哈维氏弧菌溶血素的包涵体纯化、多抗制备及活性验证

为进一步研究哈维氏弧菌溶血素(Vibrio harveyi hemolysin, VHH)的生物学功能,构建了vhh原核表达载体,并利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用DOT-ELISA和Western-blot方法检测抗体的效价及特异性,并通过溶血试验评估抗体对哈维氏弧菌培养物上清溶血活性的影响。结果表明:在构建得到的表达菌株pET28a-vhh-BL21(DE3)中,重组蛋白以包涵体形式大量表达;对该重组蛋白进行纯化并复性后,利用纯化的蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体效价为1∶163 840,可特异性识别VHH蛋白,且稀释倍数小于1000时,可显著抑制哈维氏弧菌培养物上清的溶血活性。本研究结果对VHH单抗的制备、哈维氏弧菌检测手段的完善及哈维氏弧菌的疫苗研发具有一定参考作用。     

鸡抗迟缓爱德华氏菌卵黄抗体的应用研究

从全身出血合并腹水的养殖大菱鲆Scophthalmus maximus体内分离出1株细菌,经感染试验证实其病原性,并鉴定该菌为迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda。采用该菌制成全菌油乳性灭活疫苗,分4次给蛋鸡进行免疫注射,第2次加强免疫后开始收集鸡蛋,制备卵黄抗体(IgY)和其水溶性组分(W SF),并用试管凝集法测定其效价。取效价达到1∶64的鸡蛋提取卵黄抗体,分别采用口服和腹腔注射两种方式给大菱鲆进行免疫:配成含W SF 1 mL/g的饵料,给鱼连续投喂15 d;用含蛋白含量0.19 mg/mL的纯化IgY,于第1、3、14 d对大菱鲆进行腹腔注射,剂量为0.1 mL尾/。免疫后分别用注射和划伤浸泡两种方法攻毒。结果表明,口服特异性卵黄抗体对大菱鲆的免疫保护率分别为83.3%和100%,而注射免疫没有保护作用。     

鱼用三联口服疫苗的制备方法及其对大菱鲆的免疫效果

为探究海水养殖中安全可靠、经济适用的疫苗接种方法,以药用淀粉、麦芽糊精,以及经0.5%甲醛灭活的溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、副溶血弧菌V.parahemolyticus和迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda为主要原料,采用挤出-滚圆法制备鱼用三联口服疫苗,并用其对大菱鲆Scophthalmus maximus免疫,分别在免疫0、7、14、21、28 d时测定溶藻弧菌、副溶血性弧菌和迟缓爱德华氏菌特异性抗体,以1×109cfu/m L活菌(3种菌液比例为1∶1∶1)进行攻毒试验并计算免疫保护率。结果表明,药用淀粉150 g、麦芽糊精50g、菌液60 m L、挤出速度200 r/min、滚圆时间60 s时,为比较成熟的三联口服疫苗制备工艺,用该疫苗免疫大菱鲆后,3种细菌的大菱鲆血清和后肠黏膜抗体效价均显著高于对照组,且免疫保护率达50%以上。     

鱼用三联口服疫苗的制备方法及其对大菱鲆的免疫效果

为探究海水养殖中安全可靠、经济适用的疫苗接种方法,以药用淀粉、麦芽糊精,以及经0.5%甲醛灭活的溶藻弧菌Vibrio alginolyticus、副溶血弧菌V.parahemolyticus和迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda为主要原料,采用挤出-滚圆法制备鱼用三联口服疫苗,并用其对大菱鲆Scophthalmus maximus免疫,分别在免疫0、7、14、21、28 d时测定溶藻弧菌、副溶血性弧菌和迟缓爱德华氏菌特异性抗体,以1×109cfu/m L活菌(3种菌液比例为1∶1∶1)进行攻毒试验并计算免疫保护率。结果表明,药用淀粉150 g、麦芽糊精50g、菌液60 m L、挤出速度200 r/min、滚圆时间60 s时,为比较成熟的三联口服疫苗制备工艺,用该疫苗免疫大菱鲆后,3种细菌的大菱鲆血清和后肠黏膜抗体效价均显著高于对照组,且免疫保护率达50%以上。     

太平洋鳕抗冻基因AFP4的原核表达及多克隆抗体的制备

为进一步研究太平洋鳕Gadus macrocephalus抗冻蛋白AFP4的功能,通过RT-PCR方法克隆得到太平洋鳕4型抗冻蛋白基因(AFP4)的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建原核表达载体并优化表达条件,利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测抗体的效价,用Western-blot法分析重组蛋白的免疫原性。结果表明:AFP4基因编码区长度为375 bp,编码125个氨基酸;将AFP4基因的ORF与载体p ET-32a连接,构建重组体p ET-32a-AFP4,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中;经诱导、表达和条件优化,发现该重组体在37℃、0.01 mmol/L IPTG条件下诱导3 h获得最大的表达量;对该重组蛋白进行纯化,利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测该抗体效价为1∶1 600 000;Western blot分析显示,重组蛋白可以与兔抗AFP4多克隆抗体发生特异性结合,表明该重组蛋白具有免疫原性。本研究结果可为深入研究太平洋鳕AFP4蛋白功能提供理论依据。     

太平洋鳕抗冻基因AFP4的原核表达及多克隆抗体的制备

为进一步研究太平洋鳕Gadus macrocephalus抗冻蛋白AFP4的功能,通过RT-PCR方法克隆得到太平洋鳕4型抗冻蛋白基因(AFP4)的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建原核表达载体并优化表达条件,利用纯化的重组蛋白制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测抗体的效价,用Western-blot法分析重组蛋白的免疫原性。结果表明:AFP4基因编码区长度为375 bp,编码125个氨基酸;将AFP4基因的ORF与载体p ET-32a连接,构建重组体p ET-32a-AFP4,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中;经诱导、表达和条件优化,发现该重组体在37℃、0.01 mmol/L IPTG条件下诱导3 h获得最大的表达量;对该重组蛋白进行纯化,利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测该抗体效价为1∶1 600 000;Western blot分析显示,重组蛋白可以与兔抗AFP4多克隆抗体发生特异性结合,表明该重组蛋白具有免疫原性。本研究结果可为深入研究太平洋鳕AFP4蛋白功能提供理论依据。     

黄海希瓦氏菌多克隆抗体部分特性的分析

采用免疫学方法,以仿刺参Apostichopus japonicus"化皮病"病原菌——黄海希瓦氏菌Shewanella marisflavi AP629福尔马林灭活疫苗作为免疫原,对新西兰大白兔进行免疫,制备了高效价的多克隆抗体。通过间接酶联免疫、间接免疫荧光和免疫印迹等技术对多克隆抗体的部分特性进行了分析。结果表明:获得的多克隆抗体的效价为1∶32768;多抗与黄海希瓦氏菌标准菌株存在很强的阳性反应,与弧菌和气单胞菌、链球菌和大肠杆菌交叉反应很弱或不存在交叉反应;多抗不仅与菌体本身反应,与菌株表面的分泌物也发生特异性结合。免疫印迹结果显示,多克隆抗体与黄海希瓦氏菌AP629结合的抗原决定簇主要蛋白带有6条,相对分子质量分别为131 000、128 000、113 000、62 000、38 000和33 000,其中38 000和33 000蛋白条带的抗原性最强;与胞外产物结合的抗原决定簇清楚的蛋白条带主要有3条,相对分子质量分别为62 000、38 000和33 000,其中62 000蛋白条带的信号最强。     

基于密码子优化策略的无乳链球菌表面蛋白LrrG的原核表达、纯化及免疫原性

为高效获得可溶性无乳链球菌表面蛋白(LrrG),通过密码子优化及构建LrrG基因优化后的pCzn1-LrrG重组表达载体,并转染至BL21(Plys)感受态细胞中,高效表达了无乳链球菌Streptococcus agalactiae(GBS)富含亮氨酸重复序列蛋白(LrrG)。根据大肠杆菌密码子偏好性,优化并人工合成LrrG全基因序列,经双酶切后插入至表达载体,将优化后的重组质粒pCzn1-LrrG转染至感受态细胞进行原核表达,经裂解和纯化后获得上清重组蛋白LrrG。结果表明:PCR扩增得到2 286 bp的优化LrrG基因片段,构建的重组质粒pCzn1-LrrG经双酶切获得约4 400 bp和2 286 bp两条片段,与预期值相符;重组载体的测序结果与优化后的基因碱基序列比对结果完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,获得了相对分子质量约为108 000的LrrG重组蛋白,与理论值相符,且优化后LrrG重组蛋白具有GBS抗原反应原性;通过亲和层析纯化LrrG上清蛋白后,发现优化后可溶性LrrG蛋白表达量较优化前提高了2.2～3.8倍;利用优化后的LrrG蛋白免疫罗非鱼后,发现其对罗非鱼抗GBS感染具有61.54%～69.23%的相对免疫保护率。研究表明,按照大肠杆菌密码子优化GBS表面蛋白LrrG,可有效提高其在大肠杆菌中的表达量,且优化后的LrrG重组蛋白仍然具有较好的免疫原性,本研究结果为基于LrrG基因工程疫苗的制备和应用提供了科学参考。     

哈维氏弧菌灭活疫苗在养殖大黄鱼中的应用与评价

将分离自大黄鱼Pseudosciaena crocea的病原菌GYC1108-1,在体积分数为0.5%的福尔马林溶液中灭活24 h,制成灭活全菌苗(细菌含量为6×109cfu/mL);用该灭活菌苗分别免疫小白鼠和大黄鱼,并检测小白鼠和大黄鱼血清中抗体效价及疫苗对鱼体的免疫保护力。结果表明:小白鼠经注射疫苗后28 d,血清中抗体效价最高达1∶4 000,大黄鱼经注射和浸泡免疫后,血清中最高抗体效价分别为1∶1 280和1∶320,免疫保护率分别为75%和65%;抗GYC1108-1的抗体与不同种属细菌间存在着交叉反应,其分类地位越近,交叉反应也越大;用研制的疫苗开展大黄鱼生产性免疫预防试验,受免疫组鱼存活率有较大提高,分别为85%和86%,而未免疫组鱼存活率仅有70%,表明疫苗可有效防治养殖大黄鱼细菌性病害。     

鱼肠道弧菌单克隆抗体的制备及应用

以鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri为抗原免疫小鼠,用PEG法将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,分别采用酶联免疫吸附(ELISA)技术和间接免疫荧光抗体(EFAT)技术筛选强阳性杂交瘤细胞株,亚克隆阳性细胞株,获得5株抗鱼肠道弧菌单克隆抗体(1C6、1D8、2D7、2D10、2E3)。Western blotting分析结果显示,单抗2D10与相对分子质量为44 200、36 700的鱼肠道弧菌蛋白发生特异性结合;用流式细胞术(FCM)检测单抗强度,结果显示阳性荧光比例为13.63%,阴性对照荧光比例不足1%;人工感染牙鲆试验结果表明,运用该单抗能够建立鱼肠道弧菌的快速诊断方法。     

污泥制砖存在问题浅析

污泥制砖符合国家的环保政策,但在技术方面还待进一步创新和突破。为此分析了污泥制砖在技术方面、环保方面和社会大众认可方面存在问题及相应的改进措施。     

干旱区绿洲环境下的新疆小城镇建设投资

一、研究区域基本现状新疆地处欧亚大陆腹地,地貌轮廓表现为“三山夹两盆”,山地与平原的面积大致各占50%,镶嵌于戈壁沙漠的绿洲仅有7万平方公里。新疆土地面积166.49万平方公里,占全国总面积的六分之一。气候干旱,荒漠广布,是中国最大的干旱区,是亚洲干旱核心区,也是世界上著名的干旱区之一。水资源短缺,生态极度脆弱。新疆2004年底有1950万人,人均GDP已经超过了1000美元,城镇化进入了快速发展阶段,特别是小城镇的发展速度较快。但新疆特殊的干旱区绿洲环境,使得小城镇的发展存在许多问题。一是城镇规模小而散,基础设施配套差,城镇集散和…     

Levels of manganese in the urine of female farmers in non-polluted regions in Japan

Nearly 1500 urine samples were collected from female farmers in eight regions widely scattered in the islands of Japan in the winter of 1987-1988. The samples were analysed for manganese by wet ashing and flameless atomic absorption spectrophotometry under strict quality control. The values observed after adjustment for a specific gravity of 1.016 were distributed log-normally with a geometric mean of 0.65 microgram/l and a geometric standard deviation of 2.47. There was no effect of aging or any effect of smoking on the urinary manganese concentration. The inter-regional difference may be present but not yet conclusive. As no sex difference was observed in a previous study, it may be possible to deduce that the value may possibly stand for the "background" level of both men and women, either smoking or non-smoking, among the general Japanese population. The observed value is discussed in comparison with values reported in the literature.     

Typification of Fires in Buildings in Spain

Although the Dirección de General de Protección Civil (DGPC), an agency of the Spanish government, has been responsible for the collection of data and the statistical analysis of fires since 1985, it has not as yet issued any reports. It is true that a couple of studies have been made, but in neither case did they use a standardized methodology but relied simply on the heterogeneous information provided by the fire brigades which cooperated in the studies. At that time Spanish fire brigades did not have special units for professional fire investigation, nor was the information derived from standardized methodologies suited to research purposes. In addition, information was extremely scarce and basic, focussed only on the fire, the use of the building and personal data of the victims. In this context, the project for a Fire Investigation Unit in the Fire Brigade of Málaga (the sixth largest Spanish province in inhabitants) was set up. Although inspired in the methodologies used in the USA and in the UK, the aim was to create a customized methodology for the first scientific investigation of fires in Spain. Our research was conducted in 2007. Using the methodologies of the USA and the UK, our own methodological approach and the Spanish regulations, we drew up a questionnaire with 110 variables arranged into 6 modules. We studied 96 fires out of the 154 emergency fire calls received in 2007, having omitted some emergency calls for various reasons. Our results revealed that it was necessary to generalize the installation of fire extinguishers in residential buildings, to train the general public in the use of these devices, to promote the use of fire and smoke detectors in residential buildings, to encourage the inspection and control of old electric installations and to monitor the new installations, to generalize the implementation of emergency and evacuation plans and to design new systems and materials for the cabinets where hand-held extinguishers are stored.     

分光光度法测水中余氯

介绍了用双硫腙分光光度法测定水中余氯的新方法，阐述了其测定试验过程，根据试验结果显示，其结论符合国家标准，表明该方法可用于自来水等样品中余氯含量的测定，结果比较准确。     

Intersections of inequality in homeownership in Sweden

Abstract

Inequalities relating to ownership of housing have become a major issue de jour in many Western societies. This article examines how the distribution of homeownership in Sweden relates to two factors widely seen as significant to such inequalities, namely parental tenure status and place of birth. We use longitudinal registry data to examine the bearing of these two factors on individual-level tenure progression since the beginning of the 1990s for persons at different stages of their housing careers. We extend existing understandings of Swedish homeownership patterns by demonstrating that inequalities relating to place of birth and parental tenure intersect with one another in ways that substantially advantage certain subgroups while disadvantaging others, and by demonstrating that experiences of entry into homeownership have in recent years been changing in markedly different ways for these different subgroups. Overall, Swedish homeownership inequalities, far from dissipating, appear to be hardening along existing lines.     

莳花在城市绿化中的应用

目的:花化、香化、彩化已成为城市园林绿化的主要趋势,也是为满足人们对环境要求越来越高的一种心境。方法:选择采用莳花能表现出品种繁多,色彩艳丽等不同的方式,从而能在很大程度上丰富了植物造景的层次感要求。结果:能使其达到美化环境、增添节日气氛、提高绿化品质等方面有着突出的作用。结论:莳花造景对城市的美化可达到立杆见影效果,从而提高城市的形象和品位。     

日本城市浅层地下空间利用的新成就

本文结合日本川崎市站前广场和神户市哈巴兰德地区的立体化再开发，分析介绍当前日本浅层地下空间开发利用的成就和特点。     

遗传算法在边坡稳定系数计算中的应用

边坡稳定性的关键问题是确定最危险滑动面(潜在最危险滑动面)和边坡的稳定系数。国内外一般是采用先假定边坡滑移模式,然后近似确定最危险滑动面,再求近似的边坡稳定系数的方法来分析边坡的稳定性,但假设的边坡滑移模式难以反映边坡滑移的实际状态。因此本文探索利用遗传算法搜索最危险滑动面,并得到最小稳定系数及对应的最危险滑动面曲线,取得了较好的效果。     

地质情况复杂地区高速公路隧道地质预报研究

针对地质情况复杂地区垫邻高速公路设计、施工中的具体问题，从地质预报的方法、原理方面入手，对地质情况复杂地区高速公路隧道施工中的地质超前预报工作进行了深入的研究，在分析归纳的基础上，提出合适的工作方法。