猪奇异变形杆菌的分离鉴定及分子生物学分析

从腹泻病猪消化道中分离得到一株细菌,对该菌进行分离纯化,革兰染色、培养特性和生化试验观察,并进行分子生物学鉴定确定该病病原;同时对相关致病因子进行PCR检测、敏试验和耐药基因检测分析。结果分离的菌株为革兰阴性,具有多形态性;生化试验结果初步证实该菌为变形杆菌。利用PCR方法进一步鉴定,并将PCR产物进行测序分析,结果该菌为奇异变形杆菌。致病因子检测结果表明,Ure C和Rsb A致病因子有关。药物敏感试验结果表明,该菌仅对氟哌酸和四环素敏感,而对卡那霉素,链霉素等药耐药,耐药基因检测表明,该菌aad AI、str B和oxa-31阳性。表明该分离菌株为奇异变形杆菌,其致病力性与Ure C和Rsb A有关,而其耐药性与aad AI、str B和oxa-31有关。     

斑点叉尾鮰套肠症的病原鉴定及其药敏特性

从患败血症并出现肠套叠的斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus肝脏、肾脏及脑组织中分离到一株细菌(TE090214),经人工感染试验证实,该菌为斑点叉尾鮰病鱼的病原且具有高度致死性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等较系统的表观分类学特征鉴定。结果表明:该菌经革兰氏染色为阴性,形状为两端钝圆的短杆菌,无荚膜及芽孢,氧化酶阳性,鸟氨酸脱羧酶阴性;能发酵葡萄糖产气,能利用甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖和水杨苷产酸,能水解七叶苷等。对该菌的16S rDNA进行PCR扩增、克隆测序,得到1条长度为1 537 bp的核苷酸序列(GenBank登录号GQ184148);在以该菌16S rDNA序列和GenBank数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,菌株TE090214与嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophi-la聚在一簇,结合形态及生理生化特点,可将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示:在供试的15种抗菌药物中,菌株TE090214对头孢哌酮、卡那霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星敏感,对链霉素、阿米卡星、复方新诺明中度敏感,对氨苄青霉素等7种药物存在不同程度的耐药性。     

867株血培养病原菌的分布及耐药性分析

目的:探讨该院2016年6月-2017年5月引起血液感染的常见病原菌的分布及对常见抗生素的耐药情况,为临床抗菌治疗提供科学依据。方法:用Bact/Alert 3D全自动血液培养仪对19 245份血液标本进行培养检测,阳性菌株转种后用VITEK2 COMPACT全自动微生物鉴定仪进行分离鉴定及药敏情况分析。结果:在19 245份血液培养标本中分离出病原菌867株,阳性检出率为4.51%,其中革兰阴性杆菌342株,占39.45%,革兰阳性球菌499株,占57.55%,真菌12株,占1.38%,厌氧菌14株,占1.62%;病原菌中,革兰阴性杆菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和甲型副伤寒沙门菌为主,革兰阳性球菌以凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为主。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶株分别占55.98%、23.00%,且发现耐亚胺培南和美罗培南的肺炎克雷伯菌。葡萄球菌对呋喃妥因、利福平、利奈唑胺和万古霉素均高度敏感。结论:血液培养主要病原菌为革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌,分离的病原菌耐药情况严重,加强细菌耐药性的监测有助于合理使用抗菌药物。     

一株黄金鲫鱼源蜡状芽孢杆菌的筛选、鉴定及耐性研究

为筛选出适合制作水产微生态制剂的黄金鲫Carassius auratus鱼源益生菌,从黄金鲫肠道分离细菌,通过产酶能力测试、体外抑菌试验和抗生素敏感性试验进行筛选,筛选菌株经纯化培养后通过形态特征观察、生理生化及分子特征进行鉴定;采用紫外分光光度计和稀释涂布平板计数相结合的方法,建立细菌活菌数与OD值的线性曲线,测定细菌对高温、酸性、胃液、肠液、胆盐耐受能力;通过固定黄金鲫体外肠道黏液蛋白模型,结合荧光标记物Hoechst 3325标记细菌法,检测细菌对黄金鲫肠黏液蛋白的黏附能力,并通过急性毒性试验检测菌株的安全性。结果表明:从黄金鲫肠道中共分离出5株具有产酶能力的细菌,其中HJJ-1菌株具备较好的产酶特性,可有效抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长,且对多种药物敏感;进一步对该菌株进行鉴定及益生效果评价,16S rRNA基因序列分析显示,HJJ-1株与蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus的一致性达100%,结合形态观察和生理生化试验结果,最终鉴定HJJ-1菌株为蜡状芽孢杆菌;菌株OD_(600 nm)值(x)与活菌数(y)的回归方程式为y=5.493 3e^{(7.823 8)}(7.823 8)^x(Rx(R²=0.990 2),该菌株具有良好的耐高温、耐酸性、耐胃液、耐肠液、耐胆盐等特点,可黏附于黄金鲫肠道黏液蛋白,且安全性良好。研究表明,本试验中最终筛选出的黄金鲫鱼源蜡状芽孢杆菌性能优良且安全,具有潜在的益生特性。     

14359例患者痰培养病原菌分布及细菌耐药性分析

目的:对住院患者下呼吸道病原菌的分布及耐药性进行分析,为临床合理选择用药提供依据。方法:选取14 359例患者的痰标本作为研究对象,对痰标本进行常规培养、菌种鉴定和药敏试验。结果:在所有送检的14 359例痰标本中总计分离出6 339株病原菌,检出率为44.1%,排除重复菌株共分离出病原菌4 546株,其中革兰阴性杆菌2 330株,占51.3%,革兰阳性球菌741株,占16.3%,真菌1 475株,占32.4%。药敏结果分析显示,在革兰阴性杆菌中,克雷伯菌属对阿莫西林/克拉维酸、呋喃妥因、亚胺培南、美罗培南和头孢唑啉耐药率均高于大肠埃希菌,差异均有统计学意义(P<0.05);大肠埃希菌对氨曲南、复方新诺明、环丙沙星、哌拉西林、庆大霉素、四环素、头孢吡肟、头孢曲松、左旋氧氟沙星的耐药率均高于肺炎克雷伯菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。大肠埃希菌对四环素的耐药率,不动杆菌属对亚胺培南和头孢他啶的耐药率,以及铜绿假单胞菌对阿莫西林/克拉维酸、复方新诺明和头孢曲松的耐药率均显著高于其余四种菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。在革兰阳性球菌中,凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌对16种抗菌药物的耐药率除万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺和替加环素均敏感,两者对青霉素、呋喃妥因和克林霉素的耐药率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);凝固酶阴性葡萄球菌对其余抗生素的耐药率均高于金黄色葡萄球菌,差异均有统计学意义(P<0.05)。1 475株真菌对5种抗真菌药物5氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑的耐药率分别为6.0%、0、3.2%、4.4%、0。在克雷伯菌属中有94株产ESBLs,产酶率为16.1%,在大肠埃希菌中有283株产ESBLs,产酶率为54.5%;在金黄色葡萄球菌中有45株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,占19.3%;在凝固酶阴性葡萄球菌中有213株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌,占87.7%;在检出的276株流感嗜血杆菌中有168株产β-内酰胺酶,产酶率为60.9%。结论:下呼吸道病原菌主要以克雷伯菌属、大肠埃希菌等革兰阴性杆菌,凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌等革兰阳性球菌,白假丝酵母菌为主,各种菌对不同抗菌药物显示不同的耐药性,临床上应根据病原菌的分布情况和耐药性分析,并结合临床信息合理选用抗菌药物。     

海湾扇贝幼体期流行性弧菌病的研究

从辽宁兴城育苗场和辽宁省海洋水产研究所育苗室患面盘解体的海湾扇贝ArgopectenirradiansLamarck幼体中分离出6株菌,经感染试验表明,其中3株菌B01、Y01和Y02为病原菌。根据菌体形态及生理、生化测试,B01鉴定为需钠弧菌Vibrionatriegen,Y01和Y02具有相同的形态、生理、生化特征,鉴定为弧菌属Vibrio。需钠弧菌对庆大霉素、痢特灵、菌必治、诺氟沙星、氯霉素、环丙沙星、多粘菌素B敏感;Y01和Y02菌对诺氟沙星、菌必治、氯霉素、复方新诺明、环丙沙星、磺胺异唑敏感。对海湾扇贝育苗水体中细菌总数和弧菌数量的监测结果表明,幼体发生病变之前的水体中,细菌和弧菌的密度高于正常育苗水体的。文中还对病原菌的传播途径等问题进行了讨论。     

斑点叉尾鮰致病菌株的鉴定及特性

菌株IP0004是从患病斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus肝脏中分离出的一株致病菌。经形态学观察、生理生化特性分析和16S rRNA基因序列测定分析对其进行分类鉴定,确定其为类志贺邻单胞菌Plesiomonasshigelloides。该菌为革兰氏阴性杆菌,极生单鞭毛,无芽孢,有荚膜;发酵葡萄糖、麦芽糖、海藻糖产酸,鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、β-半乳糖甙酶、α-半乳糖甙酶为阳性;其生长盐度为0²5,pH值为525,pH值为5¹0,最适生长温度为37℃。菌株IP0004 16S rRNA基因部分序列与类志贺邻单胞菌16SrRNA相应基因序列的同源性均大于99%,构建的系统进化树显示该菌株与类志贺邻单胞菌聚为一类。菌株IP0004的细胞毒性外膜蛋白COMP(cytotoxic outer-membrane protein)基因与类志贺邻单胞菌的COMP基因序列相似性大于99.9%,说明该菌株为类志贺邻单胞菌,具有COMP基因,有一定的致病力。药物敏感试验结果表明,菌株IP0004对头孢曲松、头孢拉定、头孢唑林、氧氟沙星敏感,而对新生霉素、利复平、复方新诺明不敏感。     

乌鳢烂身病病原的分离鉴定及病理组织观察

为探究乌鳢Channa argus烂身病的病因及患病乌鳢的体表组织病理学变化,从广东中山某养殖场患烂身病乌鳢病灶处分离到一株优势菌ZS20200317,通过形态学特征、革兰氏染色、16S rRNA及生理生化特性对分离菌株进行鉴定,并检测了该菌株的药物敏感性,最后采用回归感染试验确认分离菌株为导致乌鳢烂身病的病原菌。结果表明:患病乌鳢烂身处的肌肉组织出现了明显变性、坏死和炎症细胞浸润;LB琼脂培养平板培养结果显示,该菌呈边缘光滑有光泽的圆形白色菌落,为革兰氏阴性菌;16S rRNA基因进化分析显示,菌株ZS20200317与维氏气单胞菌Aeromonas veronii的亲缘关系最近,一致性高达98.5%;生理生化试验显示,该菌的赖氨酸脱羧酶、甘露醇、覃糖、蔗糖、氧化酶和VP等生理生化反应为阳性;药敏试验显示,该菌对氯霉素、头孢他啶、头孢氨苄、头孢唑林和头孢拉定沙星等20种抗生素药物敏感,对氨苄西林、苯唑西林、羧苄西林、青霉素G、麦迪霉素、万古霉素和克林霉素7种药物具有耐药性;人工回归感染试验证实,该菌能引起健康乌鳢死亡。研究表明,维氏气单胞菌是广东中山地区乌鳢烂身病的病原,本研究结果为乌鳢维氏气单胞菌病的防控提供了理论依据。     

虹鳟肠炎红嘴病病原菌的确定及其生长特性研究

为了确定虹鳟Oncorhynchus mykiss肠炎红嘴病的病原菌,采用分离纯化的方法从患病虹鳟肝脏和脾脏内分离到一种细菌(BH1206),通过人工感染试验并且采用常规生化鉴定、API 20E试剂盒、Biolog鉴定系统和分子测序方法对该菌进行判断,采用纸片法对该菌进行药敏试验。结果表明:BH1206菌株为患病虹鳟的致病菌,感染该菌后虹鳟体表呈现出血点,吻端红肿及溃烂,有红色脓状物包裹肛门,肠道出血,内部脏器均有不同程度的病变;该菌为革兰阴性、氧化酶阴性的非发酵型需氧杆菌;根据生理特征及分子鉴定结果分析,BH1206菌株为鲁氏耶尔森菌Yersini ruckeri;BH1206菌株在温度为28³0℃时生长状态最佳,在p H为6.530℃时生长状态最佳,在p H为6.5⁷.5范围内生长状态最佳,在Na Cl浓度为3%内的培养基中能生长并且Na Cl含量为0时生长状态最佳;BH1206菌株对利福平、多黏菌素、阿莫西林完全耐药,对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、羧苄青霉素、强力霉素、诺氟沙星、氨苄西林、青霉素、链霉素、四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、氯霉素、呋喃唑酮、新霉素均有不同程度的敏感。研究表明,虹鳟肠炎红嘴病病原菌为鲁氏耶尔森菌,药敏试验结果可以为该病的防治提供参考。     

草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析

从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明:该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液(3×109cfu/mL),可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染(3×108cfu/mL),死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位(rpoB)和促旋酶亚单位蛋白(gyrB)3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示:该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。