β-乳球蛋白IgE抗原决定簇的识别

以β- 乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β- 乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β- 乳球蛋白IgE 抗原决定簇,分析影响致敏性的关键氨基酸,探讨牛乳过敏机理。结果表明：β- 乳球蛋白IgE抗原决定簇有4 条,氨基酸序列分别为17～31、72～86、92～106、152～166,并且苏氨酸(AA20)、蛋氨酸(AA23)、天冬氨酸(AA27)是影响β- 乳球蛋白致敏性的关键氨基酸。说明特异性水解抗原决定簇或定点修饰氨基酸可以实现过敏原脱敏的目的。     

花生过敏原Ara h1免疫显性抗原决定簇的鉴别

为探索花生过敏原致敏机理,采用固相合成肽技术合成Ara h1的23条多肽。以花生过敏患者血清为抗体,鉴别和定位Ara h1的抗原决定簇。结果表明:Ara h1第21～34位,第89～98位,第393～403位,第498～507位,第594～605位氨基酸序列识别率在60%以上,为Arah1的抗原决定簇,其中第498～507位的多肽识别率为100%,是显性抗原决定簇,其氨基酸序列为RRYTARLKEG。用丙氨酸依次取代显性抗原决定簇的每个氨基酸,结果抗原决定簇的致敏性增强或丧失,说明Ara h1第499位和第503位的精氨酸和第502位的丙氨酸为降低Ara h1致敏性的关键氨基酸。     

牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白的生物信息学分析

目的用生物信息学方法分析预测牛奶中主要过敏原α_(s1)-酪蛋白的结构与功能。方法从Genbank搜索α_(s1)-酪蛋白的氨基酸序列,采用多种生物信息学分析手段对该序列进行分析预测,包括信号肽、疏水性、跨膜区、活性位点、B细胞表位、二级结构和三级结构。结果α_(s1)-酪蛋白的1~16位是信号肽,无跨膜区,有3个糖基化位点、5个酪蛋白激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点。IEDB数据库预测α_(s1)-酪蛋白的抗原区分别为氨基酸的16~29、45~50、52~54、56~70、74~75、77~86、94~104、142~152、173~179和185~210,同时预测构建了α_(s1)-酪蛋白的二级结构和三级结构。结论预测得到的α_(s1)-酪蛋白结构和功能信息,可为牛奶过敏原酪蛋白的致敏机制研究及检测方法建立提供信息基础。     

特异性水解αs1-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83～105的蛋白酶筛选

探索特异性水解αs1-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法.首先通过固相合成法合成αs1-酪蛋白作用表位aa 83～105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked ...     

牛乳αS1-酪蛋白与大豆蛋白交叉过敏原的识别鉴定

为识别牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原,鉴定其致敏特性,揭示交叉过敏机理,首先以牛乳过敏患者血清、αS1-酪蛋白小鼠单克隆抗体为探针,通过免疫印迹方法识别大豆蛋白交叉过敏原,然后通过生物信息学工具比对了交叉过敏原与αS1-酪蛋白的氨基酸序列相似性,进而通过体外消化实验和加热实验探究交叉过敏原的稳定性。结果表明：牛乳αS1-酪蛋白和大豆蛋白的交叉过敏原为β-伴大豆球蛋白α亚基（Gly m Bd 60K）,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明Gly m Bd 60K在2 min消化完全,并且加热对过敏原的交叉反应性没有影响。     

乳状液中αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的结构特点及吸附行为

乳状液界面处主要的酪蛋白成分是αs1-酪蛋白和β-酪蛋白.本文主要综述了这两种酪蛋白分子的结构特点并比较其差异,进一步阐述了pH、离子强度、分子聚合、未吸附粒子等因素对其吸附行为的影响.     

高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白含量

建立婴幼儿配方乳粉中A1、A2 β-酪蛋白的高效液相色谱-串联质谱测定方法。乳粉经尿素溶液溶解稀释,胰蛋白酶酶解,过膜后利用ACQUITY UPLC Peptide BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱仪测定。结果表明,A1、A2 β-酪蛋白在0.02～2.00 mg·mL^-1线性范围内,相关系数(R²)均≤0.99,检出限为0.05～0.10 g·kg^-1;定量限为0.2～0.5 g·kg^-1;平均回收率在92.08%～105.29%;平均相对标准偏差为1.5%～7.9%。随机选取了10个品牌的婴幼儿配方乳粉进行测定,得到A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白的含量在0～30.3 g·kg^-1。     

乳状液中αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的结构特点及吸附行为

乳状液界面处主要的酪蛋白成分是αs1—酪蛋白和β—酪蛋白。本文主要综述了这两种酪蛋白分子的结构特点并比较其差异，进一步阐述了pH、离子强度、分子聚合、未吸附粒子等因素对其吸附行为的影响。     

多酚氧化酶交联β-酪蛋白的抗原性变化初步研究

利用多酚氧化酶催化牛乳β-酪蛋白交联,并通过ELISA方法检测交联前后β-酪蛋白抗原性的变化。SDS-PAGE结果显示,多酚氧化酶可以有效地催化β-酪蛋白交联。同时,间接竞争ELISA检测的β-酪蛋白交联后的半抑制浓度(IC50值)由2.63μg/mL变为4.07μg/mL,表明交联后β-酪蛋白抗原性明显降低。本研究工作为通过多酚氧化酶交联制备低致敏性乳制品提供了部分理论依据。     

α-酪蛋白源ACE抑制肽对高血压大鼠血压的影响

研究水解α- 酪蛋白所得水解产物对原发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。用α- 酪蛋白水解产物以低、中、高3 个剂量(0.0245、0.1225、0.6125g/kg bw)分别灌胃SHR 大鼠,0.6125g/kg bw 灌胃正常Wistar 大鼠,测定灌胃后1～8h 尾动脉收缩压(SBP)。结果显示,单次灌胃8h 内,高剂量α - 酪蛋白水解产物对正常Wistar 大鼠的血压无影响;3 种剂量对SHR的血压升高有明显抑制作用,且高剂量组在0～6h 内降压效果最佳,SBP 维持在较低水平的时间最长,达到6h,SBP 值下降了(29.50 ± 1.0)mmHg。连续灌胃高剂量α- 酪蛋白水解产物可较长时间维持低水平SBP。     

牛乳中αs、β-酪蛋白组分的分离

以新鲜脱脂牛乳为原料,在碱性条件下添加钙盐进行选择性沉淀分离αs-、β- 酪蛋白组分,并用十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从CaCl2 溶液终浓度、冷却温度和反复溶解﹑沉淀次数三个方面对αs-、β- 酪蛋白的分离效果进行研究。结果表明：CaCl2 溶液终浓度0.065mol/L,冷却温度2℃,经3 次反复溶解﹑沉淀,分离得到的αs- 酪蛋白组分纯度较高,可达83.33%,β- 酪蛋白组分纯度为109.53%。     

Identification of the Critical Amino Acid Residues of Immunoglobulin E and Immunoglobulin G Epitopes in α‐Lactalbumin by Alanine Scanning Analysis

α‐Lactalbumin represents one of the major allergens causing cow milk allergy. Few studies have clearly evaluated immunological relationships between immunoglobulin E (IgE) and immunoglobulin G (IgG)‐binding epitopes of α‐lactalbumin. IgE‐ and IgG‐binding epitopes were immunolabeled with individual sera from cow milk‐allergic patients. Alanine scanning of immunodominant epitopes was used to identify the critical amino acid (aa). Our initial data revealed Val⁸, Phe⁹, Arg¹⁰, Tyr¹⁰³, Leu¹⁰⁵, and His¹⁰⁷ were the critical aa for IgE‐binding epitope. The critical aa of IgG‐binding epitopes were Phe⁹, Leu¹⁵, Pro²⁴, Trp²⁶, and His³². This study will provide necessary information to alter the cDNA to encode a protein capable of activating milk‐specific T cells, but with reduced IgE‐ or IgG‐binding capacity.     

竞争ELISA 法对牛乳β - 酪蛋白的检测

通过确定包被抗体最佳稀释度(anti- β-CN IgY 1:160)、封闭液及封闭时间(含1% 明胶的PBST,封闭1h)、酶标抗原(1:20)和待测脱脂牛乳样品稀释液(1:80)抗体作用时间(60min)、底物最佳反应时间(20min)、温度(37℃)等对竞争ELISA 效果有重要影响的因素,建立检测牛乳β- 酪蛋白的竞争ELISA 法。经敏感性实验和重复性实验证明本实验建立的竞争ELISA 法最低检出量为5.1μg/mL,变异系数(CV)小于5%,可以开发应用于牛乳及其制品的蛋白质品质快速检测。     

牛奶过敏原表位研究进展

详细地综述了牛乳酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、牛血清白蛋白的过敏原B细胞表位以及T细胞表位的研究进展,介绍了牛乳过敏原之间构象性表位的相似形以及线性表位序列位置的特异性,同时也简述了牛乳过敏原表位定位的方法及表位定位的应用。     

Identification of the critical amino acid residues of immunoglobulin E and immunoglobulin G epitopes on αs1-casein by alanine scanning analysis

α_s1-Casein represents one of the major allergens causing cow milk allergy. Few studies have clearly evaluated immunological relationships between IgE- and IgG-binding epitopes of α_s1-casein. This study aimed to map IgE- and IgG-binding epitopes of α_s1-casein by the serology method, and identify the critical amino acids of α_s1-casein by alanine scanning analysis. Our initial data revealed IgE-binding epitopes located in the sequences of AA 126 to 140, AA 6 to 20, AA 171 to 185, and AA 11 to 25. The sequences at AA 21 to 35, AA 56 to 70, and AA 161 to 175 were recognized by IgG antibodies. The alanine scanning analysis showed that IgE- and IgG-binding epitopes share the same critical AA: arginine at position 22 and phenylalanine at position 23. Results obtained from this study will provide necessary information to alter the cDNA to encode a protein with reduced IgE- or IgG-binding capacity.     

牛奶替代品致敏性的识别

为找到牛奶替代资源,以牛奶过敏患者血清为探针,识别牛奶及其制品过敏原,并鉴别山羊奶、水牛奶、驴奶蛋白与牛奶过敏患者血清交叉反应性。结果表明,β - 乳球蛋白和a- 酪蛋白为牛奶主要过敏原,山羊奶、驴奶总蛋白IgE 结合能力低于牛奶,二者可以作为牛奶替代资源。     

酪蛋白组分分离技术及消化性测定

本研究以牦牛乳干酪素为原料，分离得到纯度为74．2％的α-酪蛋白组分和纯度为75．0％的B．酪蛋白组分，其得率分别为69．5％和26．5％。通过酸凝性实验观察到在37℃，pH4．0条件下，α-酪蛋白组分形成了颗粒较大的凝块，而β-酪蛋白组分形成的是松软的絮凝物。体外消化实验结果亦显示β-酪蛋白组分的消化性要明显好于α-酪蛋白组分和牛乳酸沉酪蛋白。因而分离得到的β-酪蛋白组分可作为生产利于婴儿消化的新式配方乳粉的基料。     

α-松油醇对意大利青霉的抑制作用

测定α-松油醇对意大利青霉菌丝体形态及菌丝体生长的影响,并对其抑菌机制进行初步探讨。结果表明:α-松油醇能明显抑制意大利青霉菌丝体生长,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal fungicidal concentration,MFC)分别为2.00μL/mL和8.00μL/mL;经MIC和MFCα-松油醇处理后,意大利青霉菌丝体胞外pH值、胞外电导率及260 nm条件下吸光度显著增加,总脂质含量有显著下降。提示α-松油醇能改变细胞膜的通透性、破坏细胞膜结构的完整性,导致胞内成分泄露,从而抑制意大利青霉菌丝体生长。