乙酰肝素酶-1/多配体蛋白聚糖-1轴对肝癌细胞侵袭能力的影响

乙酰肝素酶-1(Heparanase-1,HPA-1)/多配体蛋白聚糖-1(Syndecan-1,SDC-1)轴调控多种肿瘤细胞的转移。肿瘤细胞侵袭能力的改变是导致肿瘤脱离原发组织,进而向远隔器官转移的关键启动因素。为了检测Heparanase-1/Syndecan-1轴在肝癌细胞中是否存在及其对肝癌细胞侵袭能力的影响,我们利用SDC-1小干扰RNA及重组HPA-1(rHPA-1)分别处理肝癌细胞Hepa1-6,再通过反转录PCR(RT-PCR)、Western-blot及免疫细胞化学检测SDC-1表达,应用体外基质胶侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。结果显示:SDC-1小干扰RNA明显抑制SDC-1表达;r HPA-1处理显著下调SDC-1蛋白的分子量,但没有改变SDC-1的mRNA表达;SDC-1表达下调及rHPA-1处理均促进Hepa1-6细胞的侵袭。因此得出结论:HPA-1通过作用于SDC-1蛋白,即形成Heparanase-1/Syndecan-1轴启动肝癌细胞转移。     

RNA在植物细胞中的定位及其研究进展

评述RNA在植物系统中的亚细胞定位、定位机制及活细胞中RNA成像的最新研究成果.指出RNA在细胞质内存在多处不同位点,且因存在多种不同的RNA定位途径将RNA运送并释放到特异位点.RNA的亚细胞定位与蛋白质定位、RNA存在状态、极性细胞的生长及RNA在细胞中的功能密切相关,该定位过程对植物建立和维持细胞极性生长有重要意义.目前RNA成像技术的不断更新,表现在利用基因工程技术构建RNA报告分子,直接标记RNA等方法的成功应用,对植物细胞中RNA的定位及其机制研究有很大的推进作用.     

三种启动子shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸 (small interfering RNA siRNA)，设计采用特异性延伸引
物和上游、下游两条通用引物，通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6
+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子 小发夹状RNA（shRNA）表达框.用该方法制备的增
强型绿色荧光蛋白（EGFP）特异性三种启动子 shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因
表达，其中以tRNAVal shRNA表达框抑制效果最显著，且未检测到干扰素应答基因2'5'OAS mRNA的表达，
表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应，进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最
适搭配启动子.     

采用非浸润模板制作纳米颗粒基因药物

近年来,RNA(Ribonucleic Acid,核糖核酸)干扰现象在癌症、病毒感染治疗方面展现出巨大潜力。RNA干扰药物可以直接作用于致病基因,治疗作用更加彻底,治疗范围更加广泛,同时降低了的副作用。RNA药物研究工作中遇到的最大困难就是将敏感易分解的基因药物传输到哺乳动物细胞中。美国北卡罗来纳大学实验组致力于采用PRINT(Particle Replication in Non-wetting Templates,在非浸润模板中制作纳米颗粒)技术制作大小形状均一可控的纳米级颗粒来运载基因药物。实验中通过测定HeLa癌症细胞中的荧光素酶降低率以及细胞存活率来评价PRINT颗粒的运载效果。最终制得运载效率为65%的PVP(Poly(N-vinyl pyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮)PRINT颗粒。     

RNA干涉和小干涉RNA

RNA干涉(RNA interference.RNAi)可以抑制诸多真核基因的表达,小干涉RNA(small intmference
RNA,siRNA)是RNA干涉的引发物，不同的siRNA可以引导不同水平的RNA干涉，不同种细胞中siRNA的寡核苷
酸链的性质也有很大的不同.非编码RNA中的微小RNA(micnoRNA,miRNA)与siRNA在结构及作用方式等方面有
很多区别和联系.RNAi的作用机制大致有两种：在Drosophila中的一般作用模式和在C.elegans中的扩大作
用模式.利用RNA干涉技术可以通过抑制基因的表达来研究其功能；RNA干涉作为基因治疗的工具，在肝炎
和AIDS的治疗过程中有一定的作用.RNAi的高特异性、高效性、放大效应和无细胞特异性等特点在科研中
得到了广泛的应用.     

Sp1促进A549细胞增殖、EMT、侵袭和血管生成的研究

研究Sp1转录调控原癌基因c-Met促进肺癌A549细胞增殖、EMT转化、侵袭和血管生成,抑制A549细胞凋亡的分子机制.首先采用双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测Sp1与c-Met基因启动子结合情况.之后,在A549细胞中过表达和沉默表达Sp1,Western-blotting法和免疫荧光法研究Sp1转录调控c-Met,促进A549细胞增殖、EMT转化、血管生成,侵袭并抑制A549细胞凋亡的分子机制.与癌旁组织和正常组织相比,在肺癌组织样本中,Sp1和c-Met均呈现高表达;Sp1能够与c-Met基因启动子结合;Sp1转录调控c-Met通过激活c-Met-ERK通路,促进A549细胞增殖、抑制A549细胞凋亡;Sp1转录调控c-Met亦能促进A549细胞EMT转化,侵袭和血管生成. Sp1转录调控c-Met能够促进A549细胞增殖、EMT转化,侵袭和血管形成,抑制A549细胞凋亡.在肺癌发生发展进程中,Sp1转录调控c-Met发挥重要作用.     

细胞质处理小体(P-小体)与基因表达的调控

m RNA处理小体,又称P-小体(processing bodies,P-bodies),是细胞质中含有多种功能蛋白和RNA的聚集体.评述P-小体的形成和运动特点,以及其与小RNA、外切体相互作用,参与基因表达的调控.介绍了本实验室在P-小体植物细胞中的最新研究进展.指出P-小体是m RNA降解和储存的场所,在转录后水平参与基因表达的调控,P-小体在细胞中是动态变化的,P-小体中多样化的功能蛋白在P-小体的组装、功能行使中发挥重要作用.P-小体作为细胞质内m RNA的储存和降解结构在基因表达的转录后调控中起重要作用,其调控机制尚待进一步研究补充,P-小体与小RNA分子(micro RNA,mi RNA)调控的基因沉默之间也存在关联性.     

干扰MHR1对嗜热毁丝霉纤维素酶活性的影响

利用RNA-Seq技术,筛选到潜在的负调控因子MHR1(fungal_TF_MHR1).为研究MHR1与纤维素酶基因表达之间的关联,设计基因mhr1的RNA干扰序列,并使用丙酮酸脱羧酶强启动子pdc成功构建mhr1基因的RNA干扰表达载体,经原生质体转化,获得一株干扰效率较高的阳性转化子MtR5.通过RT-q PCR、酶活测定和胞外蛋白浓度测定等分析发现,在诱导和非诱导培养条件下,转化子MtR5的胞外蛋白浓度、纤维素酶活性以及主要纤维素酶基因的表达量均高于野生型的.干扰转录因子MHR1可增加纤维素酶基因的表达量,研究表明,MHR1是一种与纤维素酶基因表达调控相关的转录因子.     

活性污泥高质量总RNA提取的一种有效方法

提取高质量的RNA是在基因表达水平上研究废水生物处理过程活性污泥中微生物菌群变化及关键调控基因表达规律的必要条件,但由于活性污泥富含腐殖质与RNA酶,导致常规提取方法难以获得高质量的RNA.本研究通过反复探索与试验,得到了一种经济而快捷的从活性污泥中提取高质量RNA的方法,即在PBS洗涤沉淀污泥的基础上,用含PVP和巯基乙醇的CTAB(十六烷基溴化三甲胺)裂解液裂解活性污泥细胞,并与细胞中的核酸形成核酸-CTAB复合体,然后用酚-氯仿-异戊醇去除细胞裂解液中的蛋白,最后采用LiCl选择性沉淀其中的RNA.经核酸蛋白测定仪和1 %变性琼脂糖凝胶电泳检测表明,用此方法提取的RNA均一性和完整性好,并且具有反转录活性.     

RNA干扰抑制COX-2的重组腺病毒的构建及体外抗肿瘤活性

环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)是肿瘤治疗中的一个重要的靶向基因。可COX-2抑制剂因易引发肝损伤的副作用,影响了COX-2抑制剂在临床上的应用。本研究构建出运载小干扰RNA的重组腺病毒试图解决上述难题。实验结果显示:癌细胞系中的COX-2成功被抑制,同时活细胞计数实验结果表明COX-2在癌细胞中的抑制能促使癌细胞生长受到抑制,而正常细胞不受到影响,证明该载体系统能有效解决COX-2抑制剂易引发肝损伤的毒副作用,为其临床应用提供了坚实的基础。     

数学优化方法在新安江模型参数率定中的应用分析

以3种数学优化方法及新安江(三水源)模型的理论为依据,介绍了优化方法在新安江三水源模型参数率定中的应用.将率定成果与API模型进行了对比,说明这3种优化方法在大宁河流域参数率定中应用效果良好,具有很好的参考和推广价值.     

霸县凹陷文安斜坡内带层序地层学研究

以文安斜坡内带深层为研究对象,应用高分辨层序地层学等方法研究识别隐蔽油藏.通过兴隆1井地层重新划分及高分辨率三维地震应用,将该区沙三、沙四段地层之间重新确定为不整合接触.在三级层序地层框架建立的基础上,刻画各体系域砂体展布特征,构建了坡折带控制沙四下自生自储岩性油气藏成藏模式.通过钻井实践,首次在霸县凹陷发现沙四下段含油层系及新的烃源岩层,实现了深层自生自储式油藏类型的勘探突破.     

齿轮—五杆机构的轨迹特性研究

采用计算机机构动画仿真的方法，对齿轮五杆机构的轨迹特性进行了研究。分析了该机构双曲柄存在的条件，两连杆铰接点Ｃ的轨迹曲线可到达的区域及该轨迹曲线形状随机构结构参数的不同而变化的规律，从而为齿轮五杆机构的轨迹综合提供了重要依据。     

密炼机转子的刚度计算

介绍了变截面梁变形计算的初参数法，运用该方法求密炼机转子的变形，并得到了精确的解。     

高等学校固定资产计提折旧问题探讨

中国现行会计制度规定,高等学校的固定资产不计提折旧。随着经济的发展和高等教育的改革,高等学校的经济成分越来越复杂,固定资产管理和核算中暴露出来的问题越来越突出。针对现行高校固定资产计价模式存在的问题,提出了对高校固定资产计提折旧的设想,研究了高校固定资产折旧的范围、折旧年限、折旧方法及会计处理办法。     

浅析资产减值会计对利润的操纵

会计制度规定企业定期或者至少于每年年度终了，对各项资产进行全面检查，合理地预计各项资产可能发生的损失，并计提资产减值准备，既不高估资产或收益，也不少计负债或费用，从而避免虚增企业利润。但在实务中，一些企业却利用会计法规准则中的原则性，通过资产减值准备达到操纵会计利润的目的，本文即是从企业滥用资产减值入手，以实例来揭示企业计提秘密准备的意图，以引起业内人士的重视。     

扬声器的自滤波特性与D类功放失真的改善

应用动圈式扬声器的电—力—声类比等效线路对动圈式扬声器的频率特性进行了初步的研究,提出了利用扬声器的自滤波性能改善因D类功放移相网络引起信号相位失真的方法。同时,采用比较、反馈的方法对音频信号的谐波加以抑制,使得数字功放的总体失真指数下降。     

一类含间隙分布时滞的种群模型稳定性研究

主要借助螺线特性,对一类含间隙分布时滞的种群增长模型特征方程λ＋c＝d（1＋λT）     

红土颗粒粒度的分维变化特征

借助分形几何理论,探讨红土在不同处理方法下其颗粒粒度的分维变化特征结果表明：红土的颗粒粒度具有线性分形结构的特点是客观存在的事实,其分维值的大小反映了土中颗粒粒度的分布情况,并与土的物理力学性之间存在一定的关系分维是描述土的颗粒粒度的一个新的特征参数     

独立学院学风建设的调查与思考

文章在对独立学院进行抽样调查的基础上,分析了影响独立学院学风的种种内部和外部因素,并由此探讨了建设优良学风的措施。