比色法快速测定γ-氨基丁酸含量

当有乙醛酸、琥珀酸存在时,γ-氨基丁酸(GABA)与溴甲酚绿发生专一的、特殊的显色反应。基于这一显色反应,建立了一种新的快速测定GABA含量的比色法。显色剂中溴甲酚绿、琥珀酸和乙醛酸溶液的适宜浓度分别为0.5、4.0 mg/m L和6.0 mg/m L。测定GABA含量的适宜条件为:4 m L样品溶液,加入2 m L显色剂,混合摇匀,在25℃下水浴5 min,于617 nm测定吸光值。其它氨基酸如谷氨酸对GABA测定有一定的影响。     

HPLC法测定青稞中γ-氨基丁酸含量的研究

建立了一种测定青稞中γ-氨基丁酸含量的方法,青稞样品中的γ-氨基丁酸与邻苯二甲醛进行衍生反应,采用高效液相色谱法测定,通过色谱柱分离,用外标法定量,最后得出样品中γ-氨基丁酸的含量,γ-氨基丁酸含量在0.1～1.0 mg/m L范围内线性关系良好,平均回收率为98%～103%,RSD为2.0%,此方法可以准确快速的检测青稞中γ-氨基丁酸的含量。     

柱前衍生-高效液相色谱法检测运动型饮料中γ-氨基丁酸的含量

该研究建立了一种测定运动饮料中γ-氨基丁酸（GABA）的柱前衍生-高效液相色谱（HPLC）方法。 结果表明,样品由乙腈萃 取后,上清液经邻苯二甲醛（OPA）于45 ℃条件下在线柱前衍生2.0 min后进行HPLC检测。 色谱条件：Waters sunfire C18为色谱柱,以 20 mmol/L的乙酸钠溶液-乙腈（体积比70∶30）为流动相,二极管阵列检测器（DAD）的波长为247 nm,柱温30 ℃,流速1.0 mL/min, 进样量20 μL,外标法定量。 γ-氨基丁酸在1.0～100.0 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好（R2=0.998 6）,检出限为0.30 mg/kg,定量 限为1.0 mg/kg,加标回收率为82.5%～90.6%,相对标准偏差（RSD）为2.9%～3.7%。 采用该方法检测出5种运动型饮品中GABA含量 在0.32～16.38 mg/100 mL范围内。 该方法具有操作简单、专属性强、灵敏度高等优点,可满足运动型饮料中γ-氨基丁酸的检测要求。     

茶叶中γ-氨基丁酸与L-谷氨酸的HPLC分析方法

以2、4-二硝基氟苯为衍生试剂,以0.05mol/L乙酸钠缓冲液(pH=6.5,含10mL/LN,N-二甲基甲酰胺)和体积分数50%乙腈为流动相,建立了茶叶中γ-氨基丁酸与L-谷氨酸的HPLC分析方法。结果表明:γ-氨基丁酸与L-谷氨酸浓度在0.03～2.0mmol/L内,峰面积与浓度之间有良好的线性关系,相关系数R2均为1。各样品γ-氨基丁酸、L-谷氨酸含量RSD(%)分别为0.91%～2.01%和0.94%～1.91%,加标回收率分别为95.82%～99.33%和95.83%～99.88%。     

高效液相色谱法测定桑叶γ-氨基丁酸和谷氨酸

研究一种快速、精准可同时检测桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的色谱方法。通过研究料液比、提取温度、时间对提取率的影响,确立最佳提取条件为:80℃条件下,料液比5∶1(mg/mL),分两次浸提,每次5 min。以2,4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂,Agilent TC-18色谱柱,以乙酸钠缓冲溶液-乙睛(50%)为流动相,梯度洗脱。此方法在0～0.05 mg/mL范围内线性关系良好,γ-氨基丁酸和谷氨酸测定结果相对标准偏差均2%,平均加标回收率分别为88.024%、114.64%,所建立的方法可以用于桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的检测。为γ-氨基丁酸桑叶茶开发和利用提供理论与技术支持。     

发酵液中γ-聚谷氨酸含量快速测定方法研究

通过γ-聚谷氨酸（γ-PGA）溶液与十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）的氢氧化钠溶液反应形成混悬液,配制不同浓度的γ-PGA标准品溶液,与CTAB溶液形成反应体系并进行全波长扫描,绘制不同波长下标准曲线,并对CTAB试剂浓度、反应时间和温度对反应体系的影响分别进行了比较优化。研究结果为：CTAB比浊法最佳检测波长为250nm,CTAB溶液质量浓度为5g/L,反应温度为环境温度,络合时间为3min,回归线性方程y=0.0335x-0.1519,R2=0.9995,发酵液中加标平均回收率为106.6%,平均RSD值为2.56%。应用比浊法测定γ-PGA的含量快速、简洁、重现性好,可用于发酵液中γ-PGA浓度的检测。     

MBTH法测木糖含量的研究

采用3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)比色法测定木糖含量,确定了测定木糖的最佳条件:600μL MBTH试剂加入到1.2mL木糖溶液(其中含有600μL 0.5mol/L NaOH)中,80℃水浴加热15min,趁热加入硫酸铁铵试剂,冷却后在650nm下测定吸光度A值。该方法测木糖的检测限为0.3μg/mL,检测浓度范围为1.0～29.2μg/mL。     

谷氨酸脱羧酶活力测定中GABA比色定量方法研究

建立了谷氨酸脱羧酶活力测定中γ-氨基丁酸比色测定方法,该方法灵敏度高、精确性和重现性好。测定程序为:取酶反应液0.4ml,加入Na2CO3(1mol/L)0.1ml、pH10.0硼酸盐缓冲液(0.2mol/L)0.5ml、6%苯酚1ml,混匀,于室温下(20℃)在5min内加入5.2%NaClO溶液1ml,混匀后放置4～8min,然后沸水浴l0min,立即冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入2.0ml60%乙醇溶液,混匀后于20℃水浴中放置20～40min,测定640nm处的吸收值。经采用比色法和高效液相色谱法对谷氨酸脱羧酶酶反应液进行测定,两种方法的测定结果相对误差为4.91%。     

利用茶叶制备γ-氨基丁酸的工艺研究

采用邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法对富硒茶中γ-氨基丁酸的含量进行测定,利用Intertsil ODS-C18色谱柱,以15mmol/L的乙酸钠,纯乙腈为流动相进行梯度洗脱。以γ-氨基丁酸质量浓度X(mg/mL)对峰面积Y(m AU·min)作回归曲线,得回归方程Y=3 488.4X+23.525,相关系数为0.996 5。选用真空处理和谷氨酸钠浸渍处理两种方法对茶叶中γ-氨基丁酸进行富集,并对比富集效果。研究表明,在真空处理条件下处理10 h,富硒茶中γ-氨基丁酸的富集效果最好,γ-氨基丁酸含量增至0.875 mg/mL,是对照品的9.5倍。富硒茶在1%谷氨酸钠溶液浸渍12 h后效果最好,γ-氨基丁酸含量为0.624 mg/mL,是对照品的6.8倍。     

高效液相色谱法测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量

建立了一种测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量的HPLC方法,并对四川10个小麦品种中GABA含量差异及其发芽培养期间变化规律进行了分析。采用FDNB(2,4-二硝基氟苯)为柱前衍生剂,色谱条件为:色谱柱Luna C18_((2))(150 mm×4.60 mm,5μm),乙腈-0.02 mmol/L乙酸铵混合溶液为流动相(V:V=15:85),柱温30℃,流速1.0 mL/min,测定波长320 nm。结果表明,在0.025 5~0.127 6μg范围内,呈良好的线性关系,最低检出限1.081×10~(-5)μg/mL,方法的平均加标回收率为97%。采用建立的方法测定不同小麦品种在萌发12 h后的GABA含量在0.238~5.26 mg/100 g之间,不同品种间GABA的含量差异显著,在萌发的0~12 h内,GABA含量呈现先上升后下降的趋势,在8 h时含量达到最高。     

共振光散射法测定食品中锌含量

基于在pH8.5氯化铵-氨水缓冲溶液中,Zn2+与邻菲啰啉和亮黄发生反应,可使共振光散射显著增强,建立共振光散射法测定锌的新方法。考察测定影响因素,确定最佳测定条件为10mL比色管中加入pH8.5氯化铵-氨水缓冲溶液1.0mL、1.0×10-4mol/L邻菲啰啉溶液1.5mL和5.0×10-5mol/L亮黄溶液0.8mL,反应温度30℃,反应时间4min;最大共振光散射峰位于359.4nm,共振散射光强度增加值与Zn2+质量浓度在0～10μg/L范围内线性关系良好,方法的检出限为0.11μg/L,对样品进行测定,相对标准偏差为0.96%～1.71%(n＝5),平均回收率为98.00%～102.67%。本方法可用于测定香蕉、黄瓜和紫菜中锌含量,结果与原子吸收光谱法一致。     

高效液相色谱法测定板栗种子中的γ-氨基丁酸

目的建立高效液相色谱法测定板栗种子中γ-氨基丁酸的分析方法。方法板栗样品使用2,4-二硝基氟苯乙腈进行衍生化前处理后,以磷酸缓冲溶液(pH=7)、乙腈和水为流动相,采取梯度洗脱的方式进行测定,柱温35℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,使用紫外检测器,测定波长为360 nm。结果本方法标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数达到0.9996。方法的回收率为109%,相对标准偏差为0.4%,γ-氨基丁酸最小检出限0.05μg/mL。精密度实验得出5次进样的相对标准偏差为0.55%。对3种不同品种的板栗种子进行测定时,3种样品的RSD分别为3.077%、3.219%、5.333%,平行性较好。结论该方法快速、易操作,具有较高的测量精密度和准确度,对实际样品进行测试时能避免杂质峰的干扰,重现性好,能够满足对板栗种子中γ-氨基丁酸含量的检测要求。     

米糠中γ-氨基丁酸的富集及纯化工艺研究

以米糠为原料,利用米糠中高活性谷氨酸脱羧酶(GAD)进行γ-氨基丁酸(GABA)的富集实验,并采用阳离子交换树脂对富集液中GABA进行分离纯化。结果表明:采用0.02mol/LpH5.6的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液进行GABA富集实验,反应16h后可得到GABA2900mg/100g米糠。采用D001大孔强酸性阳离子交换树脂对该富集液进行纯化实验,调节富集液pH2.0,以2mg/mL的浓度上样吸附,2mol/L的氨水浓度进行洗脱,最终可得γ-氨基丁酸纯度61.25%。     

谷氨酸分析仪测定发酵液中γ-聚谷氨酸的实验条件研究

研究了pH值和培养基主要组分对谷氨酸分析仪测定谷氨酸含量的影响,确定了γ-聚谷氨酸水解的最佳条件.结果表明,在pH=5～10内,溶液的pH值对谷氨酸分析仪的测定结果没有显著影响;模拟发酵液体系的试验,发酵液中各主要成分含量的变动范围±25%时,对测定结果也没有明显影响.采用正交试验优化了γ-聚谷氨酸的水解条件.以2 mL发酵液为例,其最佳水解条件为4 mL浓度为6 mol/L浓盐酸,真空度为0.1 MPa,110℃,24 h.     

茶叶中γ-氨基丁酸UPLC/MS/MS分析方法的建立及应用

目的建立超高效液相色谱串联质谱技术(UPLC/MS/MS)测定茶叶中γ-氨基丁酸含量的方法。方法采用超声法提取茶叶中的γ-氨基丁酸,色谱柱为ACQUITY UPLC BEH HILIC(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相A为0.1%甲酸溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 m L/min,采用电喷雾正离子模式,选择的离子对为103.88→86.67。结果γ-氨基丁酸在5~500 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999),方法的平均加标回收率为92.7%。结论该方法快速、简便、灵敏、重现性好,适用于茶叶中γ-氨基丁酸含量测定。     

甘油铜比色法测定甘油含量的研究

利用甘油与铜离子在碱性溶液中生成深蓝色络合物(甘油铜),该络合物在一定波长下存在最大吸光度的特点,建立了比色法测定甘油含量的方法.结果表明,最佳测定条件为:取CuSO4溶液(0.05g/mL)1 mL与碱液(0.05g/mL)3.5 mL,摇匀,加入处理后的样品,振荡12 min,过滤,然后在波长630 nm处测定吸光度.实测显示,所建立的测定方法操作简单、速度快,相对误差为-1.33%～4.33%,变异系数为0.546%.     

包埋-交联法固定大肠杆菌细胞制备γ-氨基丁酸的研究

以明胶为载体,戊二醛为交联剂,采用包埋-交联复合固载法固定大肠杆菌细胞,研究明胶浓度、菌体加入量和戊二醛对固定化大肠杆菌细胞谷氨酸脱羧酶活力的影响,并将固定化大肠杆菌细胞用于制备γ-氨基丁酸.结果表明:0.1g大肠杆菌菌粉分散在30mL、13％的明胶溶液中,转变成凝胶后再用0.5％戊二醛溶液20mL交联2h,固定化细胞的谷氨酸脱羧酶活力最高;采用15g固定化细胞在pH值为4.0、温度40℃转化20.0mL、60mmol/L的L广谷氨酸底物,反应11h的转化率达95％,重复进行6次转化反应,转化率达95％的时间是20h.该包埋-交联法固定化大肠杆菌细胞在制备γ-氨基丁酸上有较好的工业化应用前景.     

高效液相色谱法测定乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸

通过对衍生试剂浓度、衍生时间、衍生温度、检测波长、流动相比例与柱温条件的选择,建立了一种高效液相色谱（HPLC）法灵敏检测发酵液中γ-氨基丁酸（GABA）含量的方法。以邻苯二甲醛为衍生化试剂,衍生时间5 min,衍生温度为室温,色谱条件为：检测波长228 nm,流动相为乙腈-20 mmol/L结晶乙酸钠溶液（21∶79,V/V）,柱温30℃,流速0.8 m L/min。结果表明,在γ-氨基丁酸含量0.05μg/m L～0.50 mg/m L范围内线性关系良好（相关系数R2=0.999 4）,平均加标回收率为91.87%～105.58%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为0.55%～3.74%(n=5),检出限为0.02μg/m L。采用该方法检测发酵液中γ-氨基丁酸含量,其含量范围在0.157～0.369 mg/m L之间。该方法操作简单、灵敏、准确可靠,适用于发酵液中γ-氨基丁酸含量的检测。     

CdTe量子点同步荧光法测定番茄中链霉素残留

采用水热法制备巯基乙酸修饰的CdTe量子点,基于链霉素对CdTe量子点同步荧光强度的增强效应,建立一种测定链霉素含量的同步荧光法,并对测定条件如缓冲溶液pH值、量子点浓度和反应时间进行优化。样品经甲醇超声提取后,加入含1.0mL CdTe量子点溶液(3.5×10~(-5) mol/L)和1.0mL Tris—HCl缓冲溶液(pH=6.0)的溶液中,室温反应10min后,测定反应体系在345nm处的同步荧光强度(Δλ=230nm)。结果表明,链霉素浓度在5.0×10-7~1.0×10~(-5) mol/L时与体系相对同步荧光强度存在良好的线性关系,相关系数为0.999 7,检出限为1.0×10~(-8) mol/L。该方法操作简单、快速、灵敏度高,可用于番茄样品中链霉素残留的测定。     

同时测定饮料中20种游离氨基酸含量

利用氨基酸分析仪生理体液法测定了茶饮料、凉茶和代茶饮料中的牛磺酸、茶氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、γ-氨基丁酸共20种游离氨基酸的含量。其中牛磺酸、茶氨酸、γ-氨基丁酸的样品加标平均回收率(n=5)在93.95%～104.20%之间;方法的精密度(RSD,n=5)范围为0.44%～0.93%;脯氨酸的检出限为10nmol/mL,其他氨基酸的检出限均为2nmol/mL。该方法适用于同时测定饮料中的多种氨基酸含量。