许氏平鲉精子超微结构及超低温冷冻对其形态的影响

为进一步探索卵胎生许氏平鲉Sebastes schlegelii繁殖生物学特性,探究超低温冷冻技术对精子形态结构的影响,对许氏平鲉(体质量500～750 g)鲜精和超低温冷冻后精子的超微结构进行了研究。结果表明:经扫描、透射电镜观察,发现精子在变态过程中细胞核纵向增长,细胞质浓缩,成熟精子头部呈叶片状,无顶体;线粒体多向尾部基部集中,为精子运动供能,鞭毛由线粒体及轴丝组成且具侧鳍结构;精子经冷冻保存后,虽有少部分形态正常,但多数出现尾部断裂、部分线粒体丢失及线粒体内膜嵴和细胞膜受损等现象。研究表明,卵胎生许氏平鲉精子的头部形状和线粒体数与其他卵生鱼类有较为显著的差别,超低温冷冻后,精子形态结构受到较大损伤,推测多数精子受精活力减弱或失去受精能力。     

十溴联苯醚对太平洋鳕精子超微结构的影响

通过扫描电镜和透射电镜观察,研究了不同浓度的十溴联苯醚对太平洋鳕Gadus macrocephalus精子超微结构的影响。结果表明:与对照组相比,浓度为0.5、5、50、500 ng/L的十溴联苯醚对太平洋鳕精子的超微结构无显著影响,而浓度为5000 ng/L的十溴联苯醚对太平洋鳕精子的超微结构影响显著。扫描电镜下观察,在浓度为5000 ng/L十溴联苯醚中暴露2 h和4 h时,太平洋鳕精子的形态与对照组相比无显著变化,8 h时精子细胞核表面出现白色结晶状变化,12 h时精子细胞核破裂。透射电镜下观察,在浓度为5000 ng/L十溴联苯醚中暴露2 h时,太平洋鳕精子的形态与对照组相比无显著变化,4 h时精子出现质膜膨胀,线粒体移位,8 h时出现质膜破裂,线粒体内嵴断裂,甚至溶解,基质变浅,呈空泡样改变,12 h时鞭毛大量脱落堆积,部分微管结构解体甚至消失,线粒体内嵴结构基本消失。研究表明,十溴联苯醚主要作用于精子细胞的质膜、线粒体和鞭毛上,其毒性主要表现为质膜破裂,线粒体空泡样改变,鞭毛大量脱落,轴丝微管结构解体等。     

鲇精子超微结构及pH、温度对其精子活力的影响

为了解鲇Silurus asotus精子的结构特征,应用扫描电镜和透射电镜技术,对体质量为320⁵50 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85550 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85².51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.32.51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.3⁵0.7μm,横切面呈圆形,直径为0.26950.7μm,横切面呈圆形,直径为0.269⁰.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成"9+2"微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.00.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成"9+2"微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.0⁸.5,适宜温度为258.5,适宜温度为25²9℃,当pH为8.0、温度为28℃时,精子活力最强。     

北寄贝精子的超微结构

用扫描和透射电镜研究了北寄贝Pseudocardium sachalinensis成熟精子的超微结构。在扫描电镜下观察,北寄贝精子具有细长的鞭毛,全长为45⁵1μm,头部长为2.051μm,头部长为2.0².6μm。在透射电镜下观察,北寄贝的精子由头部、中段和尾部三部分构成。头部顶体明显突出,呈圆锥状,高密度的顶体物质集中分布于基部四周,呈灯罩状;亚顶体腔呈尖锥状,内含密度较低的均匀物;顶体下方为细胞核,细胞核近似椭圆形,在细胞核内部或边缘有一个或几个形状较为规则的囊泡。中段的主要结构有线粒体和中心体,中段的横切面有4个线粒体围绕在相互垂直的近、远端中心粒构成的中心体周围,中心粒为中空的圆柱形。尾部细长,横切面为典型的“9+2”结构。     

鲇精子超微结构及pH、温度对其精子活力的影响

为了解鲇Silurus asotus精子的结构特征,应用扫描电镜和透射电镜技术,对体质量为320~550 g的鲇成熟精子结构进行了观察。结果表明:鲇精子由头和尾两部分组成,无明显颈部;精子头部近球形,直径为1.85~2.51μm,头部无顶体,头部内有高度密集的细胞核染色质,头部后方凹陷形成植入窝,植入窝内有近端中心粒和远端中心粒,细胞核后方与质膜的间隙较大(称袖套),其内富含细胞质、线粒体和囊泡等细胞器;尾部细长,无主段和尾段之分,长为44.3~50.7μm,横切面呈圆形,直径为0.269~0.308μm,透过横断面可见,鲇精子尾部由轴丝和附属纤维构成,外有一层质膜包裹,轴丝与远端中心粒形成"9+2"微管结构。研究表明,精子活力的适宜pH为7.0~8.5,适宜温度为25~29℃,当pH为8.0、温度为28℃时,精子活力最强。     

刺参精子冷冻保存方法研究

为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl_2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1～Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl_2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1 178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2 817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×10⁶∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。     

刺参精子冷冻保存方法研究

为获得适宜的刺参Apostichopus japonicus精子冷冻保存技术,综合借鉴现有水产动物精子冷冻保存方法,对刺参精子降温方式、冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度进行了筛选,在筛选出适宜的刺参精子降温方式基础上,分别以煮沸消毒海水和超纯水为溶剂,加入葡萄糖、NaCl、KCl、海藻糖、无水CaCl_2和冷冻保存剂[二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)或1,2-丙二醇(1,2-G)]配制冷冻保存剂终体积分数为5%、10%和15%的冷冻保存液(Aj-1～Aj-27),以体积比为1∶1、1∶2和1∶3的比例混合精子与冷冻保存液进行冷冻保存,冷冻48 h后分别在37℃和30℃水浴条件下进行精子复苏,以精子活率、快速运动时间和精子寿命为指标,综合筛选冷冻保存刺参精子的适宜冷冻保存液、精子与冷冻保存液混合比例及复苏温度。结果表明:将刺参精子与以超纯水为溶剂配制的Aj-20精子冷冻保存液(12 g/L葡萄糖、7 g/L NaCl、0.7 g/L KCl、5 g/L海藻糖、0.1 g/L无水CaCl_2和终体积分数为10%的DMSO)以体积比为1∶2的比例混合,以三步法降温方式冷冻保存,并在30℃水浴短时迅速复苏,该技术方法为本研究筛选到的最优刺参精子冷冻保存方法;与本研究中其他冷冻技术方法相比,应用该优选方法冷冻保存的刺参精子在复苏后精子活率最大(19.00±4.00)%、快速运动时间最长(1 178.67 s±14.57 s)、寿命最久(2 817.33 s±93.76 s);应用该优选方法冷冻保存72、120、408 h的精子复苏后受精率可达70%以上(精子与卵子数量比为1×10~6∶1),受精的卵囊孵化率可达到50%。研究表明,本研究中筛选获得的冷冻保存液配方及其冷冻保存方法比较适宜刺参精子的长期冷冻保存,具有应用于生产实践的潜力。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

仿刺参稚参“脱板病”超微病理的研究

利用电镜负染技术对2006年夏季大连地区养殖场患脱板病的仿刺参Apostichopus japonicus稚参组织匀浆液进行了检测。结果发现,提取液中存在大量病毒样粒子,该病毒粒子近似球形,具有囊膜。应用超薄切片电镜技术对患病刺参的超微病理进行研究,并与正常组进行了对照观察,结果发现:在病变细胞内存在大量直径80¹00 nm的具有囊膜的球形病毒样粒子,该病毒粒子以团聚或散落形式存在于细胞质内,并由质膜包被;病变细胞内内质网肿胀,部分核糖体脱落,其周围散落着大量明显呈六边形的病毒核心结构,并出现大量溶酶体残余体形成的髓袢样结构;高尔基体明显肿胀、膨大,线粒体界限模糊,出现嵴脱落;在病变严重的细胞内,可见细胞器崩解后形成的大量空泡结构。但未发现细菌和其他类可疑病原。     

仿刺参精子形态与超微结构的研究

应用扫描和透射电镜观察了仿刺参精子的形态和超微结构。仿刺参精子全长为50μm左右,由头部、颈部和尾部三部分组成。头部呈圆形,直径约1.5μm,头部顶端有一环形凹陷,顶体位于其中,精子核位于其下方。线粒体融合成一个,环绕中心粒复合体形成颈部,长为0.8μm,直径为1.3μm。尾部细长,鞭毛横切面为典型的"9+2"结构,有轴丝共质膜现象。