砀山酥梨多酚氧化酶酶学特性及抑制效应的研究

多酚氧化酶是酶促褐变的关键酶,其特性与对其抑制效应研究一直是果蔬酶促褐变生理生化研究的重要内容,本试验以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对砀山梨多酚氧化酶的酶学特性及不同抑制剂对多酚氧化酶活性的影响进行了研究。结果表明：砀山梨PPO的最适pH为4.5,最适温度为34℃;短时间高温能显著抑制PPO活性;PPO催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,该酶促反应的最大速率为178.57U/min,酶反应速度为最大反应速度1/2时的底物浓度为0.125mol/L;柠檬酸、L-半胱氨酸、抗坏血酸,亚硫酸氢钠较柠檬酸能较好地抑制PPO活性,随着浓度的升高,抑制效应逐渐增强,但综合研究表明L-半胱氨酸抑制效应较好。     

荔枝与荔枝酒褐变控制

以荔枝及荔枝酒为试料,研究荔枝多酚氧化酶(PPO)的酶学特性及荔枝酒发酵过程中的褐变机理及控制措施。结果表明：荔枝PPO存在同功酶,荔枝PPO最适底物为没食子酸;以没食子酸为底物,荔枝PPO最适反应pH值为8.0,最适反应温度50℃,荔枝PPO的动力学参数为：米氏参数(Km)为26.033mmol/L,最大反应速度(Vmax)为34.816g/(L·min);荔枝PPO对酸碱、对热稳定性较差;荔枝酒发酵过程中褐变的主要原因是其PPO引起的酶促褐变。因此,低温贮藏和高温热处理可有效抑制荔枝及荔枝酒在贮藏和加工中酶促褐变反应。     

白玉菇多酚氧化酶的酶学特性

以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对白玉菇PPO的酶学特性进行了研究。结果表明,样品PPO酶促反应产物的最大吸收波长为420 nm,反应时长应为3 min;反应的最适pH值为6.5,最适温度为35℃,最适底物浓度为0.10 mol/L;白玉菇PPO酶促反应的动力学方程为1/V=2.752264/[S]+17.348 9,米氏常数为:Km=0.159mol/L,白玉菇菌柄多酚氧化酶活性高于菌盖。     

山楂多酚氧化酶的酶学特性研究

研究山楂多酚氧化酶(PPO)的酶学特性。采用分光光度法测定PPO的酶活性,考察底物特异性、p H值、温度、热稳定性、底物浓度、金属离子以及抑制剂对PPO酶活性的影响。实验结果表明,山楂PPO的最适底物为邻苯二酚;最适p H值为6.5;最适温度为40℃;90℃热处理1.0 min或85℃处理1.5 min PPO酶活基本完全丧失;山楂PPO最适底物浓度为0.10 mol/L,PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程,相应的动力学参数Km=55.83 mmol/L,Vmax=98.04 U/min;Al3+对PPO酶活的抑制作用较强,Mn2+、Ca2+和Zn2+次之,Cu2+和Mg2+对PPO酶活抑制作用不明显,Fe3+对PPO酶活有一定的促进作用;四种抑制剂对山楂PPO酶活均有一定的抑制作用,且抑制效果与抑制剂浓度呈量效关系,相同浓度下抑制效果由强到弱顺序为:抗坏血酸L-半胱氨酸亚硫酸氢钠柠檬酸,抗坏血酸的抑制效果最为显著。     

枇杷多酚氧化酶酶学特性的研究

采用分光光度法,研究枇杷多酚氧化酶(PPO)的特性,包括不同温度、pH值、底物浓度和抑制剂对PPO活性的影响,以及PPO的热稳定性.结果表明:枇杷PPO的最适酶促反应温度为20 ℃;最适pH值为6.4;Km为0.020 mol/L,Vm为10.49△A/min·g·FW;80℃热处理50 s可钝化PPO的活性;抗坏血酸和亚硫酸钠为强烈抑制剂,质量分数为4227 mg/kg·FW的抗坏血酸和4537 mg/kg·FW的亚硫酸钠能有效抑制PPO的活性.     

南国梨多酚氧化酶的研究

以新鲜南国梨果实为原料,邻苯二酚为底物,采用分光光度法研究南国梨多酚氧化酶的酶学特性。结果表明:p H和温度对新鲜南国梨PPO活性有明显的影响,最适p H为6.8,新鲜南国梨PPO最适温度为40℃。进一步研究了抑制剂抗坏血酸、柠檬酸、亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、EDTA-2Na和各种金属盐[CuSO_4、CaCl_2、Na_2SO_4、Al(NO_3)_3、CdCl_2、HgCl_2、MnCl_2]对南国梨PPO的影响,其中0.1 mmol/L的抗坏血酸对新鲜南国梨PPO活性有明显抑制作用高达50%。南国梨PPO催化底物邻苯二酚的酶促反应动力学与米氏方程高度符合,R2=0.998,其动力学方程为1/[V]=0.002/[S]+0.019,最大反应速率Vmax为52.632 U/min,米氏常数Km为0.010 5 mol/L。     

白萝卜多酚氧化酶的酶学特性研究

白萝卜作为我国第二大蔬菜。其贮运和加工过程中的褐变多以酶促褐变为主,全面系统地了解白萝卜多酚氧化酶（PPO）的酶学特性,并研究其抑制手段,对提升白萝卜及其制品的品质和商品价值有着重要的意义。本文以新鲜白萝卜为原材料,采用丙酮洗涤、0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液匀浆法从中提取PPO,考察了pH、温度对酶活的影响,分析了其温度稳定性、底物浓度对PPO活性的影响,探讨了过程的反应动力学,并对多种酶抑制剂对PPO活性的影响进行了比较,为控制加工过程中白萝卜的酶促褐变提供了理论依据。试验结果表明：以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH 值为6.0,最适反应温度为40 ℃,Km和Vmax值分别为53.8 mmol/L和588 U/min。90 ℃热处理2.5 min或85 ℃热处理3.5 min可基本完全钝化其活性,Vc、异Vc和L-cys对PPO酶活的抑制较为明显。     

白萝卜多酚氧化酶的酶学特性研究

白萝卜作为我国第二大蔬菜。其贮运和加工过程中的褐变多以酶促褐变为主,全面系统地了解白萝卜多酚氧化酶(PPO)的酶学特性,并研究其抑制手段,对提升白萝卜及其制品的品质和商品价值有着重要的意义。本文以新鲜白萝卜为原材料,采用丙酮洗涤、0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液匀浆法从中提取PPO,考察了pH、温度对酶活的影响,分析了其温度稳定性、底物浓度对PPO活性的影响,探讨了过程的反应动力学,并对多种酶抑制剂对PPO活性的影响进行了比较,为控制加工过程中白萝卜的酶促褐变提供了理论依据。试验结果表明:以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH值为6.0,最适反应温度为40℃,Km和Vmax值分别为53.8 mmol/L和588 U/min。90℃热处理2.5 min或85℃热处理3.5 min可基本完全钝化其活性,Vc、异Vc和L-cys对PPO酶活的抑制较为明显。     

茯苓多酚氧化酶酶学特性及褐变抑制

以茯苓为供试材料,采用分光光度计法测定多酚氧化酶(PPO)活力,研究pH值、温度、底物浓度以及抑制剂等因素对茯苓PPO活性的影响。结果表明,茯苓PPO最适pH值为6.5,最适温度为35℃,最适底物浓度为0.06 mol/L。PPO酶促反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=0.024 4 mol/L,Vmax=121.95 U/min。NaCl、抗坏血酸、L-半胱氨酸和柠檬酸溶液对茯苓PPO均有抑制作用,随着质量浓度的升高,抑制效果越好;相同质量浓度下,L-半胱氨酸抑制作用最强,其次是抗坏血酸和柠檬酸,最后是NaCl。     

“黑美人”马铃薯多酚氧化酶的特性研究

以邻苯二酚为底物,在413nm处测定黑美人马铃薯多酚氧化酶（PPO）的活性,研究了温度、pH、底物浓度对其活性的影响,并建立了酶促褐变反应动力学方程,探讨了L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、EDTA及亚硫酸氢钠五种抑制剂对酶促褐变的抑制效果。结果表明:黑美人马铃薯多酚氧化酶最适反应pH为6.3;最适反应温度为35℃;酶促褐变反应动力学符合米氏方程描述的单底物酶促反应动力学,以邻苯二酚为底物,Km=0.0011mol/L,Vmax=142.23U/min.g;动力学方程为V=142.23[S]/（0.0011+[S]）;五种抑制剂均对PPO酶促褐变具有抑制作用,其强弱依次为亚硫酸氢钠>L-半胱氨酸>抗坏血酸>EDTA>柠檬酸。      

蓝莓中多酚氧化酶的酶学特性

为分析蓝莓中多酚氧化酶的酶学特性,本文对影响蓝莓多酚氧化酶（PPO）的酶活力的主要因素:p H、温度、金属离子、抑制剂及热稳定性进行了研究。结果表明:蓝莓中PPO最适p H为6.5,最适温度为30℃,Ca²⁺和Mn²⁺对蓝莓PPO有抑制作用,Cu²⁺、Mg²⁺、Zn²⁺、Fe³⁺对蓝莓PPO有激活作用。柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸及亚硫酸氢钠能抑制PPO酶活,但柠檬酸抑制效果较差。热稳定性实验结果表明:蓝莓果PPO耐热性较差,高温短时可显著抑制PPO酶活性。      

荔枝壳中多酚氧化酶活性研究

本文对荔枝壳中多酚氧化酶(PPO)的活性及不同抑制剂的抑制效果进行研究。结果表明:荔枝壳多酚氧化酶的最佳底物浓度为0.04mol/L,最适pH为7.0,最适温度为40℃;柠檬酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠对PPO活性表现出较好的抑制效果,三种抑制剂联合作用的最佳条件为0.01mmol/L的柠檬酸+0.04mmol/L的抗坏血酸+0.004mmol/L的硫代硫酸钠,PPO活性的抑制率达85.8%。     

不同葡萄品种多酚氧化酶酶学特性比较

以欧美种葡萄 “关口”、“金手指”、“黄密”3 个品种和欧亚种葡萄 “泽香”、“无核白”2 个品种为实验材料,比较了5 个不同葡萄品种间多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）以邻苯二酚、4-甲基儿茶酚、儿茶素、咖啡酸为底物的动力学参数Km、vmax/Km值,并比较了酶的最适pH值、最适温度、热稳定性、以及抑制剂对酶活性的影响。结果表明：测定的5 个品种中,欧美种葡萄和欧亚种葡萄对邻苯二酚的亲和力存在显著性差异,对 4-甲基儿茶酚、儿茶素、咖啡酸的亲和力无显著性差异;欧美种葡萄和欧亚种葡萄对邻苯二酚的催化效率存在显著性差异,对4-甲基儿茶酚的催化效率无显著性差异,“关口”葡萄对儿茶素和咖啡酸的催化效率明显高于其他4 个葡萄品种。焦亚硫酸盐和抗坏血酸对5 种葡萄PPO活性都有强的抑制作用,焦亚硫酸盐对其他4 个品种葡萄的抑制作用强于对“关口”葡萄的抑制作用;在测定的pH值和温度中,5 种葡萄PPO的最适pH值和最适温度都无明显差异。     

黑脉羊肚菌多酚氧化酶特性研究

采用分光光度法420nm下分析黑脉羊肚菌多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)特性。以黑脉羊肚菌为原料,经清洗切分后,匀浆、过滤,于4℃,12000r/min条件下离心分离,得到黑脉羊肚菌PPO粗酶液,应用于催化反应,并研究温度、底物浓度和抑制剂等对其活性的影响。结果表明:黑脉羊肚菌PPO的最适温度为30℃,最适pH7.5;其多酚氧化酶酶促褐变反应动力学符合米氏方程,相应动力学参数为Km=0.4769mol/L,Vmax=1.901mol/L;其中,抗坏血酸对黑脉羊肚菌PPO的抑制效果最好,亚硫酸氢钠次之,柠檬酸最弱。      

雪梨多酚氧化酶酶学特性及其果汁褐变控制技术研究

雪梨在加工过程中极易发生酶褐变,为抑制雪梨汁的酶褐变,试验以雪梨为原料制备多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)粗酶提取液,加入邻苯二酚为底物,采用分光光度法对其PPO的酶学特性及不同护色剂对PPO活性的影响进行了研究;并选择L-半胱氨酸、D-异抗坏血酸钠、抗坏血酸3种添加剂对雪梨汁进行护色,通过响应面优化试验确定雪梨汁最优护色组合。结果表明:雪梨PPO的最适pH为4.5,最适温度为30 ℃;雪梨PPO具有一定的热稳定性,随着温度的提高,抑制PPO活性所需要的时间逐渐减少;雪梨PPO催化底物邻苯二酚的酶促反应动力学与米氏方程高度符合,最大反应速率Vmax=217.39 U/min,米氏常数Km=0.152 mol/L。雪梨汁加工的最优护色剂组合为:6.56 mmol/L的L-半胱氨酸、4.58 mmol/L的D-异抗坏血酸钠和6.18 mmol/L的抗坏血酸,在此条件下对雪梨汁褐变的抑制率可达90.82%。     

莴笋多酚氧化酶、过氧化物酶的特性及抑制作用研究

采用分光光度法测定莴笋多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）的活性,研究酶的稳定性、温度、p H、底物浓度及几种抑制剂对其活性的影响,建立相应酶促动力学方程,利用正交实验探讨最佳抑制条件。结果表明,PPO和POD最适温度分别为50℃和40℃,最适p H分别为6.0和6.5,随温度不断升高,PPO和POD活性逐渐下降。动力学方程分别为V=342.566[S]/（5.9×10-3+[S]）和V=3403.008[S]/（6.88×10-4+[S]）。对PPO抑制强弱为:VC>L-Cys>Na HSO3>柠檬酸>EDTA>苯甲酸>琥珀酸,对POD抑制强弱为:EDTA>VC>L-Cys>柠檬酸>Na HSO3>琥珀酸>苯甲酸。正交实验表明,对PPO最佳抑制条件为:Na HSO39mmol/L、L-Cys 5mmol/L及VC5mmol/L。对POD最佳抑制条件为:VC0.2mmol/L、EDTA 0.2mmol/L及L-Cys 1.4mmol/L。      

鸡腿蘑多酚氧化酶特性研究

本文采用分光光度法对鸡腿蘑多酚氧化酶(PPO)的催化特性、最适温度、最适pH值、热稳定性等性质进行研究;同时考察了EDTA-2Na、NaHSO₃、抗坏血酸、柠檬酸四种抑制剂对鸡腿蘑多酚氧化酶活力的影响。结果表明:该酶的最适pH为6.0;最适温度为45℃,80℃水浴处理5min,95℃水浴处理90s该酶全部钝化。四种抑制剂对该酶均表现出不同的抑制效果,抑制效果强弱次序为抗坏血酸>柠檬酸>NaHSO₃>EDTA-2Na。     

双孢蘑菇酶促褐变特性及褐变的控制

为有效控制双孢蘑菇褐变,研究pH值、温度、底物浓度以及抑制剂对双孢蘑菇的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性的影响。结果表明：以邻苯二酚为底物,双孢蘑菇PPO最适反应pH6.8,最适反应温度20℃,最适反应底物浓度为0.06mol/L,米氏常数Km为0.1072mol/L。采用计算机图像处理技术对双孢蘑菇褐变程度进行定量检测,得出对双孢蘑菇贮藏保鲜效果较好的褐变抑制剂及其最佳配比为0.30mmol/L半胱氨酸、0.06％抗坏血酸、0.05%乙酸。     

PHYSICO-CHEMICAL PROPERTIES of POLYPHENOL OXIDASE FROM d'ANJOU and BARTLETT PEARS (PYRUS COMMUNIS L.)

Polyphenol oxidase (PPO) and phenolics were studied in two pear cultivars, d'Anjou and Bartlett. PPO activity, total phenolics and chlorogenic acid concentration differed significantly with respect to cultivar. PPO activity, total phenolics and chlorogenic acid all decreased in overripe fruits. the pH optimum (d'Anjou, 4.7 and Bartlett, 5.5), and optimum temperature (d'Anjou 40C and Bartlett, 20C) for maximum PPO activity were determined. Among substrates, 4-methylcatechol followed by catechol and dopamine, was the most readily oxidized substrate of PPO from both pear cultivars. the enzyme from both cultivars did not show any activity with any of the monohydroxy substrates. K_m of 13.33 and 10.92 mM were determined with 4-methylcatechol for d'Anjou and Bartlett pear PPO, respectively. Benzoic and cinnamic acid series compounds were poor inhibitors of PPO. However, L-cysteine, sodium metabisulfite, ascorbic acid and thiourea proved to be effective inhibitors of this enzyme. Heating at 65C for 30 min resulted in a loss of 60–72% of PPO activity.     

宣木瓜多酚氧化酶酶学特性与抑制剂研究

研究宣木瓜不同部位的多酚氧化酶(PPO)的活性及其温度、pH值、底物专一性等特性和抑制方法。结果表明：果心中的PPO活性明显高于果皮和果肉,宣木瓜组织的褐变主要是由多酚氧化酶引起;PPO最适底物为邻苯二酚;最适温度20℃,在80℃处理5min即可钝化PPO的活性;最适pH5.5,在酸性条件下稳定性优于碱性;抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸氢钠、柠檬酸和氯化钠均能有效的抑制PPO的活性。