4个群体文蛤的RAPD分析

用建立的高重复性RAPD优化体系,对文蛤Meretrixmeretrix4个不同地理群体(广西文蛤Gh、白壳文蛤Gb、山东文蛤S、江苏文蛤J)的个体进行RAPD分析,获得了较好的重复性条带。从20个随机引物中筛选出6个引物进行RAPD扩增,结果显示:Gb群体有11条特征带,Gh群体有2条,这些特征性RAPD扩增带可以作为这两个群体的RAPD分子标记;J群体和S群体没有明显特征带,可能预示这两个群体间遗传渐渗导致种质资源趋向同质化;Gh、S、J群体多态比例差别不大,为61.54%⁶2.86%,而Gb群体仅为33.33%。采用修正后的Shannon多态性指数方程进行遗传多态性分析,结果显示:Gh、S、J群体多态性指数分别为0.189、0.195、0.200、Gb群体仅为0.115。研究结果表明,文蛤不同群体的遗传地理分化明显,Gh、S、J群体遗传多样性水平较高,而Gb群体的遗传多样性较低,可能预示该群体分布范围较小、群体数量不大,应加强对其资源的保护。Gh与Gb群体为同一栖息地,除壳色和壳形态差异外,遗传多态性差距悬殊,已超出种内变异范围,二者是否为不同种或具生殖隔离的地理亚种,还待于深入研究。     

用磁珠富集法快速制备银鲫微卫星标记

将磁珠富集法和用γ-32P标记的放射性探针法相结合,快速制备银鲫Carassius auratus gibelio微卫星。用限制性内切酶MboI对银鲫完整基因组DNA酶切,用不同蔗糖浓度梯度离心收集400⁹00 bp大小的片段,连接Brown接头,构建银鲫全基因组文库。用生物素标记的(CA)16寡核苷酸探针进行筛选,磁珠富集含有微卫星的DNA单链序列;对DNA模板进行PCR扩增,连接pMD18-T载体,转入用CaCl2制备的感受态大肠杆菌Escherichia coliDH5α中,得到微卫星序列文库;经用同位素γ-32P标记的探针(CA)16二次筛选,获得235个阳性克隆,对其测序,得224个含微卫星序列,完美型、非完美型、复合型序列分别占总数的52.8%、28.7%、18.5%。除探针中使用的(CA/GT)n重复单元外,还观察到(GA/CT)n、(ACTC)4的重复序列。设计163对引物,选择合成30对引物,经聚丙烯酰胺凝胶筛选,9对可以获得清晰条带,其中3对为单态,6对为多态。     

大连海域口虾蛄资源遗传多样性的分析

采用RAPD方法对大连沿海野生口虾蛄Oratosqilla oratoria资源的遗传多样性进行分析。结果表明:20条引物平均每条扩增出12.1条带,共检测到位点242个,其中多态位点占67.8%,个体间遗传距离为0.2367⁰.5402,平均遗传距离为0.3583;根据扩增结果构建反映品种间亲缘关系的UPGMA聚类图,24个个体可划分为两大类。     

州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤3个群体同工酶的分析

使用水平式淀粉凝胶电泳法,对采自天津地区的州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤3个群体进行了AAT、α-GPD、GPI、IDH、MDH和PGM共6种同工酶以及肌浆蛋白(PROT)的电泳分析。结果表明:在检测出的12个基因座位中,州河鲤群体中存在变异的是α-GPD*、GPI*、MDH-2*、PGM*、PROT*,建鲤群体中存在变异的是α-GPD*、GPI*和PGM*,框鳞镜鲤群体中存在变异是α-GPD*、GPI*、PGM*和PROT*;州河鲤、建鲤、框鳞镜鲤的多态基因座位比例(P0.99)分别为41.67%、25.00%和33.33%,平均杂合度预期值(He)分别为0.0449、0.0749、0.0518;PGM*可以作为区分3个群体的标记基因座位,州河鲤群体中*c/c基因型占85.71%,建鲤群体中*b/c基因型占65.71%,框鳞镜鲤群体中*b/b基因型占56.67%。     

广西和广东地区施氏獭蛤3个自然群体的形态差异和遗传多样性分析

采用形态特征分析和RAPD技术对采自广西北海、防城和广东湛江的施氏獭蛤Lutraria siebaldii 3个自然群体和越南大獭蛤Lutraria maxima 1个群体的遗传多样性进行分析。结果表明:用20条引物从施氏獭蛤3个群体和越南大獭蛤1个群体的145个样品中共扩增出428条带,大小为125～5 000 bp,每条引物扩增出6～17条带;多态位点比例为76.1%～91.9%,平均多态位点比例为84.5%,遗传距离为0.1321～0.2441;对施氏獭蛤3个群体和大獭蛤1个群体进行UPGMA聚类分析,施氏獭蛤北海群体和防城群体先聚为一体,再与湛江群体聚类,最后与越南的大獭蛤群体聚为一个整体;用8条引物可以区分施氏獭蛤3个自然群体和大獭蛤群体,可作为群体特征标记;形态差异分析结果显示,湛江、北海和防城施氏獭蛤3个群体的形态较接近,而越南大獭蛤群体的外部形态和遗传距离均与施氏獭蛤3个群体差异较大,已分化成为同属不同种;主成分分析表明,主成分1、主成分2和主成分3的贡献率分别为49.13%、17.18%和14.02%,累计贡献率为80.33%;施氏獭蛤3个群体判别函数的判别准确率P1为88.9%～100.0%,P2为86.7%～100.0%,综合判别率为95.9%。这说明施氏獭蛤3个群体的遗传多样性均处于较高水平,种质状况良好,且具有很好的养殖前景。     

利用微卫星标记指导红鳍东方鲀亲本选配

为制定红鳍东方鲀家系配组方案提供可行性指导,利用微卫星标记辅助红鳍东方鲀Takifugu rubripes家系的建立,选择34个微卫星标记对红鳍东方鲀两个群体进行遗传评估。结果表明:A群体的平均等位基因数(Na)和Nei基因多样性指数(He)分别为6.647 0和0.711 5,B群体的相应值分别为4.647 1和0.646 1,且两个群体之间的遗传差异达到显著性水平(P<0.05);群体间的遗传分化系数(GST)为0.050 7,基因流(Nm)为4.679 6,表明红鳍东方鲀群体间存在低程度的遗传分化和一定程度的基因交流;分子方差分析(AMOVA)表明,遗传变异主要存在于群体内,所占比例为78.49%,而群体之间仅占21.51%;根据群体间Nei氏遗传距离构建UPGMA系统树,群体内个体之间的遗传距离为0.11⁰.82,依据遗传距离的远近将全部个体分成多个分支,不同分支内含有数个个体;各项遗传参数表明,试验群体具备一定程度的遗传变异,不同个体之间拥有相对较远的亲缘关系,可以根据个体之间遗传距离制定育种计划,建立家系进行选育研究。研究表明,利用微卫星标记信息构建红鳍东方鲀家系的方法是切实可行的。     

中华鳖微卫星座位的分离与鉴定

将生物素杂交法与放射性同位素杂交法相结合,从中华鳖Trionyx sinensis基因组中分离出含有GA/CT和CA/GT重复类型的微卫星分子标记。共获得931个阳性克隆,从中选取286个进行测序,得到273个(95.45%)含有微卫星的序列,其中70.34%的重复数在10以上,55.51%为完美型。除探针中使用的CA和GA重复单元外,还观察到GC、TGTGT的重复序列。设计获得242对微卫星引物,合成40对,并对中华鳖群体遗传背景进行分析,结果表明:8对引物表现为单态,6对引物扩增带不是目的带,4对引物无扩增条带,其余22对引物扩增出多态性条带;平均等位基因数为3.48个,观测杂合度为0.1667⁰.9620,期望杂合度为0.15280.9620,期望杂合度为0.1528⁰.7222,多态信息含量为0.14110.7222,多态信息含量为0.1411⁰.6800,平均多态信息含量为0.4382,大部分标记适用于中华鳖群体的遗传研究。     

养殖大口黑鲈的遗传多样性分析

用RAPD技术分析了广东养殖大口黑鲈Micropterus salmoides3个群体基因组DNA的多态性。结果表明:用12条随机引物对3个群体共88尾大口黑鲈的基因组DNA进行扩增,共获得了106个位点,平均每条随机引物扩增出8.8个位点;广州群体、顺德大良群体和顺德南水群体的多态位点比例分别为32.08%、33.02%和40.57%;Nei遗传多样性指数分别为0.1151、0.1176和0.1627;Shannon s遗传多样性指数分别为0.1708、0.1742和0.2378。这表明目前广东地区养殖大口黑鲈种质资源还具有一定的遗传多样性,但养殖群体的遗传多样性在降低,且具有不同程度的种质退化。     

鲤抗寒性状的RAPD标记转化为SCAR标记的研究

以黑龙江鲤Cyprinus carpio haematopterus、荷包红鲤抗寒品系、荷包红鲤Cyprinus carpio var.、柏氏鲤Cyprinus pellegnini pellegnini以及荷包红鲤抗寒品系(父本)与柏氏鲤(母本)杂交F2的DNA样品为材料,用300个随机引物对其进行PCR扩增,获得2个与鲤抗寒性状相关的分子标记AL04986和AR02788。回收、纯化这两个RAPD标记,连接到pMD18-T载体中,转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,并对插入片段进行测序。根据测序结果,设计了3对SCAR引物SCAL04L/SCAL04R1、SCAL04L/SCAL04R2和SCAR02L/SCAR02R,其中SCAR02L/SCAR02R这对引物可以成功的反映出杂交F2两个群体在抗寒能力上的差异,适宜的退火温度为57℃,将此标记命名为SCAR02788。根据AL04986的测序结果设计的两对SCAR引物并没有反映出这种差异。SCAR02L/SCAR02R标记可以用作鲤抗寒基因分子辅助选择的依据。     

荷包红鲤与德国镜鲤正反杂交组遗传结构的微卫星分析

用11对微卫星引物对两个杂交组合(荷包红鲤♀×德国镜鲤♂,德国镜鲤♀×荷包红鲤♂)的遗传结构进行了分析。结果表明:11对引物均能表现很好的多态性,可用作两个杂交组合遗传结构的分析,且得到的MFW 30可以用来鉴别正反杂交组的双亲;正反杂交组多态信息含量(PIC)均值分别为0.5072和0.5359,属高度多态性;子代的有效等位基因数分别为2.6594和2.9211,均大于母本而小于父本;在反交组子代中杂合度为0.9212,要高出双亲,正交组中为0.7515,介于双亲之间,均显示出子代的高遗传变异水平;Hardy-Weinberg平衡的卡方检测发现,正反杂交子代分别有8个和10个位点发生大幅度偏离平衡;双亲间遗传距离正交组为0.2699,反交组为0.3578,显示出能产生杂交优势的潜力且正交组要低于反交组;UPGMA聚类图显示,子代在正交组中与母本近,在反交组中与父本近,两者都提示杂交子代与荷包红鲤的亲缘关系较近。     

银鲫与普通鲫早期胚胎发育的比较研究

为了解黑龙江水系银鲫Carassius auratus gibelio和普通鲫C.auratus auratus的胚胎发育过程,对银鲫(3n♀×3n♂,SS)和普通鲫(2n♀×2n♂,DD)的胚胎发育过程进行了比较观察。结果表明:SS(DD)成熟的卵子呈浅黄色,卵膜透明,圆形,有黏性,卵径为1.3¹.7 mm(1.21.7 mm(1.2¹.6 mm);水温为(23±1)℃条件下,SS(DD)受精后1 h 08 min(1 h 03 min)进入卵裂期,受精后2 h 54 min(5 h 02 min)进入囊胚期,受精后8 h 06 min(6 h 49 min)进入原肠胚期,受精后10 h 25 min(10 h 51 min)进入神经胚期,受精后14 h 22 min(16 h 20 min)进入器官形成期,59 h 31 min(59 h 05 min)后出膜。研究表明,SS和DD均具有正常的早期胚胎发育过程,这为进一步了解SS和DD的遗传背景和生殖方式提供了生物学依据。     

鲫听觉特性研究

为了解鱼类的听觉特性,以鲫Carassius auratus Linnaeus为研究对象,利用心电图(ECG)法和听觉脑干反应(ABR)法分别研究了体质量为262. 6～321. 8 g鲫的听觉阈值,通过在鱼体内插入电极,分别记录20尾鲫的心电图信号和听觉诱发电位,绘制出听力曲线,并分析比较了两种电生理听觉阈值测定方法的优缺点和准确性。结果表明:采用ECG法测得鲫听觉敏感频率范围为300～1000 Hz,最敏感频率为800 Hz,对应的听觉阈值为(70. 00±0. 55) d B;采用ABR法测得鲫听觉敏感频率范围与ECG法相近,最敏感频率相同,但对应的听觉阈值为(76. 00±0. 50) d B,采用ABR法所测数值略高于ECG法,总体相差约为(3. 50±0. 75) d B,在统计学上无显著性差异(P>0. 05)。研究表明,ABR法操作简便,数据精确,但对环境要求较ECG法更高,本研究结果可为了解中国淡水鱼类的听觉特性,以及发展淡水音响驯化型牧场建设提供参考和数据支持。     

关于阿维菌素对异育银鲫的急性毒性和组织病理研究

采用每24 h换液式毒性试验法研究了不同浓度(0.01～2.56 mg/L)的阿维菌素对异育银鲫Allogy-nogenetic crucian carp的急性毒性,并对暴露在0(对照)、0.01、0.04 mg/L阿维菌素溶液中养殖21 d后异育银鲫的鳃、肾、肝、脾和脑组织器官的病理切片进行了观察。结果表明:阿维菌素对异育银鲫24、48、72 h和96 h LC50分别为0.21、0.14、0.08、0.06 mg/L,安全浓度为0.019 mg/L;对照组鱼无组织病理变化。0.01 mg/L浓度组鱼只在鳃、肝脏和脾脏的部分细胞中出现颗粒变性或空泡变性轻度病理变化。0.04mg/L浓度组鱼出现严重的病理损伤:1)鳃小片尖端膨胀,基部上皮细胞脱落,部分鳃小片发生融合等;2)肾脏中肾小球充血,肾小管透明变性,部分肾小管上皮细胞核溶解消失;3)肝脏中肝细胞空泡变性,细胞核膜破裂、核仁溶解消失,病变严重的肝细胞坏死;4)脾脏中出现网状组织增生和铁血黄素沉淀;5)脑组织中神经细胞空泡变性,部分细胞核移位到边缘。     

大蒜素对鲫非特异免疫指标影响的研究

为评价大蒜素对鲫Carassius auratus非特异性免疫功能的影响,在鲫基础饲料中分别添加250、500mg/kg的大蒜素,并对鲫进行42 d的养殖试验,其中试验的第1²8天饲喂含大蒜素的试验饲料,第2928天饲喂含大蒜素的试验饲料,第29⁴2天饲喂不含大蒜素的基础饲料。结果表明:与投喂基础饲料的对照组相比,添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清补体C3活力(P<0.05),而添加500 mg/kg剂量的大蒜素则能显著抑制鲫血清补体C3、C4活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料后,该剂量组C4活性仍显著低于对照组(P<0.05);添加250、500 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清、肝胰脏、肾脏和脾脏中溶菌酶(LZM)活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料的14 d内,250、500 mg/kg剂量组血清LZM活性及500 mg/kg剂量组肾脏和脾脏LZM活性仍有显著升高(P<0.05);添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高肝胰脏和脾脏中一氧化氮(NO)含量(P<0.05),添加500 mg/kg大蒜素能显著提高血清和脾脏中NO含量(P<0.05),但该剂量显著抑制肝胰脏NO含量(P<0.05),250、500 mg/kg剂量组肾脏中NO含量在第42天时均显著高于对照水平(P<0.05)。研究表明,鲫基础饲料中大蒜素的适宜添加剂量为250 mg/kg。     

大蒜素对鲫非特异免疫指标影响的研究

为评价大蒜素对鲫Carassius auratus非特异性免疫功能的影响,在鲫基础饲料中分别添加250、500mg/kg的大蒜素,并对鲫进行42 d的养殖试验,其中试验的第1~28天饲喂含大蒜素的试验饲料,第29~42天饲喂不含大蒜素的基础饲料。结果表明:与投喂基础饲料的对照组相比,添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清补体C3活力(P<0.05),而添加500 mg/kg剂量的大蒜素则能显著抑制鲫血清补体C3、C4活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料后,该剂量组C4活性仍显著低于对照组(P<0.05);添加250、500 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高鲫血清、肝胰脏、肾脏和脾脏中溶菌酶(LZM)活力(P<0.05),改投不含大蒜素的基础饲料的14 d内,250、500 mg/kg剂量组血清LZM活性及500 mg/kg剂量组肾脏和脾脏LZM活性仍有显著升高(P<0.05);添加250 mg/kg剂量的大蒜素能显著提高肝胰脏和脾脏中一氧化氮(NO)含量(P<0.05),添加500 mg/kg大蒜素能显著提高血清和脾脏中NO含量(P<0.05),但该剂量显著抑制肝胰脏NO含量(P<0.05),250、500 mg/kg剂量组肾脏中NO含量在第42天时均显著高于对照水平(P<0.05)。研究表明,鲫基础饲料中大蒜素的适宜添加剂量为250 mg/kg。     

中国鲫与日本鲫几个群体肌浆蛋白的电泳分析

以中国二倍体和三倍体鲫Carassius(黑龙江流域鲫、九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫、海河流域鲫、金鱼)以及日本二倍体、三倍体鲫为试验材料,应用水平式淀粉凝胶电泳法对其肌浆蛋白进行了检测分析。结果表明:在中国二倍体鲫中共检测出4种类型(BB、BC、CC和BD),其中BB为主要类型,并且4种类型均不同于日本的二倍体鲫;在中国三倍体鲫中也检测出4种类型(BBB、BBC、BCC、ABB),方正银鲫中的两种类型(BBC、BCC)均不同于九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫、于桥水库鲫和日本三倍体鲫,九江彭泽鲫、宁河彭泽鲫以及95.1%的于桥水库鲫为BBB类型,其电泳带组成与谷口顺彦报道的日本银鲫中的Ⅱ-1型相同。     

五氯酚钠在鲫体内的毒性及代谢动力学的研究

在实验室条件下,研究了不同浓度的五氯酚钠溶液(0、1、2、3、4、5、10 mg/L)对鲫Carassiusauratus的毒性作用,并采用药浴的方式研究了五氯酚钠在鲫体内不同时间段的药代谢动力学。结果表明:五氯酚钠对鲫的毒性作用很强,当药物浓度为10 mg/L时,药浴1 h后试验动物100%死亡;当药物浓度为2 mg/L时,试验动物健康存活,药浴96 h无死亡现象;将鲫在2 mg/L的五氯酚钠溶液中浸浴24 h后,药物迅速被鲫吸收,血浆中0.5 h五氯酚钠浓度就能达到11.5 ng/mL,1 h达到峰值12.0 ng/mL,但药物的代谢较慢,给药70 d后才检测不到药物;药物在肌肉中的代谢与血浆中类似,1 h达到峰值(11.84 ng/mL),比血浆中的峰浓度略低,药动学参数t1/2α、t1/2β、MRT0-t、Tmax、Cmax、AUC0-t和MAT分别为12.6 h、186.8h、260.4 h、1 h、11.84 ng/mL、1106.5 ng/(mL.h)、222.5 h。     

β-葡聚糖和乳酸杆菌对鲫协同作用的初步研究

用分别喷有β-葡聚糖、益生菌制剂、β-葡聚糖与益生菌制剂联合以及不添加佐剂的一般饲料分别投喂鲫Carassius auratus,检测各试验组鲫肠道菌群、增重率、饲料系数和成活率。结果表明:与对照组相比,用β-葡聚糖和益生菌制剂联合投喂,鲫肠道中好氧菌总数极显著减少(P<0.01),厌氧菌总数、乳酸杆菌Lactobacillus、双歧杆菌Bifidobact数量显著增加(P<0.05),产气荚膜梭菌Clostridium perfringens数量显著减少(P<0.05);联合制剂中对鲫肠道菌群起调节作用的主要是益生菌,β-葡聚糖能协同益生菌减少鲫肠道的好氧菌,促进益生菌对鲫肠道产气荚膜梭菌的抑制作用;β-葡聚糖和益生菌制剂都能提高鲫对饲料的利用率,促进鲫生长和成活;β-葡聚糖和益生菌制剂联合对鲫的生长和成活的促进作用,比单独使用效果要显著得多。将β-葡聚糖和益生菌制剂配成复合型制剂在水产养殖中具有广阔的应用前景。     

3种底质对水质和红鲫生长的影响

在室内采用淤泥、沙砾和防渗膜3种底质处理的水槽中进行红鲫Carassius auratus养殖,探讨3种底质对水质和鱼类的影响。结果表明,有淤泥的底质对稳定水质作用明显,随着试验时间的延长,其总氨氮指标始终控制在较低的水平,淤泥底质水中红鲫的特定生长率明显高于另外两种底质。统计检验结果表明:淤泥组的总氨氮含量极显著低于防渗膜、沙砾组(P<0.01);防渗膜组的NO2--N含量极显著低于沙砾、淤泥组(P<0.01);淤泥组中的叶绿素a显著高于防渗膜、沙砾组(P<0.05);防渗膜组的生长情况明显慢于沙砾、淤泥组(P<0.01)。