中间球海胆smad2/3基因克隆、组织表达及其脂多糖刺激响应

为明确中间球海胆Strongylocentrotus intermedius smad2/3基因(命名为Si-smad2/3)信息,初步研究了该基因的序列特征、组织表达模式及脂多糖对其表达的影响,采用RACE技术克隆获得了成体中间球海胆Si-smad2/3基因的全长cDNA序列。结果表明:Si-smad2/3基因的cDNA全长为2146 bp,共编码446个氨基酸;生物信息学分析发现,Si-smad2/3基因所编码的蛋白相对分子质量为50 300,等电点为6.93,属于亲水性非跨膜蛋白;通过与9种已公布物种的smad2/3蛋白氨基酸序列进行多重序列比对和系统进化分析发现,中间球海胆Si-smad2/3蛋白的氨基酸序列与其他真核生物smad2/3蛋白序列具有较高的相似性,与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus smad2/3蛋白的一致性高达96%,符合中间球海胆的分类和进化地位;实时定量PCR(qRT-PCR)检测结果显示,Si-smad2/3基因在中间球海胆不同组织中均有表达,其相对表达量从高到低为体腔细胞>管足>性腺>围口膜>肠>齿间肌;利用脂多糖(LPS,0.1 mg/mL)对中间球海胆进行免疫刺激发现,与对照组相比,LPS刺激后Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞、管足和围口膜中均呈先升高后降低的表达趋势,其中,Si-smad2/3基因在中间球海胆体腔细胞中的相对表达量在LPS刺激9 h时达到峰值,管足中表达量在LPS刺激6 h时达到峰值,而围口膜中的表达量在LPS刺激72 h时达到峰值。研究表明,Si-smad2/3可能参与中间球海胆的免疫应答过程且免疫响应具有组织特异性。     

中间球海胆丙酮酸激酶(PK)基因克隆及其对海水酸化的响应

为明确中间球海胆Strongylocentrotus intermedius丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因(SiPK)的序列特征、组织表达规律及其对海水酸化胁迫的响应方式,采用cDNA末端快速扩增RACE技术方法获得了SiPK的cDNA全长序列,同时探究了该基因在不同海水酸化[自然海水(对照组)、ΔpH=-0.3(SA_1)、ΔpH=-0.4(SA_2)、ΔpH=-0.5(SA_3),ΔpH表示与自然海水pH的差值]胁迫条件下的响应方式。结果表明:中间球海胆PK序列全长为3616 bp,其中,包含一个编码537个氨基酸的开放阅读框(1614 bp)和两个非编码区片段(5′非编码区长度为91 bp,3′非编码区长度为1911 bp);系统进化分析发现,中间球海胆PK氨基酸序列与紫球海胆Strongylocentrotus purpuratus PK的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,成体中间球海胆PK基因在4种组织中均有表达,其相对表达量依次为性腺>管足>体腔液>肠;总PK酶活性检测显示,中间球海胆4种组织中的总PK酶活性依次为管足>性腺>体腔液>肠;海水酸化胁迫试验显示,与对照组相比,随着海水酸化程度的加重,中间球海胆肠组织中PK基因的相对表达量呈先极显著降低后极显著升高的趋势(P<0.01),但肠组织中总PK酶活性则呈极显著升高的趋势(P<0.01),性腺组织中PK基因的相对表达量随海水pH的降低而极显著降低(P<0.01),但该组织中总PK酶活性却呈现先升高后降低的趋势(P<0.05),管足和体腔液组织中PK基因的相对表达量和总PK酶活性均随海水pH的降低总体呈降低的趋势(P<0.05)。研究表明,中间球海胆可通过调节PK基因的表达及总PK酶活性响应海水酸化胁迫。     

虾夷马粪海胆NLR家族基因片段的克隆及表达特征分析

采用同源克隆和半定量RT-PCR方法,对虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius NLR家族基因片段进行了克隆和组织表达特征分析。将紫球海胆S.purpuratus的9组NLR家族聚类的编码区序列进行比对后,根据保守区域设计引物扩增虾夷马粪海胆中相应的基因,通过测序获得了9组不同NLR聚类基因片段,每组各10个测序结果,通过基因序列及氨基酸序列比对分析,发现存在长度及序列结果上的差异,这说明每组NLR家族聚类都存在多个家族成员。同时选取虾夷马粪海胆的不同组织提取RNA,反转录后使用同样的引物进行半定量RT-PCR分析,结果表明,NLR基因在虾夷马粪海胆的管足、肠、围口膜、体腔细胞、性腺中存在高效表达,且在围口膜及性腺中表达量最高,表明NLR基因在虾夷马粪海胆中普遍表达,并存在表达差异。研究表明,NLR基因在海胆免疫过程中起着重要作用。     

虾夷马粪海胆TLR基因cDNA克隆及表达分析

采用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得一条虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius TLR基因的全长cDNA序列SiTLR-1(GenBank:HQ259110),并采用实时定量PCR技术分析了其在组织中的分布以及在致病弧菌Vibrio fortis、β-D葡聚糖和dsRNA刺激后的表达情况。结果表明:SiTLR-1全长序列为3637 bp,形成16个α螺旋、33个β折叠;SiTLR-1蛋白有两个跨膜区段,在725⁷50位有跨膜区,发现1个信号肽(1750位有跨膜区,发现1个信号肽(1³2aa)、1个亮氨酸重复富集区(LRR);SiTLR-1在检测的各组织中均有表达,在体腔液中表达量显著高于围口膜、管足和齿间肌(P<0.05);经V.fortis、β-D-葡聚糖刺激后,体腔液中的SiTLR-1表达量显著上升,刺激后12 h达到最高值;经dsRNA刺激后,体腔液中的SiTLR-1表达变化较小,仅在3 h时略有升高。研究表明,TLR基因参与虾夷马粪海胆的免疫应答,克隆获得的SiTLR-1可特异性识别细菌和β-D-葡聚糖。     

中间球海胆(♀)与光棘球海胆(♂)种间杂交及自繁后代生长与表型特征比较

为了解中间球海胆Strongylocentrotus intermedius(Si)与光棘球海胆Strongylocentrotus nudus(Sn)杂交后代的杂种优势及表型特征,以同期培育的中间球海胆(♀)与光棘球海胆(♂)种间杂交子一代(Si♀×Sn♂)幼胆及自繁子一代幼胆为研究对象,对3种海胆的成活率、生长表现(生长速度和表型变异)和表型特征(管足色素细胞数量、骨片形状、棘刺的颜色和长度)进行了比较。结果表明:经过90 d的养殖,中间球海胆和光棘球海胆的最终成活率均为100%,杂交海胆为97%,但3种海胆间无显著性差异(P>0.05);在0⁶0 d的养殖范围内,杂交海胆具有最快的特定生长率(4.00%/d),且显著高于中间球海胆(2.91%/d)和光棘球海胆(3.15%/d)(P<0.05),而后两者之间无显著性差异(P>0.05),6060 d的养殖范围内,杂交海胆具有最快的特定生长率(4.00%/d),且显著高于中间球海胆(2.91%/d)和光棘球海胆(3.15%/d)(P<0.05),而后两者之间无显著性差异(P>0.05),60⁹0 d时,3种海胆的特定生长率之间均无显著性差异(P>0.05);试验结束时,杂交海胆体质量的变异系数(76.12%)显著高于光棘球海胆(63.81%)和中间球海胆(52.05%)(P<0.05),表明种间杂交显著增加了后代的遗传变异;光棘球海胆管足中色素细胞数量最多,中间球海胆最少,杂交海胆的色素细胞数量介于父母本之间;杂交海胆棘刺为浅紫色,介于中间球海胆的白色和紫海胆的深紫色之间,而棘长较父母本细短;与棘色和管足颜色不同,杂交海胆骨片两端的突起产生了新的变异。研究表明,在幼胆期杂交海胆的表型特征明显区别于父母本,具有更快的生长速度和更高的变异水平,具有较高的育种价值。     

虾夷马粪海胆CYP17基因的克隆及其表达差异

采用分子生物学方法成功克隆了虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius CYP17基因。该基因的cDNA全长为1 570 bp,其中开放阅读框1 482 bp,编码493个氨基酸;CYP17蛋白的相对分子质量约为55 540,等电点为8.068,信号肽断裂位点位于第18和第19个氨基酸残基之间;虾夷马粪海胆的CYP17氨基酸序列与紫球海胆S.purpuratus的同源性为97%,与光棘球海胆S.nudus的同源性为96%。用RT-PCR技术对CYP17基因在虾夷马粪海胆生殖腺不同发育时期的表达差异进行了分析。结果表明:在虾夷马粪海胆3个家系的雄性个体生殖腺中,CYP17基因在1-3家系的表达量最高,依次为10-3家系、6-2家系,而在雌性个体生殖腺中,CYP17基因在10-3家系的表达量最高,依次为1-3家系、6-2家系;在4-1家系海胆3个不同发育时期,CYP17基因在雄海胆性腺中的表达量随着日龄的增加而增加,而雌海胆性腺在发育第430天到第447天时表达量略有增加,发育到第512天时表达量明显增加。本研究表明,CYP17基因在海胆雌、雄个体生殖腺中转录水平上的表达差异明显,雄性的表达量明显高于雌性。     

母源因子boule在光棘球海胆性腺中的表达与定位

为鉴定光棘球海胆Mesocentrotus nudus生殖细胞标记基因,通过基因克隆、荧光定量PCR及切片原位杂交等技术分析了光棘球海胆(湿体质量为76.8 g±10.0 g)母源因子(boule)基因的分子特征及动态表达模式。结果表明:光棘球海胆boule cDNA序列全长为1 788 bp,其中,3′非编码区为601 bp, 5′非编码区为146 bp,开放阅读框(open reading frame, ORF)为1 041 bp,共编码346个氨基酸,包含一个保守的RRM结构域;荧光定量PCR结果显示,boule为母源因子,在整个胚胎发育时期均有表达;boule基因在处于生长期(stageⅡ)光棘球海胆的肠、管足、体腔液和性腺中均有表达,其中,boule基因在精巢表达量最高(P<0.05);在卵巢中表达量随卵母细胞的成熟而逐渐升高,在成熟期(stageⅣ)卵巢中达到最高,精巢中表达量仅在生长期(stageⅡ)及成熟前期(stageⅢ)有较高表达;切片原位杂交显示,boule基因在光棘球海胆精巢的生殖细胞中特异表达,卵巢中未检测到阳性细胞信号。研究表明,光棘球海胆boule基因是雄性生殖细胞标记基因,本研究结果可为海胆雄性生殖细胞发育相关研究提供数据资料。     

六种海胆及四种杂交海胆管足骨片类型和数量

为研究不同种类海胆Echinoidea管足内骨片类型和数量,利用光学显微镜对6种海胆(中间球海胆Strongylocentrotus intermedius、紫海胆Anthocidaris crassispina、光棘球海胆Mosecentrotus nudus、海刺猬Glyptocidaris crenularis、高腰海胆Mespilia globulus、马粪海胆Hemicentrotus pulcherrimus)及4种杂交海胆(中间球海胆♀×紫海胆♂S.intermedius♀×A.crassipine♂、中间球海胆♀×马粪海胆♂S.intermedius♀×H.pulcherrimus♂、中间球海胆♂×马粪海胆♀S.intermedius♂×H.pulcherrimus♀、中间球海胆♀×光棘球海胆♂S.intermedius♀×A.crassipine♂)管足的骨片进行了观察统计并分析。结果表明:10种海胆共有C形体、S形体、杆状体、三叉形体、海马状体5种骨片类型,且不同种海胆骨片类型和数量存在显著性差异;杂交海胆未产生新的骨片类型,拥有双亲的部分骨片类型,在骨片数量上倾向于双亲的平均值。研究表明,利用海胆管足内骨片类型和数量可完全区分出这10种海胆,本研究结果可为海胆分类提供理论依据,也可为杂交种的鉴定提供参考。     

六种海胆及四种杂交海胆管足骨片类型和数量

为研究不同种类海胆Echinoidea管足内骨片类型和数量,利用光学显微镜对6种海胆(中间球海胆Strongylocentrotus intermedius、紫海胆Anthocidaris crassispina、光棘球海胆Mosecentrotus nudus、海刺猬Glyptocidaris crenularis、高腰海胆Mespilia globulus、马粪海胆Hemicentrotus pulcherrimus)及4种杂交海胆(中间球海胆♀×紫海胆♂S.intermedius♀×A.crassipine♂、中间球海胆♀×马粪海胆♂S.intermedius♀×H.pulcherrimus♂、中间球海胆♂×马粪海胆♀S.intermedius♂×H.pulcherrimus♀、中间球海胆♀×光棘球海胆♂S.intermedius♀×A.crassipine♂)管足的骨片进行了观察统计并分析。结果表明:10种海胆共有C形体、S形体、杆状体、三叉形体、海马状体5种骨片类型,且不同种海胆骨片类型和数量存在显著性差异;杂交海胆未产生新的骨片类型,拥有双亲的部分骨片类型,在骨片数量上倾向于双亲的平均值。研究表明,利用海胆管足内骨片类型和数量可完全区分出这10种海胆,本研究结果可为海胆分类提供理论依据,也可为杂交种的鉴定提供参考。     

黑嘴病病原菌人工感染对中间球海胆吞噬作用相关免疫指标的影响

为探讨黑嘴病病原菌感染对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius吞噬作用相关免疫指标的影响,选用壳径约2 cm的中间球海胆108只,用注射器针头刺入海胆体腔,再用浓度10² CFU/mL的黑嘴病病原菌液浸泡,经病原菌胁迫后0、1、6、12、24、48 h时测定各体腔细胞密度、细胞凋亡率、细胞坏死率、吞噬作用相关免疫指标(酸性磷酸酶(ACP)活性、活性氧(ROS)含量和总抗氧化能力(T-AOC))及吞噬相关免疫基因表达量,并利用有效吞噬细胞比例计算几种免疫指标的单细胞贡献值。结果表明:中间球海胆体腔液中变形吞噬细胞密度在黑嘴病病原菌胁迫1 h后下降约80%,同时吞噬细胞凋亡率上升至60.92%;体腔细胞中ACP、ROS和T-AOC在胁迫后呈现不同程度的变化趋势,计算为单个吞噬细胞平均贡献值后,这些指标及C3-pre和Clec4g基因相对表达量均一致呈现先升高后下降趋势,且均在胁迫1 h时达到最高,分别较胁迫前升高3、6、7、4、7倍;在胁迫后6～24 h,虽然吞噬细胞密度逐渐恢复,但其凋亡率呈下降趋势,坏死率逐渐上升至63.98%,C3-pre和Clec4g基因相对表达量,以及ACP、ROS和T-AOC的单个吞噬细胞平均贡献值均出现下降趋势;在胁迫后48 h,Caspase-8基因相对表达量上调至最高值,约为0 h的2倍。研究表明,中间球海胆在病原菌入侵前期,通过提高ACP活性、ROS含量和T-AOC及吞噬相关免疫基因表达等方式增强吞噬作用,并通过细胞凋亡和再生保持细胞数量,在病原菌入侵后期,由于不能清除病原菌,上述指标均下降,吞噬作用逐渐减退,细胞坏死率大幅上升,导致海胆发病。     

Frank Fenner,AC, CMG,MBE, FAA,FRS

The effect of Abate used in the control of Simulium damnosum on non‐target benthic invertebrate organisms was studied in river Oti (West Africa) in the Onchocerciasis Control Programme area. Abate was administered by aerial spraying and pre‐dosing and post‐dosing Surber samples were compared. Baetidae and Leptophlebiidae, two of the three predominating organisms were seriously affected by the Abate. Other non‐target organisms that were killed were Gomphidae, Libellulidae and Dytiscidae. Though the larvicide was toxic to other non‐target organisms, particularly Neoperla and Orthocladinae, the effect did not seem to be significant.     

隐舍,世博生态城,昆明,云南,中国

<正>这处隐于林间的小型生态旅舍仅为旅者提供17间体验式客房。4座高低错落的L形建筑以村落的形式聚集,形成通过曲折步道联接并面向山谷的系列半开放庭院。旅舍大量采用竹木等自然环保素材表现朴实简约的形态。建筑落实低碳环保策略,协助拓展当地日益兴起的生态旅游的视野。建筑依照     

青城山房，成都，四川，中国

当青城山房项目在世界文化遗产,国家5A级风景区青城山脚下渐渐呈现的时候,所有的人都舒了口气。这一组建筑群落没有成为国家级风景区的累赘,反而成为左邻右舍诸多房地产项目中的典范。这是因为建筑群的形体、密度、尺度、选材、质感、与山体树木丛林有机相融,以一种低调内敛的精致,回应着世界文化遗产的人杰地灵,并将当代人的居住行为空间梳理得流畅而舒适。     

洱海双子旅舍,金梭岛,大理,云南,中国

<正>双子旅舍位于云南大理洱海西南部的金梭岛北端,是租用当地原住民住宅用地来进行的旅游开发项目。用地分为南北两块,从北到南有30°的朝向转换。土地的拥有者要求两块地上的建筑物必须是相互独立的,然而从作为旅舍的使用和感受上,又有整体性的要求。于是,一条70m长的柱廊作为主     

阿特沃特学生中心，米德尔伯利学院，米德尔伯利，佛蒙特州，美国

阿特沃特学生中心由3栋现存建筑和3栋新建筑组合而成，它们围合而成的室外空间与周围绵延不断的自然景观连成一体。从西南角度看全景时，这部分校区给人的感受是位于大自然中的建筑——宽阔的草坪，点缀于其中的种类繁多的树木，以及阿迪朗克克族印第安人的传统座椅。新的居住建筑彼此呈一定角度地相对，每一栋建筑都与阿特沃特丘陵的两条山脊平行，并对其有所加强。建筑随景观的走势而转折，其长向因而微妙地被分成了若干片断。     

城市市场,巴雷鲁,里斯本,葡萄牙

旧城策略,现存市场和广场的复兴巴雷鲁是里斯本中心大都市区(AMC)的一部分,位于流经首都的特茹河河口对岸。里斯本是整个大都市区的地理中心,具体来说是其北半部中心,而巴雷鲁是南部的中心。在大都市的概念还没有落实到空间上的时候,这一中心位置通过重要的铁路与市内主要工业区连接在一起。在里斯本大都市区(AML)的区域发展中,巴雷鲁总是处在大规模改造、旧功能淘汰、统一城市空间的改造和更新的交点上。马约市场1号-巴雷鲁这个市场的建设属于城市中心升级工程的一部1主入口,     

CIC ENERGIGUNE，米尼亚诺，维多利亚，西班牙

CIC ENERGIGUNE在一条功能性、通讯性路由的联系下由一系列模数建筑所构成。设计目的在于促使知识能够在一个放松的环境中与研究者之间获得充分交流和转化。     

帕拉莫斯贝尔略克酿酒厂,赫罗纳,西班牙

在独特的环境中建造一座私人酿酒厂,要兼备制造与品尝的功能。在山脚下,山谷的起始,一处受到庇护的地方,这里是项目的发源地。在这样的环境中,不同属性的建筑出现了,包括山脚下的一个小礼拜堂。在贯穿所有组成部分的路径上,出现了一段有屋顶且下沉的路段。它被埋在葡萄树下,好似一个坟墓,这就是酿造厂的生产空间。它不是一个独立的空间,而是一条步行道,由此可以发现不同的空间,而起伏的路径强调出其自身的维度。     

津田山公寓，高津区，川崎市，神奈川县，日本

基地位于川崎市高津区一个小山的南坡上。周围区域都点缀着类似尺度的小山,形成了一系列变化的景观。白天,这里没有遮挡,日照很强,风力也足够,即使在夏天也不需要空调。     

东海大学人文大楼，台中，台湾，中国

2003年．基本设计／黄明威建筑师事务所成立于台湾台中。专注于开发建筑及设计领域的多样性及可能性。设计作品多以融合都市条件及地景涵构形成的基本空间型态为主,藉以探讨并寻求新的空间内容组成方式。主持人黄明威出生于1967年．毕业于美国哈佛大学建筑研究所及台湾东海大学建筑系。现任教于东海大学建筑系。近作包括东海大学人文大楼（获2004年远东杰出建筑奖“校园特别奖”第2名、2005年台湾建筑奖佳作）、国家财团法人同步辐射研究中心增建计划f2006年4月完成）、台北大直美丽华诚品书店（2004年11月完成）以及台北市文德派出所（兴建中）等。