W/W), 酶解温度39.64℃、pH 8.94、酶与底物的比0.92%(W/W),底物预处理温度90℃、酶解时间8h,其对ACE 抑制率可达92.67%。     

具ACE抑制活性的大豆肽的制备及精制研究

采用酶解技术制备具ACE抑制活性的大豆肽混合物。选择了最佳水解用酶,优化了反应条件。确定碱性蛋白酶解最佳条件为:pH9.0,温度50℃,底物浓度6%,酶用量([E]/[S])3%,作用时间4h。选择D3520型大孔树脂对水解产物进行脱盐精制,脱盐率91.2%,肽回收率89.3%,ACE抑制活性提高了28.5%,大豆分离蛋白ACE抑制肽混合物分子质量主要分布为200-720,在pH3-10,溶解性达98.1%以上,且稳定性好。     

牛乳酪蛋白源ACE抑制肽对大鼠的降血压作用

为了考察牛乳酪蛋白源血管紧张素转化酶抑制肽(Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides,ACEI)的降血压作用,以自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)为动物模型,给予样品30 d后,检测大鼠的血压、心率、血...     

脯氨酸存在下酪蛋白ACE抑制肽的Plastein反应修饰

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备ACE 抑制肽,其IC50 为47.1μg/mL;采用相同酶催化ACE 抑制肽和脯氨酸进行Plastein 反应,对ACE 抑制肽进一步修饰,并用响应面分析法优化反应条件。在ACE 抑制肽质量分数为35%,反应时间为6h,以反应体系游离氨基减少量为指标,得到适宜的反应条件为：温度为47.8℃、脯氨酸比例为0.54、酶添加量为9.5kU/g pro,此条件下体系游离氨基减少量约195.7μmol/g pro。在适宜条件下改变反应时间对酪蛋白ACE 抑制肽进行同程度的Plastein 反应修饰,制备出6 个修饰程度不同的多肽混合物并测定它们的ACE 抑制活性、计算其IC50 值。结果表明：修饰产物的ACE 抑制活性随修饰程度的增加不规则变化,当反应体系的游离氨基减少量为195.7μmol/g pro 时,修饰产物的IC50 降低至0.2μg/mL。     

微生物发酵法制备大豆ACE抑制肽菌种的筛选

以大豆分离蛋白为底物,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和肽含量为检测指标,选择5株乳酸菌、3株霉菌和1株枯草芽孢杆菌为出发菌种,通过微生物发酵筛选出具有高ACE抑制活性的发酵菌株。结果表明:乳酸菌中具有强ACE抑制活性的菌株为保加利亚乳杆菌,ACE抑制率和肽含量分别为57.93%和3.27mg/mL;霉菌中具有强ACE抑制活性的菌株为米曲霉,ACE抑制率和肽含量分别为41.23%和2.17mg/mL;枯草芽孢杆菌ACE抑制率和肽含量分别为45.02%和2.25mg/mL。综合比较9种菌株的发酵特性,选用保加利亚乳杆菌作为制备大豆抗高血压活性肽优良菌株。     

利用海洋生物蛋白制备ACE抑制肽的研究进展

血管紧张素转化酶(angiotensin convert enzyme,ACE)在血压调节方面起着重要作用,当其受到抑制时血压就会降低。本文综述了A C E抑制肽的降压原理、活性检测方法、分离提纯和海洋生物蛋白源A C E抑制肽的国内外最新研究进展,并对其应用前景进行了展望。