应用DNA条形码技术鉴定烤鱼片、鱼干中河鲀鱼鱼种

应用DNA条形码技术对北京和厦门市市售烤鱼片、鱼干中河鲀鱼成分进行鉴定。方法 以烤鱼片、鱼干中提取基因组DNA为模板,利用针对河鲀鱼细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因的特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆并测定线粒体COⅠ基因序列。将测序结果与GenBank中已有河鲀鱼的DNA序列进行BLAST比对,并且构建分子进化树。结果 本研究27份样品中有15份能扩增出特异性条带。通过BLAST比对和进化树分析,将15份样品归属到不同的河鲀鱼鱼种中。结论 北京和厦门市市售烤鱼片和鱼干中存在混入河鲀鱼的现象,应加强监管和规范产品的加工程序以避免中毒事件发生。     

基于DNA条形码技术对常见石首鱼科鱼胶的物种鉴定

摘　要：目的　运用DNA条形码技术对常见石首鱼鱼胶进行物种鉴定。方法　通过对26份鱼胶样品基因组DNA提取，PCR扩增COI基因、测序，用BOLD物种鉴定系统，与数据库中已有鱼类序列进行比对分析，鉴定出各鱼胶的物种；根据Kimura双参数模型计算样品序列遗传距离，并将所得序列构建NJ和MP系统发育树，进行聚类分析。结果　26份鱼胶样品通过鉴定引物“Fish-F”、“Fish-R”均可实现扩增，条带清晰单一，扩增和测序成功率均为100%；BOLD鉴定结果显示，26份鱼胶样品中23份能够确定物种来源（相似性达98%以上），包括石首鱼科12属15种鱼类，且多数为外来物种，另外3份鱼胶可推测其近缘物种。此外，系统发育树聚类分析结果与物种鉴定结果一致。结论　目前石首鱼类鱼胶来源物种较多，且多为外来基原鱼种。DNA条形码技术与BOLD鉴定系统相结合，可对大部分鱼胶进行准确的物种鉴定。     

DNA条形码COI序列在常见肉类鉴别中的应用研究

为了对常见的4种肉类及相关肉制品进行掺假鉴定,判别与产品标签是否相符,本研究以COI基因为靶基因,建立了4种动物源性食品DNA条形码鉴别技术。分别提取牛、羊、猪、鸭四大物种的基因组DNA为模板,以其COI基因的保守序列区设计6对通用引物,结合文献报道及数据库提供的7对通用引物进行PCR扩增,并将测序结果提交Gen Bank数据库Blast比对,评价不同DNA条形码的检测鉴别能力。筛选出COI-A为最优序列,在4个物种中扩增效率100%。对抽检的20个批次的肉加工品样品进行检测,鉴定结果约有90%的样品与产品标签标示的成分相符。其中1个批次的牛丸制品因肉类成分含量低未扩增成功,1个批次的牛丸制品检出鸭源成分,判定掺假。DNA条形码技术快速有效,本研究筛选的COI-A序列可直接用于牛、羊、猪、鸭及其肉制品的鉴定,并为其它常见动物源性食品的种类鉴定提供一定参考依据。     

DNA条形码技术在深圳鱼肉制品鉴定中的应用

以线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ ）基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳批发市场和超市零售鱼肉制品的种类来源,判别其产品标签是否正确。本研究调查的77 份鱼肉制品均能扩增出特异性条带,28 份样品与产品标签标示不符,“错贴”率高达36.36%,其中所有标示“龙俐鱼”的商品都是低价的“巴丁鱼”（Pangasianodon hypophthalmus）。DNA条形码技术可用于鱼肉制品的来源物种鉴定。     

应用DNA条形码技术对深圳市售花胶鱼种鉴定与分析

目的 采用基于DNA条形码技术对深圳市售花胶鱼种进行鉴定与分析。方法 以细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome c oxidase, COⅠ)基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳各药房和超市零售花胶的种类来源。结果 94份花胶样品均扩增出特异性条带。根据BOLD系统鉴定结果统计,深圳地区市售花胶94份样品中,按来源鱼种区分,基原鱼种(鉴定到属)为尼罗尖吻鲈和尖吻鲈属占比29.79%,其次为苏里南犬牙石首鱼占比15.96%,以及双棘原黄姑鱼/褐毛鲿占比8.5%。按来源鱼种所属的科区分,石首鱼科共计41个,占比43.62%;尖吻鲈科共计28个,占比29.79%;鳕科共计7个,占比7.45%。结论 目前我国花胶基原鱼种以石首鱼科为主,外来基原鱼种增多。深圳市售花胶存在真伪混淆现象,DNA条形码技术可用于花胶的来源物种鉴定。     

DNA条形码技术鉴别市售鱼肉制品真伪

以COΙ基因和16S r RNA基因作为鱼类制品通用的DNA条形码,对超市中采集的91份冷冻鱼肉样品及经过深加工的预包装鱼肉样品进行物种鉴定。结果表明:COΙ基因和16S r RNA基因均可用于鱼类制品物种真伪的鉴别;冷冻鱼肉样品和预包装鱼肉样品与其商标的符合率分别为83.54%和58.33%;市场中存在鱼类制品商品标签标示错误、配料标注不明确等问题,为相关部门对鱼类制品的监管提供了有力的技术支持。     

基于DNA条形码技术的海参物种鉴定

DNA条形码技术(DNA barcoding)是一种新型高效的物种鉴别方法。本研究基于DNA条形码技术,以线粒体细胞色素氧化酶I基因(COI)和16S核糖体RNA(16S rRNA)基因作为靶基因对海参物种进行鉴别,结果表明COI基因或16S rRNA基因均能实现大部分海参的物种鉴定,部分样品需结合两个靶基因鉴定出来。将所建立的DNA条形码方法用于市售海参样品的物种鉴定,24份市售海参样品中10份市售海参样品的物种鉴定结果与标签名称相符,6份样品与标签名称不符,存在将低价海参品种标为高价海参的现象;其余8份样品的标签只有商品名但没有明确的物种信息,利用DNA条形码技术对其鉴定可得到明确的海参种名。本研究结果证实DNA条形码技术可应用于市售海参的物种鉴定,为海参的监管提供技术支撑。     

鱼胶基原鱼种鉴定技术研究进展

鱼胶作为我国传统滋补药材,近年来其消费市场日益繁荣,鱼胶基原鱼种来源范围不断扩大,尤其是进口基原鱼种占比不断提升,部分市售鱼胶真伪难辨,鱼胶基原鱼种鉴定需求不断增加。本文概述了鱼胶基原鱼种形态学鉴定法、光学分析法和分子生物学鉴定法的发展历程、应用情况,对比了分子生物学方法中不同基因片段、不同引物等的适用性,分析了上述方法的优缺点。传统形态学鉴定具有快速、不需要鉴定人员具备较高实验操作能力的优势,但依赖专家个人经验和观察手段,且对鱼胶残片等形态特征缺失的样品鉴定能力有限;光学分析法无法精确到种属;而以DNA条形码技术为主的分子生物学方法是对某一特定区域的DNA序列排列顺序进行对比分析,鉴定结果准确,但较为耗时。由于鱼胶是动物组织干制品,在物种鉴定方面具有形态信息较少、样品处理时间较长等特点;本文有针对性地综合国内外相关研究,填补了特殊动物组织物种鉴定研究方法综述的空白,为以后进口贸易或市场监管中如何优化鉴定技术提供理论依据。     

基于线粒体COI和COII基因的米象与玉米象的分子鉴定

为建立基于线粒体COI和COII基因序列的米象和玉米象的分子鉴定方法。采自全国6个地理种群的米象和2个地理种群的玉米象,PCR扩增试虫线粒体COI和COII基因,将获得的基因序列在GenBank中进行BLAST比对,分析基因序列相似性,分别计算基于COI和COII基因序列的遗传距离,并构建系统发育树。结果表明在本研究所分析的2种象虫样本中,米象COI基因的种内相似度在98.17% 以上,米象和玉米象COI基因的种间相似度为85.84%~86.92%;米象COII基因的种内相似度在98.37% 以上,玉米象COII基因的种内相似度在97.77% 以上,2种象虫COII基因的种间相似度为86.27%~88.31%。米象的种内遗传距离为0.002~0.020(COI)和0.011~0.015(COII),玉米象的种内遗传距离为0.001~0.023(COII)。两种象虫的种间遗传距离为0.145~0.185(COI)和0.128~0.154(COII),基于COI和COII基因的种间遗传距离显著高于种内遗传距离。系统发育树结果显示,在2个基因的系统发育树上,米象、玉米象的基因序列分别位于不同的进化支,同种象虫的基因序列位于相同的进化枝。根据本研究所用的线粒体COI和COII基因序列的差异性可以进行米象和玉米象的分子鉴定。     

基于COI和16S基因序列的鱼胶基原鱼种鉴定

目的 建立基于COI和16S基因序列的DNA条形码鱼胶基原鉴定方法。方法 以汕头、厦门、莆田等地采集的28个鱼胶为研究对象,利用形态特征分类法对28个样品进行观察,再提取基因组DNA,分别利用6对引物扩增COI和16S基因序列并双向测序。PCR产物测序分析后,输入Genbank中进行BLAST搜索进行分析比对,再利用最大似然法(ML)进行系统发育分析。结果 采集的28个鱼胶样品可分为11种类型。主要有萝卜型、“Ｙ”字型、心型、纸片型和琵琶型等。BLAST分析比对共鉴定出26个鱼胶样品,隶属于5目6科9属12种。系统发育分析表明不同种类的鱼胶处于不同分支中。结论 该方法可用于鱼胶基原鱼种的快速分子鉴定,也为鱼胶的真伪鉴别及溯源提供理论依据。     

13 种河豚鱼CO I基因部分DNA序列分析及在物种鉴定中的应用

应用CO I基因聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增通用引物,对福建省和海南省搜集的3?属13?种河豚鱼样品与9?个未知种名的河豚鱼样品的CO?I基因靶序列片段进行PCR扩增和测序,13?个已知物种样品的DNA序列提交基因库（GenBank）,取得相应的登录号。各物种CO I基因靶序列长度均为681 bp。应用DNAMAN V6软件对样品的DNA序列进行同源性比对分析,建立样品间系统关系同源树。基于CO I基因序列,供试13 个样品被划分为4?个类群组。群间的同源率为84%,群内同源率为90%～100%。根据序列同源性分析结果,9?个未知种名的样品被归类到2?个类群组中,判定这9?个样品为东方鲀属或腹刺鲀属,其中1?个样品（HNW2）为月腹刺鲀,4?个样品（HNW3、HNW4、FJW2、FJW5）为棕斑腹刺鲀,1?个样品（HNW1）为暗鳍腹刺鲀;3?个样品（FJW1、FJW3、FJW4）为横纹东方鲀。探讨基于DNA条形码技术的CO I基因靶序列片段在河豚鱼种属鉴别中应用的可能性。     

Tetrodotoxin detection and species identification of pufferfish in retail roasted fish fillet by DNA barcoding in China

This study identifies the pufferfish species and detects tetrodotoxin (TTX) in roasted fish fillet samples collected in Beijing, Qingdao and Xiamen, China. The cytochrome c oxidase I (COI) gene was used as the target gene for identification of the pufferfish species in the samples. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) screened the TTX levels in samples that had been detected as containing pufferfish by DNA barcode. A total of 125 samples were identified by DNA barcodes; 32 (26%) samples contained pufferfish composition and, among them, 26 (81%) were the highly toxic species Lagocephalus lunaris. All 32 samples containing the pufferfish composition were positive for TTX with levels ranging from 100 to 63 800 ng g^–1. Most of the 32 samples contained the highly toxic L. lunaris. Based on the results, we suggest that the monitoring of roasted fish fillet should be strengthened and the processing procedures should be standardised to minimise TTX poisoning caused by pufferfish.     

线粒体细胞色素b基因在鱼唇制品物种鉴定中适用性的研究

目的 探讨线粒体细胞色素b基因(cytochrome b, Cyt b)作为DNA条形码在鱼唇制品物种鉴定中的适用性。方法 对全国31个城市购买的252份鱼唇样品进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)测序,同源基因比较分析,构建系统发育树,鉴定制作鱼唇产品的鱼种,并对其进行濒危评价分析。结果 成功鉴定250个样品,一致性物种基因序列相似性在99%以上,涉及8个鲨鱼物种,最多样品为大青鲨(Prionace glauca),占样品65.5%,其余还有镰形真鲨(Carcharhinus falciformis)、路氏双髻鲨(Sphyrna lewini)、锤头双髻鲨(Sphyrna zygaena)等7类鲨鱼物种。结论 Cyt b可以作为对鲨鱼物种进行鉴定的一种DNA条形码,在对鲨鱼种鉴定时可以使用Cyt b基因及细胞色素氧化酶亚基I基因联合鉴定条形码,为深加工海产品物种鉴定提供更多的技术支撑。     

DNA条形码技术在肉及其制品中的应用

DNA条形码技术作为一种新的分子生物学检测技术在鉴定和区分各物种和物种间亲缘关系方面得到了广泛应用,该技术能实现对肉的快速、准确检测。DNA条形码已成为生物学领域发展最迅速的一种技术,该技术基于广泛的物种基因数据库信息,在肉品研究中具有良好的应用前景。本文简述DNA条形码技术的基本原理,并基于DNA水平上与其他相关技术进行比较,综述其在物种鉴定、肉品质量安全、商业欺诈等方面的应用,并对该技术在今后肉品科学研究中的应用进行展望。      

Application of the novel Droplet digital PCR technology for identification of meat species

The authenticity and traceability of meat products are issues of primary importance to ensure food safety. Unfortunately, food adulteration (e.g. the addition of inexpensive cuts to minced meat products) and mislabelling (e.g. the inclusion of meat from species other than those declared) happens frequently worldwide. The aim of this study was to apply a droplet digital PCR assay for the detection and quantification (copies μL⁻¹) of the beef, pork, horse, sheep, chicken and turkey in meat products. The analysis conducted on commercial meat showed the presence of traces of DNA from other animal species than those declared. We show that the method is highly sensitive, specific and accurate (accuracy = 100%). This method could be adopted by competent food safety authorities to verify compliance with the labelling of meat products and to ensure quality and safety throughout the meat supply chain, from primary production to consumption.     

Applying COI Barcode to Identify Animal Origin of Food

DNA barcoding possesses advantages of high resolution, high sensitivity, and capability in capturing as much identity information as possible. However, highly varying sources of food materials and a complicated supply chain bring about challenge to the application of barcoding methods. In this study, different barcode systems were compared to establish a robust method for tracing animal species in food. Experiments on food samples from mammal, poultry, and fish proved that a mini barcode system targeting a 192 bp COI gene fragment was able to accurately identify both raw and highly processed animal food. In order to distinguish species in a mixed food sample, cloning technique was used by which as low as 10% target animal ingredient could be detected. Testing of marketed food products verified the capability of the mini barcoding method in identifying illegally claimed product.     

运用DNA条形码技术分析市售鱼类及制品的物种真实性

目的:运用准确快速的鱼类品种鉴定方法,对上海市售鱼类制品标识符合性进行调查。方法:利用DNA条形码技术,以动物线粒体细胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase Subunit I,COI)基因序列为鉴定靶标,对采集的63种市售鱼类样本进行序列分析比对后,分析样品的标注名称与真实物种名的一致性。结果:经序列测定和比对,13份样品的鱼类品种名称与标注名称不一致,占20.63%,此外有19份样品标注名为一类鱼的总称或俗称,占30.16%。结论:目前,我国对鱼类及其制品物种真实性鉴定研究亟待发展,鱼类标注物种名称混乱,分类不清,概念模糊,急需规范化。      

DNA条形码技术在肉品防欺诈鉴别中的应用

以DNA条形码技术鉴别进出口监督抽检的鱼肉等水产制品的种类来源,用以判别其与申报或产品标签是否相符.分别提取鱼肉等样品的基因组DNA,以目前国际上比较公认的动物线粒体细胞色素氧化酶COⅠ基因通用引物进行PCR扩增.PCR产物经测序分析后,将得到的扩增片段序列与Genbank数据库进行序列比对,同时提交Barcoding Life DNA条形码数据库(BOLD)进行鉴定分析.本批次监督抽检的16份鱼肉、鱼丸等水产制品中除1份样品未能成功获得鱼肉COⅠPCR扩增外,其余15份样品均顺利得到种类来源鉴定,鉴定结果约有31.25％的样品与产品标签标示不符.作为一种简单、快速、有效的分子鉴定技术,DNA条形码可以直接应用于鱼肉等动物源性食品的种类鉴定.