多阶导数紫外光谱法快速测定生物转化液中的肉桂醇、肉桂醛和肉桂酸

为高效筛选转化肉桂醛为天然肉桂醇的微生物菌株,建立直接、快速测定生物转化液中的肉桂醇、肉桂醛和肉桂酸含量的多阶导数紫外光谱法。对3个组分的紫外吸收光谱进行二阶或三阶导数处理,选择各组分合适的检测波长;在选定波长下建立各组分吸收光谱的导数值对质量浓度的工作曲线。结果表明:肉桂醛和肉桂酸分别在320 nm和306 nm波长处的二阶导数值与其质量浓度分别在0.52～9.27 mg/L和0.51～9.24 mg/L范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为103.3%和104.1%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.1%和2.1%;肉桂醇在256 nm波长处的三阶导数值与其质量浓度在0.55～5.47 mg/L范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.0%,RSD为3.5%。利用该方法,样品中各组分不需提取分离即可直接稀释测定,可用于微生物转化肉桂醛制备肉桂醇反应实验菌株的快速高效筛选。     

肉桂内生细菌转化肉桂醛的研究

采用单因素试验法对肉桂内生细菌Pseudomonas sp.RGEB06转化肉桂醛合成肉桂醇的反应条件进行了研究。在改良M9液体培养基的基础上,以肉桂醛转化率、肉桂醇转化产率、肉桂醇选择性等为指标,考察了转化过程中的肉桂醛底物浓度、初始p H、转化温度、接种量、装液量、摇床转速、预培养时间、转化时间等因素对Pseudomonas sp.RGEB06转化肉桂醛合成肉桂醇的影响。结果表明:在转化温度30℃、初始p H 6.5、装液量100 m L/250 m L三角瓶、接种量20%、摇床转速150 r/min、预培养时间24 h、底物浓度2.64 mg/m L、转化时间24 h时,肉桂醇的转化率达到最大值88.08%,生成肉桂醇的选择性为94.21%,转化液中肉桂醇的浓度为2.36 mg/m L。     

微生物法制备抗抑郁药R-托莫西汀中间体

从 2 0株酵母菌中筛选出了两种还原 3 氯 1 苯丙酮生成高光学纯度R 3 氯 1 苯丙醇的较好菌株SaccharomycesB5和Candida 10 4 ,R 3 氯 1 苯丙醇的对映体过剩值为 10 0 % .研究了温度、pH、反应时间、底物质量浓度、菌体添加量等微生物培养条件及反应条件对两种菌种还原 3 氯 1 苯丙酮的影响 .以体积分数 5 %的乙醇为共底物 ,可使SaccharomycesB5和Candida 10 4转化底物的产率分别从 17%和 9%提高到 5 0 %和 4 8%     

不对称还原4’-甲基苯乙酮微生物的筛选及反应条件优化

从土壤中筛选得到一株能将4’-甲基苯乙酮高效不对称还原为S-4’-甲基-1-苯乙醇的菌株T19,T19采用16SrDNA进行分子生物学鉴定,被鉴定为卷枝毛霉菌(Mucor circinelloides)。研究表明,在体系pH为6～7,反应温度30℃的条件下,添加50g/L的葡萄糖为辅助底物,底物4’-甲基苯乙酮的加入量为3g/L,反应3d后,产物S-4’-甲基-1-苯乙醇的得率最高可达92.6%,对映体过量值(e.e.)达到100%。     

有机相脂肪酶催化合成肉桂酸肉桂酯的研究

肉桂酸肉桂酯是一种重要的花香型香精定香剂。本实验对有机相中脂肪酶催化合成肉桂酸肉桂酯进行研究,对酶催化条件进行了优化研究。实验结果表明:Candida anatarctic脂肪酶(Novozyme 435)有较好的催化活性。通过单因素实验考察各反应参数(反应溶剂、温度、底物摩尔比、底物浓度等)对脂肪酶Novozyme 435合成肉桂酸肉桂酯反应的影响,确定了反应最优工艺条件:在5 mL甲基叔丁基醚溶剂(分子筛脱水)体系中,肉桂醇100 mmol/L,n(肉桂醇):n(肉桂酸乙酯)=2:1,反应温度50℃,Novozyme 435脂肪酶添加量1%(质量体积比),反应36 h后反应转化率可达到55%,产物结构经气相质谱(GC/MS)鉴定。     

高产类胡萝卜素的蛹虫草液体培养基优化及其提取工艺研究

以类胡萝卜素含量为目标,采用谷物类为培养基对蛹虫草CM-03、CM-04和CM-11三株菌株进行了液体发酵培养基的优化,结果表明:三株菌株的最优培养基配方分别为CM-03:1.4 g·L~(-1)小麦、2.8 g·L~(-1)玉米、0.3 g·L~(-1)大豆、0.1 g·L~(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L~(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L~(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(694.8±15.4)μg/g;CM-04:1.2 g·L~(-1)大米、0.6 g·L~(-1)玉米、0.3 g·L~(-1)大豆,0.1 g·L~(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L~(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L~(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(708.5±25.8)μg/g;CM-11:1.7 g·L~(-1)小麦、2.6 g·L~(-1)玉米、0.3 g·L~(-1)大豆,0.1 g·L~(-1)MgSO_4·7H_2O、0.1 g·L~(-1)KH_2PO_4、0.05 mg·L~(-1)VB_1、pH自然,类胡萝卜素含量为(700.5±19.1)μg/g。同时,使用乙醇提取法对类胡萝卜素提取工艺进行了优化,结果表明乙醇提取法的最佳工艺条件为:采用石英砂研磨破壁,乙醇浓度60%、料液比1∶40,水浴提取温度80℃,提取级数2级,提取率达到92.8%。     

κ-卡拉胶寡糖酶解制备工艺优化

为改进卡拉胶寡糖的制备工艺,本研究以κ-卡拉胶为底物,采用酶法制备κ-卡拉胶寡糖,以还原糖生成量为评价指标,对酶解条件进行优化,并采用薄层色谱法及质谱对酶解产物进行分析。结果显示酶解反应最优工艺条件为:底物浓度12 g/L、p H7.0、反应温度40℃、振荡速率100 r/min,经优化后的酶解反应更完全,还原糖生成量由0.91 mg/m L提高至1.61 mg/m L,提高了77%,酶解卡拉胶反应的Km值为171.96 mg/m L,最大反应速度Vmax为0.925 mg·m L~(-1)·min~(-1)。最优工艺验证实验和20 L放大实验结果一致,经薄层色谱及质谱分析酶解24 h后的反应主产物为二糖和四糖。     

索氏提取肉桂油树脂及其纯化前后抑菌活性的比较

以肉桂皮为原料,用索氏法提取肉桂油树脂,通过正交试验优化提取工艺。采用硅胶柱层析对油树脂进行纯化处理,滤纸片法比较纯化前后油树脂的抑菌活性。结果表明,最佳工艺条件为:乙酸乙酯作溶剂,肉桂皮粉碎度60~80目,时间70 min、温度130℃、液料比24∶1(m L·g~(-1)),在此条件下提取率可达19.85%,物料粉碎度的变化对提取率具有显著影响。肉桂油树脂对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌均有较强抑制作用,抑菌活性与浓度呈正相关。肉桂醛是肉桂油树脂主要抑菌成分。浓度为1.0 g·m L~(-1)的纯化后的油树脂对大肠杆菌抑制率比未纯化的油树脂高17.23%,对枯草芽孢杆菌抑制率比未纯化的油树脂高15.00%,对肉桂油树脂进行纯化处理可提高抑菌活性。肉桂油树脂具有较好的抑菌活性,用于食品保鲜领域将具有较好的开发潜力。     

二步法制备稀有人参皂苷Rh1组异构体

本论文以制备人参皂苷Rh1为目标,选择三醇类人参皂苷Re为底物,采用酶转化和金属离子催化联用的二步法催化转化,研究了各步骤中的催化反应条件,并对产物进行了纯化和组成分析。结果表明:Absidia sp. P39r菌株产酶能催化转化Re生成Rg1,确定其最佳反应条件为:缓冲液pH5.0,反应温度40 ℃,底物浓度1.2%,反应时间16 h,乙醇浓度10%,在此反应条件下得到的Rg1质量分数最高,为70.5%。然后以Rg1为底物,确定在乙醇-水体系下Fe3+的催化反应产物20(S,R)-Rh1的质量分数最高,催化反应条件优化结果为:乙醇浓度50%,反应温度50 ℃,底物浓度1.7%,Fe3+溶液反应浓度1.4 mol/L,反应时间14 h,20(S,R)-Rh1的质量分数高达61.83%,Rk3、Rh4的质量分数之和为27.34%。在上述条件下将20 g人参皂苷Re与酶液反应,反应结束后用AB-8大孔吸附树脂分离干燥得到含有Rg1的产物14.1 g。再取10.2 g反应得到的Rg1与Fe3+溶液反应,干燥后最终得到的人参皂苷Rh1组异构体质量为8.18 g,得率为80.2%,其中20(S)-Rh1,20(R)-Rh1,Rk3和Rh4的含量分别为37.71%,24.12%,7.27%,20.07%。     

无溶剂体系中毕赤酵母表面展示CALB全细胞催化合成肉桂醇酯

利用表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的毕赤酵母细胞(Pp-CALB)为全细胞催化剂,以不同脂肪酸作为酰基供体,在无溶剂体系中和肉桂醇发生酯化反应合成肉桂醇酯。探究了Pp-CALB对于不同酰基供体的选择性,并且对反应温度、摇床转速、酶加量、底物摩尔比、酶的水活度和反应体系等一系列影响酶催化反应的因素进行了优化,建立了无溶剂体系中肉桂醇酯的酶法合成工艺。结果表明,在底物摩尔比为2:1,摇床转速为120 r/min,反应温度为50℃的条件下,添加初始水活度为0.53的Pp-CALB 0.05 g,反应3h,肉桂醇的酯化率可达81.34%,在最适反应条件下,使用Pp-CALB连续反应8次后,肉桂醇的酯化率仍然能达到70.00%以上,具有较好的操作稳定性。     

天然级苯甲醛制备的研究

研究了肉桂油逆醇醛缩合制备天然级苯甲醛.主要考察了操作方式、反应时间和催化剂用量等对反应结果的影响.结果表明,采用反应精馏的操作方式有利于反应向目标产物苯甲醛转化并可消除副反应;增加反应时间和适当搅拌有利于肉桂醛的完全转化;反应混合液中催化剂Na2CO3的适宜浓度为W(Na2CO3)=3%.     

氧化还原酶共表达耦联催化合成(R)-4-甲氧基-1-苯乙醇

针对生物催化不对称还原反应中必需辅酶再生及反应效率问题,以抗过敏药物的重要中间体化合物光学活性4-甲氧基-1-苯乙醇为目标产物,构建了羰基还原酶基因SCRII-A220D和葡萄糖脱氢酶基因gdh共表达的重组菌株E.coli BL21/p ET-SCRII-A220D-SD-AS-gdh。该双酶共表达耦联系统中,羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶酶活水平相当,有利于双酶耦联催化反应的进行。通过考察反应体系和环境条件对该共表达耦联系统催化反应的影响,发现底物质量浓度、细胞质量浓度,及反应体系温度和p H值等条件对最终产物合成效率的影响规律。在较优条件下,产物(R)-4-甲氧基-1-苯乙醇的光学纯度达到98%,产率达到82%。     

KOH醇水溶液分离纯化结构脂质条件研究

以酶催化酸解制备MLM型(M为中碳链脂肪酸,L为长碳链脂肪酸)结构脂质得到的反应产物为研究对象,探讨了KOH醇水溶液中和脱除游离脂肪酸条件中KOH醇水溶液用量、醇-水体积比、正已烷用量以及二次提取的正己烷用量对结构脂质回收率及组成的影响.结果表明:KOH醇水溶液与反应产物体积(mL)质量(g)比为8∶1,醇水溶液中醇-水体积比为30∶70,正己烷与反应产物体积(mL)质量(g)比为12∶1;二次提取中正己烷与反应产物体积(mL)质量(g)比为3∶1时,体系中结构脂质回收率最高,为94.35％;回收得到的结构脂质中甘油三酯含量为95.27％,结构脂质酸值(KOH)为0.11 mg/g.     

琼胶酶水解工艺条件的优化及产物分析

为探讨琼胶酶水解琼胶的动态过程变化,采用DNS法测定还原糖,结合苯酚-硫酸法测定体系总糖,根据二者比例,得出体系总糖随时间变化的平均聚合度,从而得出各因素对琼胶水解过程的影响。结果表明,来源于厦门红树林的海洋弧菌JMUAZ6菌株产生的琼胶酶,其水解琼胶的适宜工艺条件为:水解温度40℃,p H 7.0,初始底物质量浓度12 g/L,加酶量25%,在120 r/min振荡条件下酶解反应90 min。此工艺条件下产生还原糖的质量浓度2.179 g/L,平均聚合度最低值(DP)3。通过20 L罐放大试验验证小试优化工艺条件具有良好的重现性。采用薄层色谱分析酶解产物的降解情况,结果显示:反应48 h后,终产物为二糖及少量的四糖。     

ICP-MS法同时测定预包装食品中的5种常见元素

建立ICP-MS法同时测定预包装食品中的铅、砷、钙、铜、铝、镍。采用微波消解消化样品,ICP-MS检测样品,利用内标法定量分析。结果表明,各物质质量浓度在0.5~25μg/L范围内线性关系良好,线性相关系数均大于0.995;检测限为:铅0.04μg·L~(-1)、砷0.01μg·L~(-1)、钙0.04μg·L~(-1)、铜0.10μg·L~(-1)、铝0.01μg·L~(-1)、镍0.02μg·L~(-1);样品加标回收率均在90%~110%之间;精密度RSD(n=6)在5.0%以内,重复性RSD(n=6)在5.0%以内。试验证明该方法操作简单、灵敏度高、检测结果准确可靠。     

荔枝多酚氧化酶动力学研究

对白腊荔枝多酚氧化酶的底物进行了研究,确定该酶的最佳底物是3-甲基儿茶酚,用氧电极测出酶催化反应的最佳条件是pH值为7.3,温度为62℃,测定反应活化能等于13.24kJ·mol~(-1),米氏常数为2.209×10~(-2)mol·L~(-1),r_(max)=2.306mg·L~(-1)·min~(-1),对防止果蔬酶促褐变具有一定的指导意义。     

生物催化法水解制备N-BOC-L-α-氨基丁酸

利用实验室筛选得到的高立体选择性脂肪酶产生菌株溜曲霉(A spergillus tamarii WYC3)不对称水解拆分N-BOC-DL-α-氨基丁酸甲酯得到N-BOC-L-α-氨基丁酸,对其反应条件进行研究,确定其最优反应条件为:0.1 mol/L pH 7.2的磷酸钾缓冲液,反应温度30℃,底物浓度52.24 mmol/L,0.1 g菌粉,V(底物)∶V(丙酮)=1∶8,200 r/min恒温水浴反应6h,可获得产物N-BOC-L-α-氨基丁酸,此时e.e.s值达到99.95％,对映体选择率E值为20.11,产率为36.21％.     

超声波法辅助提取肉桂醛的工艺研究

该文主要对超声波辅助水浸提提取肉桂中的肉桂醛进行研究,探讨超声波处理过程中的各因素对提取率的影响,比较水和乙醇两种提取溶剂。结果表明:在提取剂为水时,影响肉桂醛得率的主要因素排序为:料液比超声时间超声功率密度,其最佳工艺条件为:料液比1∶12(g/m L),处理时间30 min,功率密度为12 W/m L,此时肉桂醛得率为0.69%。在乙醇溶液为提取剂时,影响肉桂醛得率的主要因素排序为:乙醇浓度超声时间料液比超声功率密度,其最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比为1∶10(g/m L),处理时间60 min,功率密度为14 W/m L,此时肉桂醛得率达到2.36%。     

双芳基酮还原酶的基因挖掘及催化性质

通过基因挖掘,获得了来源于Kluyveromyces polysporus的醇脱氢酶基因kpadh,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达。其编码的醇脱氢酶KpADH属于短链脱氢酶家族,可催化双芳基酮不对称还原生成手性双芳基醇,且可利用异丙醇为辅底物进行底物偶联型辅因子循环。采用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白KpADH进行纯化,并研究了酶学性质。研究发现:KpADH的还原和氧化反应的最适pH分别为5.5和9.5;KpADH对1-(4'-氯苯基)-(吡啶-2'-基)-甲酮[1-(4'-chlorophenyl)(pyridin-2'-yl)methanone,CPMK]的K_m和V_(max)为0.500mmol/L和25.0μmol/(min·mg),对辅底物异丙醇的K_m和V_(max)分别为6.36 mmol/L和21.4μmol/(min·mg);KpADH对酮酯类底物和2,3-丁二醇有较高的催化活力。运用该重组菌对100 mmol/L的CPMK进行不对称还原,反应10 h后,底物转化率大于99.8%,产物(R)-CPMA的ee值为82%,摩尔收率88.7%。本研究为利用醇脱氢酶KpADH高效合成光学纯CPMA奠定了基础。     

固相萃取-RP-HPLC法测定水体中6种环境激素方法的建立

建立一种采用反向高效液相色谱同时测定水体中雌三醇等6种环境激素(雌三醇、雌二醇、炔雌醇、雌酮、炔诺酮、炔诺孕酮)的分析方法。待测水样品用Oasis HLB固相萃取柱富集,甲醇-乙腈(体积比6︰4)混合溶剂洗脱,浓缩后,用HPLC定量检测。结果表明, 6种环境激素在质量浓度为0.2～10μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(R~2)均不低于0.995, 0.2 (低点), 1.0 (中点)和5.0μg/mL (高点) 3点加标回收率均在80%～120%之间,定性检测限为:雌三醇0.08μg·L~(-1)、雌二醇0.10μg·L~(-1)、炔雌醇0.14μg·L~(-1)、雌酮0.16μg·L~(-1)、炔诺酮0.20μg·L~(-1)、炔诺孕酮0.26μg·L~(-1)。6种环境激素检测结果重复性RSD均小于5%(N=6)。该方法前处理简单、灵敏度高、检测结果准确、可靠。