总氨态氮对海湾扇贝幼体存活和生长的影响

为确定海湾扇贝Argopecten irradias育苗用水的水质指标,进行了总氨态氮对海湾扇贝幼体存活和生长的影响试验。结果表明:在pH为8.20~8.30、水温为21.5~22.5℃、盐度为27~28条件下,总氨态氮对海湾扇贝受精卵孵化率的24 h半数有效浓度(EC_(50))为3.089 mg/L(非离子氨态氮NH_3-N=0.194mg/L),最大毒物允许浓度(MATC)为0.86~1.80 mg/L(非离子氨态氮NH_3-N=0.054~0.113 mg/L);在pH为7.95~8.10、水温为23~25℃、盐度为27~28条件下,总氨态氮对浮游期幼虫(2日龄)存活的48 h半致死浓度(LC_(50))为7.801 mg/L(NH_3-N=0.342 mg/L),96 h LC_(50)为2.445 mg/L(NH_3-N=0.107mg/L),144 h LC_(50)为1.294 mg/L(NH_3-N=0.057 mg/L);对浮游期生长的144 h EC_(50)为2.023 mg/L(NH_3-N=0.089 mg/L);浮游期的MATC为0.37~0.66 mg/L(NH_3-N=0.016~0.029 mg/L);总氨态氮浓度≤2.03 mg/L(NH_3-N≤0.089 mg/L)时,均有幼体变态为稚贝;变态期(眼点出现至变态成稚贝)幼体眼点出现率的192 h EC_(50)为1.460 mg/L(NH_3-N=0.064 mg/L),变态率的408 h EC_(50)为1.927 mg/L(NH_3-N=0.085 mg/L)。研究表明,根据各个时期的EC5推测,海湾扇贝育苗期间,在pH为7.95~8.10条件下总氨态氮浓度控制在0.40 mg/L(NH_3-N=0.018 mg/L)以下最佳,本研究结果为完善海湾扇贝生态学及育苗期间的水质调控技术提供了参考。     

1株虾夷扇贝苗种培育用益生菌的筛选及其对幼体存活和生长的影响

为筛选出虾夷扇贝Patinopecten yessoensis苗种培育用潜在益生菌,采用培养方法从虾夷扇贝幼体及养殖水环境中共分离出300株细菌,经过产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶能力测定,及以灿烂弧菌为指示菌株的拮抗活性测定,从中筛选出既能产酶又拮抗灿烂弧菌Vibrio splendidus的W115菌株。溶血试验结果显示,W115菌株不产生溶血素,不具有潜在的致病性;以终浓度为1×106cells/m L的W115菌株浸浴感染受精后48 h的扇贝幼体49 d,结果显示,该菌株对扇贝幼体是安全的;16S rRNA基因序列同源性分析表明,W115菌株与埃氏假交替单胞菌Pseudoalteromonas espejiana相似性为100%;将该菌株以终浓度1×104cells/m L和1×106cells/m L添加在虾夷扇贝苗种培育水体中,以不加潜在益生菌为对照组,每组设3个平行,养殖扇贝幼体至出库(共49 d),在第11天(壳顶幼体期)、26天(匍匐幼体期)、49天(稚贝期)时测定并计算幼体存活率和特定生长率(SGR),结果显示,1×104cells/m L组3个时期幼体的存活率和第26天匍匐幼体及第49天稚贝的SGRs均显著高于对照组(P<0.05),而1×106cells/m L组3个时期幼体的存活率和SGRs与对照组均无显著性差异(P>0.05)。研究表明,埃氏假交替单胞菌W115菌株可促进虾夷扇贝幼体的存活和生长。     

虾夷扇贝同工酶的生化遗传分析

用聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳,对虾夷扇贝Patinopectenyessoensis的闭壳肌、外套膜、消化盲囊、鳃和性腺5种组织中CAT、MDH、SOD、ME、EST、α-AMY、ADH、ACP和ALP9种同工酶的表达情况进行了分析,记录了20个基因座位,其中8个为多态。并分析了SOD酶谱带特征及虾夷扇贝遗传变异情况。     

虾夷扇贝外套膜胶原蛋白的提取与表征

为探索虾夷扇贝Patinopecten yessoensis加工副产物的高附加值利用,从副产物外套膜中提取经济价值较高的胶原蛋白,并对其理化性质(分子量、溶解性、黏度、紫外吸收、氨基酸组成)和结构特性(圆二色谱、傅里叶红外光谱)进行研究。结果表明:外套膜干基中胶原蛋白含量为13.16%;外套膜胶原蛋白分子主要由α亚基和少量的β、γ亚基组成,外套膜胶原蛋白为典型的Ⅰ型胶原;酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC)均富含甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和羟脯氨酸;胶原蛋白的变性温度约为20℃,与其他物种有所差异;PSC的溶解度高于ASC,二者的等电点均在pH为4左右,且二者的盐溶性变化趋势相似;红外光谱表明,PSC和ASC二级结构间有细微差异,但胃蛋白酶没有影响胶原蛋白的三螺旋结构;圆二色谱显示,ASC的三级结构比PSC的更加稳定,温度升高会影响二者的三级结构。     

不同单元化运输条件对活体虾夷扇贝存活率及主要营养成分的影响

为研究不同单元化运输条件对活体虾夷扇贝Patinopecten yessoensis存活率及其主要营养成分的影响,将净化暂养后的活体虾夷扇贝放入4种不同单元化运输箱中(不加冰聚乙烯保温箱组、加冰聚乙烯保温箱组、低温半导体保温箱组、5℃恒温箱组),测定运输箱内外温度、湿度,以及虾夷扇贝存活率、糖原、粗蛋白质和粗脂肪等指标的变化。结果表明:在密闭的单元化运输条件下,箱内温度及制冷方式影响着活贝的存活率,不加冰聚乙烯保温箱组、加冰聚乙烯保温箱组、低温半导体保温箱组、5℃恒温箱组虾夷扇贝全部死亡的时间分别为48、64、112、104 h;随运输时间的延长,4组虾夷扇贝的糖原、粗蛋白质和粗脂肪含量总体均呈下降趋势,存活期内不同单元化运输条件下的糖原和粗蛋白质含量均呈显著性差异(P<0.05),低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组虾夷扇贝的糖原、粗蛋白质含量随时间的变化缓于其他两组,但64~96 h时,低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组间粗蛋白质含量无显著性差异(P>0.05);存活期内不同单元化运输条件对虾夷扇贝粗脂肪含量的影响不显著(P>0.05),但在0~40 h时其脂肪含量随时间变化显著(P<0.05);低温半导体保温箱组和5℃恒温箱组虾夷扇贝至糖原、粗蛋白质和粗脂肪含量较低所需时间为96 h,比不加冰组长56 h,比加冰组长48 h。研究表明,使用半导体和压缩机有效制冷的低温条件可使得活体虾夷扇贝糖原、粗蛋白质和粗脂肪消耗减缓,存活期延长。     

育苗阶段虾夷扇贝幼体中可培养细菌的多样性

为了研究虾夷扇贝Patinopecten yessoensis育苗过程中5个发育时期(受精卵时期S1、担轮幼虫时期S2、D形幼虫时期S3、壳顶幼虫时期S4、稚贝时期S5)幼体所含可培养细菌的多样性,采用2216E平板涂布法,从每个发育时期的幼体样品中各分离出30株细菌,并对150株菌进行16S rRNA基因测序分析。结果表明:150株细菌归属于2门3纲8目12科16属39种;在门水平,5个时期幼体样品中变形菌门均为优势门,其次为厚壁菌门;在属水平,优势属为弧菌属(51/150)、假交替单胞菌属(43/150)、芽孢杆菌属(16/150)、交替单胞菌属(9/150),占总数的79.3%;其中弧菌属在S1(43.3%)、S2(36.7%)、S3(36.7%)时期均为优势属,在S1时期,次优势属依次为假交替单胞菌属(26.7%)、动性球菌属(10.0%)和枝芽孢杆菌属(6.7%),在S2时期,次优势属依次为假交替单胞菌属(23.3%)、亚硫酸杆菌属(20.0%)和芽孢杆菌属(13.3%),在S3时期,次优势属依次为假交替单胞菌(16.7%)、动性球菌属(13.3%)和交替单胞菌属(10.0%);假交替单胞菌在S4(36.7%)和S5(40.0%)时期均为优势属,在S4时期,次优势属依次为弧菌属(30.0%)、芽孢杆菌属(16.7%)和交替单胞菌属(10.0%),在S5时期,次优势属依次为弧菌属(23.3%)、芽孢杆菌属(16.7%)和Pontibacillus(10.0%)。研究表明,虾夷扇贝育苗过程中不同发育时期的幼体所含可培养细菌种类比较丰富,细菌群落结构存在较大差异。     

大连塔河湾海区虾夷扇贝的性腺发育与繁殖规律

用组织学方法对大连塔河湾海区养殖虾夷扇贝Patinopecten yessoensis的性腺发育和繁殖规律进行了研究。结果表明:根据生殖细胞的发育过程,虾夷扇贝的性腺发育可分为5个时期,即增殖期、生长期、成熟期、排放期和休止期;塔河湾海区浮筏养殖的虾夷扇贝性腺指数峰值出现在3月中旬,为17.27;该扇贝的繁殖期为4～5月,繁殖盛期为4月中下旬,繁殖期水温为5.0～6.8℃。     

捕后虾夷扇贝闭壳肌免疫因子与活品品质评价初探

为探索采捕后活品贝类的品质变化规律,以虾夷扇贝Patinopecten yessoensis为对象,研究了其闭壳肌中酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LSZ)、过氧化氢酶(CAT)等4个非特异性免疫因子的变化规律,试验基于活品虾夷扇贝的商品流通链分别进行湿藏和干藏处理,捕后贮藏分为离水至甲板、运输船中转、港口卸货、基地缓冲池和净化等5个关键环节,共设10个采样点。结果表明:虾夷扇贝闭壳肌中表现出ACP及SOD活力,CAT活力很低,LSZ则未检出活力;在捕后106 h内,ACP活力呈现出先下降再升高的趋势,而SOD活力则呈先升高再下降再升高的趋势,二者与虾夷扇贝所受胁迫强度均有相关性。研究表明,闭壳肌中非特异性免疫因子ACP及SOD可以作为活品扇贝的胁迫应答因子及品质评价指标进行深入研究。     

虾夷扇贝苗种培育水中可培养细菌群落分析

为研究虾夷扇贝Patinopecten yessoensisis苗种培育过程中幼体发育5个时期苗种培育水中(受精卵期水样W1,担轮幼虫期水样W2,D型幼虫期水样W3,壳顶幼虫期水样W4,稚贝期水样W5)可培养细菌的群落组成,采用传统培养方法,从每个水样分离细菌30株,通过16S rRNA基因测序分析鉴定细菌。结果表明:分离的150株细菌可归为2门、3纲、6目、9科、10属、22种;在门水平,W1~W5的优势门均为变形菌门,其次为厚壁菌门;在属水平,假交替单胞菌属为所有水样第一优势属,此外,W1的优势属依次为交替单胞菌属、弧菌属和海杆菌属,W2的优势属依次为弧菌属、交替单胞菌属和Cobetia,W3的优势属依次为弧菌属、交替单胞菌属和芽孢杆菌属,W4的优势属依次为交替单胞菌属、芽孢杆菌属和弧菌属,W5的优势属依次为弧菌属、Pseudophaeobacter、芽孢杆菌属和赤杆菌属。研究表明,扇贝幼体不同发育时期苗种培育水中所含可培养细菌种类比较丰富,细菌群落结构存在差异。     

总氨、亚硝酸氮及养鲍污水对皱纹盘鲍生长的影响

单因子总氨氮(TNH3-N)、亚硝酸氮(NO-2-N)试验表明,当养鲍用水中非离子氨氮(NH3-N)为0 035mg/L以下或NO-2-N为0 8mg/L以下时,对皱纹盘鲍HaliotisdiscushannaiIno幼鲍的生长不产生明显影响;NH3-N对幼鲍生长产生影响的EC5(引起幼鲍生长速度减慢5%的浓度)为0 103mg/L,不产生影响的最大浓度为0 045mg/L。双因素试验结果表明,水中TNH3-N、NO-2-N对幼鲍生长的影响没有交互作用,只是简单的相加作用。经回归表明,养鲍自污染水中,NH3-N是影响幼鲍生长的主要因子,它对幼鲍生长产生影响的EC5为0 022mg/L,不产生影响的最大浓度为0 01mg/L,均比单因子试验结果显著降低。     

溶藻弧菌感染对剑尾鱼HSP70基因表达的影响

用溶藻弧菌Vibrio alginolyticus感染剑尾鱼Xiphophorus helleri,取感染后第0、2、5、8、11 d的活鱼及感染后第2 d濒死鱼,采用半定量RT-PCR方法分别检测HSP70基因在肝胰脏、脾脏、头肾和心脏组织中的表达。结果表明:正常条件下,HSP70在检测的剑尾鱼组织中均不表达;在用溶藻弧菌感染第8 d的剑尾鱼肝胰脏内,HSP70基因被诱导强烈表达,HSP70/β-actin的值为1.80±0.03;在感染第2、5 d的剑尾鱼头肾内,HSP70基因被诱导表达,第8 d HSP70基因强烈表达,感染濒死鱼头肾内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.35±0.02、0.15±0.01、2.00±0.06和0.95±0.05;在剑尾鱼被感染第2、5、8 d,在脾脏内均检测到HSP70基因的表达,感染濒死鱼脾脏内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.30±0.02、0.15±0.01、0.45±0.03和1.55±0.04;仅在感染濒死鱼的心脏中检测到HSP70基因的表达,HSP70/β-actin的值为0.30±0.02;到第11 d HSP70基因表达消失。     

Application of sub-critical water technology for recovery of heavy metal ions from the wastes of Japanese scallop Patinopecten yessoensis

Sub-critical water (sub-CW) technology was used as a new technology with environmental and financial benefits for the recovery of harmful heavy metal ions Cd (II), Zn (II), Cu (II), Fe (II), Mn (II) and Ni (II) in the waste of Japanese scallop Patinopecten yessoensis. The metals are responsible for environmental problems owing to the large amount of the waste. This study proposes a new method using sub-CW treatment to recover the metal ions from scallop waste and simultaneously produce harmless and valuable materials. Reactions were conducted in a temperature range of 473-653 K and for reaction times of 1-60 min. After the sub-CW reaction, four phases existed: an oil phase, metal-soap phase, aqueous phase and solid residual. Some oil was hydrolyzed by the sub-CW reaction and converted to free fatty acids and glycerin. Free fatty acids reacted with metal ions and became metal-soap phase. Both the metal-soap phase and oil phase caught almost all metal ions at low and medium reaction temperatures (473-573 K) from original wastes, although the concentrations of the metal ions in the metal-soap phase were much higher than those in the oil phase. With increasing temperature, these two phases decomposed and the metal ions concentrated in solid residual (un-reacted waste). The binding mechanisms in the oil and metal-soap phases are discussed including the key functional groups involved. The maximum concentrations of metal ions in metal-soap phase were 7225 ppm (Fe), 862 ppm (Zn), and 800 ppm (Cd) at 573 K. The aqueous phase showed the lowest concentration of metal ions especially at temperatures above 550 K (~1.5 ppm).     

氧化鱼油对鲤肝胰脏抗氧化机能及其组织结构的影响

在半纯化饲料中添加质量分数为 3%的新鲜鱼油 (过氧化物值POV为 0 64mmol/kg) 和POV分别为 2 9 64、 59 40和 94 69mmol/kg (以O2 计 )的氧化鱼油 ,投喂1 0 0 g左右 2龄鲤 (Cyprinuscarpio)鱼种 1 5周 ,结果表明 :鲤摄食氧化鱼油后 ,肝胰脏维生素E含量下降 (P <0 0 5) ,抗氧化酶超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性减弱 (P >0 0 5) ,微粒体氧化稳定性降低 (P <0 0 5) ,鱼油氧化程度升高 ,上述变化加强 ;肝胰脏脂肪含量增加 (P >0 0 5) ;肾脏和脾脏增生 (P >0 0 5) ;肝胰脏肝细胞纤维化、线粒体嵴降解和融合。上述系列变化表明氧化鱼油可以破坏鲤肝胰脏抗氧化机能及其正常的组织结构。     

总氨态氮对菲律宾蛤仔早期生长发育的影响

为研究菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum早期发育阶段对总氨态氮(TAN)和非离子氨(UIA)的耐受性,在水温为21~24℃、pH为7.9~8.3、盐度为27~30条件下,开展了TAN对菲律宾蛤仔受精卵、D形幼虫(壳长为103.2μm±3.0μm)和稚贝(壳长为318.1μm±27.3μm)的急性毒性试验。结果表明:TAN对菲律宾蛤仔受精卵孵化率的24 h EC_(50)为7.29 mg/L(UIA浓度为0.502 mg/L);对D形幼虫死亡率的96 h LC_(50)为7.94 mg/L(UIA浓度为0.212 mg/L);对稚贝死亡率的96 h LC_(50)为49.0 mg/L(UIA浓度为2.10 mg/L),对稚贝壳长相对生长的96 h EC_(50)为4.9 mg/L(UIA浓度为0.21 mg/L);对稚贝壳高相对生长的96 h EC_(50)为10.5 mg/L(UIA浓度为0.448 mg/L);菲律宾蛤仔对TAN的耐受能力为稚贝>D形幼虫。研究表明,菲律宾蛤仔育苗期间非离子氨浓度控制在0.020 mg/L以内较好。