哺乳动物精子体外诱导的研究进展

研究雄性哺乳动物生殖细胞的增殖、分化、成熟机制以及对以上过程造成影响的诸多因素,为雄性不育症的治疗提供理论依据和潜在的治疗方法,研究人员不断尝试将各种种子细胞诱导为精子。体外诱导精子的实验由于具有可进行连续观察、排除了受体动物的个体差异影响、便于设计单因素实验等优点,近年来取得了许多突破性进展,精原干细胞(spermatagonial stem cell,SSC)、胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)、间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)等都在体外被成功诱导为精子。就目前的哺乳动物精子体外诱导进展做一综述。     

刺参精子冷冻保存方法研究

为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl_2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1～Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl_2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1 178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2 817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×10⁶∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。     

刺参精子冷冻保存方法研究

为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl_2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1～Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl_2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1 178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2 817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×10~6∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。     

临床级干细胞库的建设与管理

近年来,干细胞在疾病治疗、组织修复、抗衰美容等多个领域均展现出极大的发展潜力与广阔的临床应用前景,已成为生命科学的重要研究方向之一,受到全球范围的广泛关注。优质的临床级干细胞库既是干细胞产品进入临床的前提条件,也是干细胞行业成功的关键要素,必将为干细胞临床研究提供不可或缺的资源。本文结合我国国情和同济大学附属东方医院在临床级干细胞库建设与管理方面的实践与探索经验,重点阐述临床级干细胞库的规划、建设与全流程链管理,涵盖采集、制备、检验、冷冻保存、分发、质量管理体系的建立以及干细胞生命周期信息追踪与数据管理等,以供同行借鉴。     

利用piggyBac转座子制备牛成体多能干细胞诱导技术研究

通过逆转录病毒等媒介表达核转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc可将体细胞重编程为诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSc)。时至今日,已经报道了小鼠、人、大鼠、猪、羊、马、牛的iPS细胞,但大动物iPS的多能性特别是嵌合体形成和生殖细胞传代还没有得到确认。与逆转录病毒等不同的是,piggyBac转座子转染效率高且无病毒源性、操作简单,可以在转座酶的存在下被安全切除。首次尝试了采用piggyBac转座子携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Rarg和Lrh1 6个核转录因子诱导胎牛成纤维细胞,成功获得牛类iPS细胞,其形态与小鼠胚胎干细胞相似,克隆边界清晰、呈丘状、克隆内细胞致密、核大。RT-PCR与免疫组织化学染色分析均显示牛类iPS细胞表达多能性基因。该类细胞体外诱导分化可形成类胚体EB,且表达3个胚层的基因;体内诱导分化可形成畸胎瘤,苏木精、伊红染色显示瘤体有三胚层的分化。上述结果显示利用piggyBac转座子制备牛多潜能干细胞诱导技术可行,产生的牛类iPS细胞具有潜在多能性。     

原癌基因A-myb对大鼠精原干细胞活性的影响

目的研究原癌基因A-myb在体外培养的9日龄大鼠精原干细胞活性中的作用。方法用不连续密度的Percoll液结合差速贴壁方法分离和纯化精原干细胞;用RT-PCR检测A-myb mRNA的表达;用Western blot检测A-myb表达产物A-myb的表达;用MTT比色法观察反义A-myb脱氧寡核苷酸（oligodeoxynucleotides,ODNs）对精原干细胞作用的量效及时效关系。结果分离提取的细胞基本上为精原干细胞。与空白对照组相比,10μmol.L-1反义A-myb ODNs作用48h后精原干细胞内A-myb mRNA表达下降了47.8%（P〈0.05）,A-myb蛋白下降了51.7%（P〈0.05）。5、10、20μmol.L-1反义A-myb ODNs组与0μmol.L-1组在作用细胞48h后相比,精原干细胞的活性分别下降11.8%（P〈0.05）、50.1%（P〈0.01）、53.8%（P〈0.01）。与空白对照组相比,10μmol.L-1反义A-myb ODNs组作用12、24、48、72h后精原干细胞活性分别下降18.8%（P〈0.05）、30.0%（P〈0.01）、38.6%（P〈0.01）、41.0%（P〈0.01）,而正义A-myb ODNs组和空白对照组相比无明显差异。结论原癌基因A-myb可调节大鼠精原干细胞的活性。     

浅谈糖尿病足的现代治疗

干细胞移植技术近年已应用到医学领域,所用干细胞有胚胎干细胞和成体干细胞两类。成体干细胞是指存在于体内多种分化成熟组织内,具有一定自我更新及分化潜能的幼稚细胞。造血干细胞,神经干细胞,肝脏肝细胞等,已应用于我国临床领域,对于糖尿病足的治疗,成体干细胞主要起血管再生作用,即在缺血肢体局部参与代偿性血管重建。对改善糖尿病足的预后具有重要意义。     

脂肪干细胞的研究进展

脂肪干细胞是成体间充质干细胞的一种,具有多向分化的潜能、取材容易、来源广泛适宜自体移植等优点,是继骨髓间充质干细胞之后的又一再生医学种子细胞的来源,成为国内外研究的热点。本文综述了脂肪干细胞的生物学特性与临床应用前景。     

MAPK信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用

骨髓间充质干细胞具有较强的自我更新及分化能力,在骨骼的生长发育与骨代谢方面具有较高的研究价值,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号通路是介导骨髓间充质干细胞分化的一条重要通路。本文通过查阅国内外大量文献,详细介绍MAPKs信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究现状,着重从MAPK 3条主要信号通路——P38 MAPK、JNK MAPK和ERK MAPK进行详细分析和总结,为相关基础研究提供一定借鉴。     

小分子化合物诱导干细胞分化为胰岛素产生细胞的研究进展

糖尿病的治疗主要围绕传统的口服降糖药和胰岛素替代治疗。人类和动物的起源干细胞在体外被分化为胰岛素产生细胞（IPCs）成为研究热点，并显示出体内降糖作用，可能是β细胞代替治疗的一个潜在新来源。而成功诱导有功能β-胰岛样的IPCs的因素包括：慎重选择干细胞、诱导方法、小分子物质的选择。同样重要的是，分化的机制和IPCs降血糖机制及IPCs应用到临床的前期研究。文章简要介绍了IPC的来源，重点阐述产生IPCs诱导因子及体外去分化潜在的问题和实用价值。     

浅析高速公路工程招投标中的最低评标价法

结合目前高速公路施工项目招投标活动的实际情况,阐述了最低评标价法的概念,归纳了其优点及存在问题,对完善最低评标价法提出几点策略,以期促进招标投标市场更加规范有序。     

Place-Making in Megaprojects in Melbourne

This article analyses state-led place-making practices in Melbourne. The two levels of government that influence planning in Melbourne make much of the city as ‘culturally vibrant’ and ‘creative’, and have incorporated creative city-inspired place-making principles into many layers of the planning system. An examination of the development of two mixed-use megaprojects in central Melbourne reveals however that ideals of culturally engaging public places, and indeed of creative landscapes for middle-class consumption, wither in the face of more basic imperatives for economic development. In these case studies the ‘creative city’, no matter how the idea is interpreted, has little traction either as a set of inclusive place-making principles or as a gentrification strategy. The article concludes that the creative city-inspired place-making objectives in the planning system at both state and local levels are ambiguous in their overall intents and completely unsupported by statutory controls. Such place-making objectives as are realised are the compromised results of the interplay of uncoordinated decisions, delivered at the pleasure of the developer.     

Pathogens in septage in Vietnam

Septage is widely acknowledged as a major source of infectious pathogens while disposal of septage, and the operation and maintenance of septic tanks, is not regulated in many developing countries. Twenty untreated septage and septage sludge samples were taken from Can Tho City, Vietnam to examine their pathogen content, and indicator micro-organisms. Escherichia coli and Enterococcus spp. were detected in all samples, regardless of sludge storage time. Phages were detected in 80% of samples. Salmonella spp. were detected in 70% of the untreated septage and 60% of septage sludge samples. Concentrations of phages and bacteria tested in septage sludge after many years of tank storage were much higher than the expected levels. Helminth ova were present in 95% of untreated septage samples with an average of 450 ova l^− 1, and were detected in all septage sludge samples with an average of 16,000 ova l^− 1. Twelve varieties of helminth ova were identified. More helminth ova varieties in higher concentrations were found in septage than those reported from stool samples. The varieties' frequency ranged from 10% to 50% and Ascaris lumbricoides predominated. Results show that pathogens and indicator micro-organisms, especially helminth ova, accumulate in sludge. Thus helminth ova should be considered when septage sludge is treated and used for agriculture. Proper health protection measures must be applied for people handling septage.     

在市场中实践在实践中学习在学习中进步--工程公司市场化进程的回顾与展望

近两年来，工程公司在提高市场竞争意识、推动市场化进程中做了大量工作，其中坚持走出去的方针是我们自我加压、推行加快市场化步伐的一个重要战略步骤。     

新时期广东城市化的新特点

新时期广东城市化出现以下特点:知识源导向、城市由单体向群体化发展、产业集群推动、政府主导自上而下的集约化发展、城镇化向城市化转变、由重“数量”发展向重“质量”发展的转变。     

新形势下高校强化基建财务管理的探讨

在市场条件下高校基建财务人员在加强日常财务管理的同时,必须树立起高度的工作责任心,抓好事前监督、事中监督、事后监督三个环节,全面理解、贯彻执行《高等学校财务制度》,管好用好各项基本建设资金,提高基建财务管理水平,更好地完成高校各项基建任务,以有限的投资,最快的建设速度,获得最大的投资效益。     

2005年北京办公物业市场七大趋势

趋势一:CBD区域写字楼集中放量从各区域规划方案上看,CBD区域多数项目在03～04年处于项目的报批手续及拆阶段,预计2005年正式推向市场,因此2005年CBD区域将成为北京市场供应集中的域,区域即将供应的项目有北京财富中心(二期)、金地国际花园、万达广场、SOHO尚都、万通中心、世纪财富中心、怡禾国际中心、光华国际等。除去未知项目,2005CBD写字楼办公面积的供应量为60万平方米左右。中关村区域经过一段时间的集中供后开始逐步放缓,2005年供应的体量相对较大的项目有中关村金融中心、新中关。金街区域可能开盘的项目只有2个:英蓝国际中…     

浅谈我国工程项目建设成本控制存在的问题

结合目前我国施工企业工程项目成本管理现状,对工程项目成本管理过程中存在的问题进行了较详细的分析,并提出了一些解决问题的办法,以做好项目成本控制工作,进而增强企业经济实力。     

Variation in property taxation in Tulsa

Conclusions It may be reasonably concluded from this study that the range of variation in these ratios of assessed to actual value are of a reasonable size for the great majority of cases. The frequency distribution of these sample ratios was not normal, however, as was assumed a process of this type would produce. On the other hand, the failure of the regression analysis to identify any significant variables which would explain these variations would tend to re-enforce the assumption that the fluctuations were indeed of a random nature.To sum it up in one paragraph, aside from a few extreme cases, the assessing process appears to give estimates which are more consistent than would be expected under the assumption that any errors would be of a random nature, but the regression analysis was unable to isolate any particular socioeconomic characteristics which would explain the variation which was present.Financial support for this research project was furnished by the University of Tulsa.