山羊Apaf-3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对单胎藏山羊和多胎金堂黑山羊Apaf-3基因cDNA克隆、序列分析及组织表达特性研究.采集5只多胎金堂黑山羊和5只单胎藏山羊在发情期的卵巢、垂体等组织样,进行Apaf-3基因的cDNA克隆、序列分析,并采用定量PCR技术对其mRNA进行组织表达量研究.结果,克隆出山羊Apaf-3基因长度为1731bp编码区全长为1245bp,编码414个氨基酸.Apaf-3基因在两种山羊中序列相同,且在5种组织中的表达均无差异.同源性分析表明凋亡基因Apaf-3在动物的进化中保守性低,与山羊多羔性状的相关性需要进一步研究.     

不同单元化运输条件对活体虾夷扇贝存活率及主要营养成分的影响

为研究不同单元化运输条件对活体虾夷扇贝Patinopecten yessoensis存活率及其主要营养成分的影响,将净化暂养后的活体虾夷扇贝放入4种不同单元化运输箱中(不加冰聚乙烯保温箱组、加冰聚乙烯保温箱组、低温半导体保温箱组、5℃恒温箱组),测定运输箱内外温度、湿度,以及虾夷扇贝存活率、糖原、粗蛋白质和粗脂肪等指标的变化。结果表明:在密闭的单元化运输条件下,箱内温度及制冷方式影响着活贝的存活率,不加冰聚乙烯保温箱组、加冰聚乙烯保温箱组、低温半导体保温箱组、5℃恒温箱组虾夷扇贝全部死亡的时间分别为48、64、112、104 h;随运输时间的延长,4组虾夷扇贝的糖原、粗蛋白质和粗脂肪含量总体均呈下降趋势,存活期内不同单元化运输条件下的糖原和粗蛋白质含量均呈显著性差异(P<0.05),低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组虾夷扇贝的糖原、粗蛋白质含量随时间的变化缓于其他两组,但64~96 h时,低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组间粗蛋白质含量无显著性差异(P>0.05);存活期内不同单元化运输条件对虾夷扇贝粗脂肪含量的影响不显著(P>0.05),但在0~40 h时其脂肪含量随时间变化显著(P<0.05);低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组虾夷扇贝至糖原、粗蛋白质和粗脂肪含量较低所需时间为96 h,比不加冰组长56 h,比加冰组长48 h。研究表明,使用半导体和压缩机有效制冷的低温条件可使得活体虾夷扇贝糖原、粗蛋白质和粗脂肪消耗减缓,存活期延长。     

虾夷扇贝苗种培育水中可培养细菌群落分析

为研究虾夷扇贝Patinopecten yessoensisis苗种培育过程中幼体发育5个时期苗种培育水中(受精卵期水样W1,担轮幼虫期水样W2,D型幼虫期水样W3,壳顶幼虫期水样W4,稚贝期水样W5)可培养细菌的群落组成,采用传统培养方法,从每个水样分离细菌30株,通过16S rRNA基因测序分析鉴定细菌。结果表明:分离的150株细菌可归为2门、3纲、6目、9科、10属、22种;在门水平,W1~W5的优势门均为变形菌门,其次为厚壁菌门;在属水平,假交替单胞菌属为所有水样第一优势属,此外,W1的优势属依次为交替单胞菌属、弧菌属和海杆菌属,W2的优势属依次为弧菌属、交替单胞菌属和Cobetia,W3的优势属依次为弧菌属、交替单胞菌属和芽孢杆菌属,W4的优势属依次为交替单胞菌属、芽孢杆菌属和弧菌属,W5的优势属依次为弧菌属、Pseudophaeobacter、芽孢杆菌属和赤杆菌属。研究表明,扇贝幼体不同发育时期苗种培育水中所含可培养细菌种类比较丰富,细菌群落结构存在差异。     

藏绵羊KAP3.2基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达的研究

为研究藏绵羊角蛋白相关蛋白(KAP3.2)基因结构与功能,揭示该基因的组织特异性表达规律.以藏绵羊为研究对象,分别提取藏绵羊心、肝、脾、肾及皮肤组织中总RNA,并以此为模板,通过RT-PCR技术对藏绵羊KAP3.2基因的c DNA进行克隆、序列分析;利用Real-time PCR技术进行组织表达研究.结果表明:藏绵羊KAP3.2基因编码区全长297bp,编码98个氨基酸;藏绵羊与普通绵羊、山羊、藏羚羊、草原鼠、家鼠、人的相应核苷酸同源性分别为99%、97%、96%、79%、75%、73%;藏绵羊KAP3.2基因在皮肤中高表达,而在其它组织中相对表达量较低,说明该基因的表达具有组织特异性.     

红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析

为研究红鳍东方鲀Takifugu rubripes的性别决定因子(gonadal soma derived factor,GSDF),利用c DNA末端快速扩增技术(RACE)首次克隆了红鳍东方鲀gsdf基因(Trgsdf)的c DNA全长序列(Gen Bank登陆号:KR914667)。结果表明:Trgsdf c DNA序列全长为1734 bp,其中5'端非编码区144 bp,开放阅读框648 bp,3'端非编码区942 bp,共编码215个氨基酸;预测的氨基酸序列中存在1个长度为19个氨基酸的信号肽和相同长度的跨膜区,1个N-糖基化位点NST,1个TGF-β家族成员特有的保守结构域;BLAST同源性分析结果显示,红鳍东方鲀GSDF氨基酸序列与其他鱼类的相似性为26%~58%;系统发育分析结果显示,鱼类GSDF单独聚为一支,与TGF-β超家族内的其他成员分开,红鳍东方鲀与青鳉Oryzias latipes GSDF的亲缘关系最近,先聚为一支,后与三斑海猪鱼Halichoeres trimaculatus聚在一起,与矛尾鱼Latimeria menadoensis的GSDF亲缘关系最远;应用RT-PCR技术检测Trgsdf mRNA在雌性和雄性红鳍东方鲀成鱼不同组织中的表达,结果显示,Trgsdf mRNA在卵巢和精巢中高表达,在皮肤和肌肉组织中微量表达,在其他组织中无表达;采用相对实时荧光定量PCR方法比较了成鱼卵巢和精巢中Trgsdf mRNA的表达量,结果显示,Trgsdf mRNA在精巢中的表达量显著高于卵巢(P<0.05),约为卵巢表达量的6倍。研究表明,gsdf基因可能在红鳍东方鲀的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。     

山羊ZP3基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

对高繁金堂黑山羊和低繁藏山羊ZP3基因c DNA进行克隆、序列分析,并采用Real-time PCR技术对其在发情前期母羊卵巢组织的表达进行研究.结果表明:山羊ZP3基因编码区全长为1269bp,共编码422个氨基酸,两品种间有2处碱基差异,但未导致氨基酸的差异.山羊的ZP3基因在卵巢表达量高,与其他组织差异极显著(P<0.01),但两个品种间差异不显著(P>0.05).说明ZP3基因主要在卵巢中表达,但可能不是影响山羊多羔性状的主基因.     

山羊INHA和INHBA基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

分别提取处于同一发情周期的5只低繁藏山羊和5只高繁金堂黑山羊的卵巢、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对INHA、INHBA基因cDNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究.结果表明:藏山羊和金堂黑山羊INHA基因编码区均长1083bp,编码360个氨基酸,两品种基因编码区有7处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;INHBA基因编码区均长1278bp,编码425个氨基酸,两品种基因编码区有4处碱基不同,并导致1处氨基酸的差异.藏山羊INHA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.4%、98.9%、95.8%、88.6%、81.0%、79.5%和84.8%;藏山羊INHBA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.7%、99.4%、98.1%、91.7%、88.0%、88.5%和91.2%.INHA和INHBA基因mRNA在两个山羊品种的卵巢、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P>0.05).说明INHA和INHBA基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究.     

甜菜M14品系BvM14-APX、BvM14-DHAR3、BvM14-MDAR基因响应NaCl胁迫的表达分析

甜菜M14品系是在二倍体栽培甜菜染色体组上附加野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有耐盐性、无融合生殖等优良性状,是发掘优质基因资源的良好研究材料。实验室前期已利用i TRAQ串联LC-MS/MS技术获得0、200、400 m M Na Cl胁迫下叶中差异表达蛋白质76个;与利用Hiseq 2000高通量测序技术构建的Na Cl(0、200、400 m M)胁迫下甜菜M14品系转录组数据库相匹配,得到了3条参与抗氧化酶系统的Bv M14-APX、Bv M14-DHAR3及Bv M14-MDAR的Unigenes序列。对3条Unigenes序列进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对0、200、400 m M Na Cl胁迫下叶和根中的3条基因进行组织特异性分析,探究3条基因在叶和根中的表达趋势,并比较了叶中3条基因在转录水平和蛋白水平的表达量变化是否一致,借以评估3条基因对Na Cl胁迫的响应。实时荧光定量PCR结果表明,Bv M14-APX基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调21.56、3.56倍;400 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调51.27、11.47倍。Bv M14-DHAR3基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调14.52、1.83倍;400m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调22.78、5.1倍。Bv M14-MDAR基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调29.04、1.33倍;400 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调59.3、3.81倍。3条基因在响应Na Cl胁迫过程中,叶中的表达量变化均显著于根,同时叶中转录水平与蛋白表达水平的变化具有一致性,说明这3条基因在抗氧化酶系统中起到了重要的作用,这也为进一步探究Bv M14-APX、Bv M14-DHAR3及Bv M14-MDAR基因间互作关系奠定了基础。     

盐胁迫下甜菜M14品系BvM14-ATPaseF、BvM14-ATPaseH、BvM14-PsaD基因的表达分析

甜菜M14品系是由栽培甜菜和野生白花甜菜杂交后获得的带有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合等优良特性。在前期工作中,对盐胁迫下叶片膜蛋白进行了定量蛋白质组学分析,与未处理对照相比,200、400mM盐胁迫下共获得50个差异蛋白质点,选择其中3个蛋白质点为研究对象,与实验室前期相同盐处理下获得的转录组数据库相匹配,获得基因cDNA全长,将此3个基因命名为BvM14-ATPaseF、BvM14-ATPaseH和BvM14-PsaD;进行在线功能预测;设计引物,对盐胁迫(0、200、400 mM)处理下此3个基因进行实时荧光定量分析,了解在盐胁迫下基因转录与蛋白水平上表达量的关系。结果表明,与未处理对照相比,200、400 mM盐浓度处理下BvM14-ATPaseF基因分别上调3.70与4.47倍,BvM14-ATPaseH基因在盐胁迫处理下分别上调0.85与1.36倍,而BvM14-PsaD基因随着盐浓度的增加却下调0.97与2.54倍,表明在盐胁迫下不同基因具有的功能不同,而导致转录水平与蛋白水平的表达量并不完全相同。     

向日葵ACC氧化酶基因(HaACO1)的克隆及表达分析

目的:克隆向日葵中的ACC氧化酶基因(HaACO1),并对其进行生物信息学分析及盐胁迫表达分析,为理解向日葵ACC氧化酶生理功能并加强对ACO基因的利用奠定基础。方法:以前期从盐胁迫的内葵杂4号根中获得的ACC氧化酶基因片段4-4-7TDF(KM823963)为基础,通过RT-PCR和5'/3'RACE技术克隆ACO基因的全长cDNA序列,利用生物信息学软件对获得的cDNA序列及编码的蛋白质序列进行分析。同时采用PCR方法克隆基因组DNA(genemic DNA,gDNA)序列,并对其进行结构分析。利用实时荧光定量PCR分析Na Cl胁迫下向日葵根、下胚轴、叶中HaACO1的表达量和不同NaCl浓度及不同胁迫时间下根中Ha ACO1的表达量。结果:Ha ACO1的cDNA序列全长为1 135bp,其开放阅读框为942bp,编码313个氨基酸。预测其分子质量和等电点分别为35.84k Da和5.13,基因登录号为KP966508。HaACO1与已报道的多种植物的ACO基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列有较高的相似性,分别为76%~83%和77%~88%。gDNA起始密码子至终止密码子序列长1 018bp,包含2个外显子和1个内含子,基因登录号为KP988289。实时荧光定量PCR分析表明向日葵HaACO1在不同器官及不同NaCl浓度、不同时间诱导下存在特异性表达差异。结论:获得的向日葵HaACO1是植物ACO家族成员之一,该基因应答盐胁迫具有独特的表达模式。     

基于Web的集成化产品数据管理方法的研究

对基于浏览器 /服务器 (Browser/Server)结构的信息管理方式进行了研究 ,并提出了基于Web的产品数据管理 (PDM )方法 ,通过引入Web机制 ,实现信息集成与共享 ,以支持先进制造模式。     

大作业观:主要内涵与实践路径

学生课业负担的减轻关键在于将无意义的训练化作业转化为促进学生发展的学习化创作活动。作业超载、异化、窄化,成了“双减”政策的直接指向,需要作业理论的重塑与实践革新的回应。大作业变革须回归“创造性的探究活动”这一作业本义,以大视域、大取向、大设计、大实践与大评价来丰富与拓展其内涵与功能,借由多主体协同互动、课程再设计、学习化课堂的构建、学本评估等来践行大作业观。     

中间球海胆幼体及稚海胆生长性状的遗传参数估计

为估计中间球海胆Strongylocentrotus intermedius幼体及稚海胆生长性状的遗传参数,采用巢式不平衡设计方法建立了44个中间球海胆全同胞家系,并测量了各家系海胆四腕幼体、六腕幼体和八腕幼体等各期浮游幼体的体长以及受精后30 d的稚海胆壳径,采用动物模型和约束性最大似然法(REML)估计了中间球海胆幼体和稚海胆生长性状的遗传参数。结果表明:中间球海胆四腕幼体和八腕幼体体长的遗传力分别为0.705±0.373和0.538±0.444,为高度遗传力,六腕幼体体长和稚海胆壳径的遗传力均接近于0,为低度遗传力;各阶段幼体体长和稚海胆壳径的共同环境效应为0.048~0.352;各阶段幼体体长间遗传相关为正相关(0.300~0.518),各阶段幼体体长与稚海胆壳径间的遗传相关为负相关(-0.152~-0.435)。本研究结果可为制定中间球海胆的早期选择和间接选择选育方案提供参考依据。     

磷酸肌酸钠在病毒性心肌炎患儿中的疗效及对心肌纤维化的影响研究

目的:探究磷酸肌酸钠在病毒性心肌炎患儿中的疗效及对心肌纤维化的影响。方法:选取2018年1月-2020年9月佳木斯市妇幼保健院80例病毒性心肌炎患儿为研究对象,依据随机数字表法分为对照组和观察组,每组40例。对照组采用常规抗病毒治疗,观察组在常规治疗的基础上加用磷酸肌酸钠。统计与比较两组的临床总有效率、不良反应发生率、治疗前后的心肌损伤相关指标及心肌纤维化指标。结果:治疗1、2周后,观察组的临床总有效率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前,两组的心肌损伤相关指标及心肌纤维化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗1、2周后,观察组的心肌损伤相关指标及心肌纤维化指标均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:磷酸肌酸钠在病毒性心肌炎患儿中的疗效较好,且可显著改善患儿的心肌纤维化情况,在病毒性心肌炎患儿中的应用价值较高。     

北极礁膜室内人工育苗的研究

于2004年对大连地区北极礁膜M onostroma arcticum的生物学进行了初步研究,并在室内进行了合子采苗、孢子体培养和孢子采苗及幼苗培养等人工育苗试验。结果表明:水温为3℃时,北极礁膜的叶片长度达到16 cm;水温为5℃时,配子放散量达到2.4×108个/g;孢子体在水温低于19℃时生长较快,水温超过22℃时生长几乎停止。孢子体在度过夏季高温期后,当水温降至20℃以下时,开始形成孢子囊;当水温降至15℃时,孢子放散量达到6.1×105个/cm2;孢子附着到苗绳上后经过50 d的室内培养,培育出长度为1 cm的北极礁膜幼苗。     

雌二醇对中间球海胆生长、性腺发育及胆固醇代谢的影响

为探讨雌二醇(estradiol)对体质量为(13.58±0.79)g的中间球海胆Strongylocentrotus intermedius性腺发育的调控机制,在室内水槽(200 L)中进行为期60 d的注射试验。试验分对照组、雌二醇(5μg/m L)注射组和他莫昔芬(tamoxifen)(25μg/m L)注射组,每3 d注射1次,并于第30天和第60天时两次取样测定海胆增重率(WGR)、性腺指数(GSI)、性类固醇激素含量和胆固醇合成相关基因的表达量。结果表明:注射雌二醇或他莫昔芬并未显著影响海胆的生长速率,却显著影响试验末期海胆的性腺指数,雌二醇组海胆性腺指数显著高于对照组和他莫昔芬组(P<0.05);试验结束时,雌二醇组和他莫昔芬组海胆体腔液中雌二醇含量和性腺中胆固醇含量均显著高于对照组(P<0.05),雌二醇组海胆性腺中雌二醇含量最高,显著高于对照组和他莫昔芬组(P<0.05);雌二醇组海胆性腺和消化道中主要卵黄蛋白(MYP)基因均高于对照组,但均未有显著性差异(P>0.05);雌二醇组和他莫昔芬组海胆性腺和消化道中性类固醇激素合成关键基因CYP17和胆固醇合成关键基因CYP51表达量均显著高于对照组(P<0.05);他莫昔芬组海胆性腺中CYP17和CYP51基因表达量均低于雌二醇组(P>0.05)。研究表明,注射雌二醇显著提高了中间球海胆性腺指数、体内雌二醇含量和雌二醇合成相关基因的表达量,这可能是雌二醇促进海胆性腺发育的调控机制。     

地理问题式教学设计水平评价指标体系构建与例评检验

问题式教学是符合认知规律的教学形式,重视地理问题式教学将有助于地理教学的转型和变革。通过梳理问题式教学的概念,经理论推演提出基于明暗线索的问题式教学设计思路,筛选评价问题式教学设计水平的情境设计和问题设计两个一级指标,下属13个二级指标;制定各二级指标的五级评价标准,对六个设计案例进行试评,依据数据的一致性检验结果和专家咨询,完善评价标准;依据指标重要性的专家咨询结果,确定各指标的权重。最终形成一套包括指标、标准和权重的地理问题式教学设计水平评价指标体系,所列案例提供了指标不同评价等级的设计样例,可为教师开展地理问题式教学提供参考。     

神经内镜经鼻蝶入路手术治疗功能性垂体瘤的效果及对应激反应的影响

目的:探讨神经内镜经鼻蝶入路手术治疗功能性垂体瘤的效果及对应激反应的影响。方法:选择2016年1月-2021年1月大连市中心医院收治的功能性垂体瘤患者80例。根据治疗方式不同分为两组,接受神经内镜治疗的42例为A组,接受显微镜手术治疗的38例为B组。比较两组手术和住院情况,包括手术时间、术后住院时间及肿瘤全切除率;分别于术前及术后1 d检测两组血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肾上腺素(E)及去甲肾上腺素(NE)水平以评价患者应激反应情况;比较两组不同垂体瘤类型激素改善率;术后随访6个月,比较两组并发症及复发情况。结果:A组手术时间及术后住院时间均短于B组(P<0.05),两组肿瘤全切率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组术后1 d AngⅡ、E、NE均较术前升高,且A组均低于B组(P<0.05)。两组不同垂体瘤类型激素改善率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组均无死亡及垂体功能低下发生,两组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组随访期间无复发患者,B组1例(2.63%)复发,两组复发率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与显微镜手术相比,神经内镜经鼻蝶入路手术治疗功能性垂体瘤手术时间及住院时间均较短,应激反应较轻,而在改善激素分泌及安全性方面相似。     

模拟海底水流和光照条件下光棘球海胆行为特征及其聚礁效果的初步研究

为观察光棘球海胆Strongylocentrotus nudus在饱食、饥饿和饥饿再投喂状态下的行为特征,及其对水泥、PVC两种材质模型礁的聚集特性,在实验室中模拟光棘球海胆栖息海域底层的昼夜水流速度和光照强度进行试验。结果表明:当光照强度达到560 lx、水流速度达到20 cm/s(9:00)时,均匀分布的光棘球海胆有90%向模型礁附近区域移动;当光照强度和水流速度下降时,光棘球海胆向模型礁附近区域外移动;运动趋势明显的光棘球海胆在饱食、饥饿和饥饿再投喂3种状态下的平均移动速度分别为0.039、0.041、0.052 cm/s,3种状态下光棘球海胆顺、逆水流运动次数的比值依次为饥饿状态(1.63)>饱食状态(1.18)>饥饿再投喂状态(0.73),饥饿再投喂状态下光棘球海胆的活跃程度高于饱食和饥饿状态;鱼礁材质也影响光棘球海胆的聚集行为,光棘球海胆在饱食、饥饿和饥饿再投喂状态下对水泥模型礁的平均聚集率分别为25%、17%、24%,对PVC模型礁的平均聚集率分别为16%、7%、12%,光棘球海胆对两种模型礁的聚集效果均为饱食状态>饥饿再投喂状态>饥饿状态。研究表明,光棘球海胆在饱食和饥饿再投喂状态下对两种模型礁的聚集效果较好,而水泥材质的模型礁比PVC材质的模型礁聚集效果更好。     

牦牛Caspase-3克隆、序列分析与组织表达研究

半胱天冬酶3(Aspartate-specific cysteinyl proteinase 3,Caspase-3)是哺乳动物最重要的细胞凋亡执行者,为探究Caspase-3基因在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础,试验对牦牛Caspase-3编码区进行克隆和生物信息学分析,并比较牦牛和黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫等组织的表达差异.结果表明:牦牛Caspase-3基因编码区全长834 bp,编码277个氨基酸,与黄牛Caspase-3基因相比同源性最高(99. 52%)且遗传距离最近,发生4个碱基突变;与鸡同源性最低(71. 32%)且遗传距离最远,保守且符合动物进化进程.q PCR结果显示Caspase-3在牦牛生殖轴中的表达量均高于黄牛,其中,在下丘脑、输卵管中达到P <0. 01水平,在子宫中达到P <0. 05水平.推测极端环境应激引起Caspase-3基因的高表达可能影响母牦牛的繁殖性能.